Injeção de células osteossarcoma intratibiais para gerar modelos de osteossarcoma ortotópico e metástase pulmonar

Resumo

O presente protocolo descreve a injeção de célula de osteossarcoma intratibia para gerar modelos de camundongos com osteossarcoma ortotópico e lesões de metástase pulmonar.

Resumo

O osteossarcoma é o câncer ósseo primário mais comum em crianças e adolescentes, sendo os pulmões o local metastático mais comum. A taxa de sobrevivência de cinco anos de pacientes com osteossarcoma com metástase pulmonar é inferior a 30%. Portanto, a utilização de modelos de camundongos imitando o desenvolvimento do osteossarcoma em humanos é de grande importância para a compreensão do mecanismo fundamental da osteossarcoma carcinogênese e metástase pulmonar para desenvolver novas terapêuticas. Aqui, procedimentos detalhados são relatados para gerar os modelos primários de osteossarcoma e metástase pulmonar através da injeção de intratibia de células osteossarcoma. Combinados com o sistema de bioluminescência ou imagem viva de raios-X, esses modelos de camundongos vivos são utilizados para monitorar e quantificar o crescimento e a metástase do osteossarcoma. Para estabelecer esse modelo, uma matriz de membrana de porão contendo células osteossarcoma foi carregada em uma seringa de micro volume e injetada em uma tíbia de cada rato atímico após ser anestesiada. Os camundongos foram sacrificados quando o osteossarcoma primário atingiu a limitação de tamanho no protocolo aprovado pela IACUC. As pernas com osteossarcoma e os pulmões com lesões de metástase foram separados. Esses modelos são caracterizados por um curto período de incubação, crescimento rápido, lesões graves e sensibilidade no monitoramento do desenvolvimento de lesões metastáticas primárias e pulmonares. Portanto, estes são modelos ideais para explorar as funções e mecanismos de fatores específicos na carcinogênese osteossarcoma e metástase pulmonar, o microambiente tumoral e avaliar a eficácia terapêutica in vivo.

Introdução

O osteossarcoma é o câncer ósseo primário mais comum em crianças e adolescentes ^1,2, que se infiltra principalmente no tecido circundante, e até mesmo metástase nos pulmões quando os pacientes são diagnosticados. A metástase pulmonar é o principal desafio para a terapia osteossarcoma, e a taxa de sobrevivência de cinco anos de pacientes com osteossarcoma com metástase pulmonar permanece tão baixa quanto 20%-30%^3,4,5. No entanto, a taxa de sobrevivência de cinco anos de osteossarcoma primário foi aumentada para cerca d....

Protocolo

Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo comitê de bem-estar animal da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai. Camundongos atrímicos balb/c machos de quatro semanas de idade foram aclimatados por uma semana antes da cirurgia para injeção ortotópica de células osteossarcoma. Os camundongos foram alojados em gaiolas de camundongos ventiladas individualmente com cinco ratos por gaiola em um ciclo claro/escuro de 12 horas com acesso ad libitum à alimentação spf e água estéril.

1. Preparação de células

1. No dia da injeção de célula osteossarcoma (143B-Luciferase), lave 80%-90% de células con....

Resultados

Modelos pulmonares ortotópicos (primários) bem sucedidos (primários) e metastáticos dependem da injeção ortotópica precisa das células osteossarcoma. Aqui, um modelo ortotópico (primário) de osteossarcoma através da injeção de célula osteossarcoma intratibial foi desenvolvido com sucesso. A Figura 3A mostra um rolamento ortotópico representativo (primário) osteossarcoma, e a Figura 3B mostra um representante isolado ortotópico (primário) osteossarcoma. .......

Discussão

A injeção ortotópica de células osteossarcoma é um modelo ideal para estudar a função e o mecanismo de fatores específicos na carcinogênese e desenvolvimento da osteossarcoma para avaliar a eficácia terapêutica. Para evitar diferenças no crescimento do tumor, a maioria das células de osteossarcoma ativas a 80%-90% confluentes com o mesmo número são cuidadosamente injetadas na tíbia de cada rato, e o tempo de experimentação celular é estritamente controlado sem afetar a viabilidade celular. Como as aglomerações celulares .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Contador automático de células	Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd	IC1000	Contando células
Máquina de anestesia	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd	R500IP	O equipamento de camundongos
de anestesia BALB/c camundongos atímicos	Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.	/	animal
Matriz de membrana basal	Shanghai Uning Bioscience Technology Co., Ltd	356234, BD, Matrigel	ressuspende células
Sistema de imagem de bioluminescência	Shanghai Baitai Technology Co., Ltd	Vieworks	rastreando o crescimento do tumor e metástase pulmonar, se a célula de injeção for marcada por luciferase
Tubo de centrífuga (15 mL)	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	430790, Corning	Centrifuge as células
isoflurano	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd	VETEASY	Anesthesia mice
MEM media	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	LM-E1141	Meio de cultura de células
Seringa de microvolume	Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd	0-50 μ L	Injete células precisas na tíbia
Solução salina tamponada com fosfato	Beyotime Biotechnology	ST447	lave as células do osteossarcoma humano
Seringas de 1 ml	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd	20200411	perfuração
da linha celular 143B	ATCC	CRL-8303	linha celular de osteossarcoma
Tripsina (0,25%)	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	25200056, tratamento	de tripsina Gibco de células
Trypan blue	Beyotime Biotechnology	ST798	Células de coloração para avaliar o
vetor de atividade (pLV-luciferase)	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	VL3613
Plasmid Lipofectamine 2000	Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd	11668027, Thermo	fisher Plasmid transfecção reagente
de raios-X sistema	Brook (Beijing) Technology Co., Ltd	Imagens	de raios-X FX PRO foram obtidas para detectar o crescimento do tumor