Artigo de método

Estabelecimento de um modelo de pancreatite aguda grave do rato usando injeção retrógrada de taurocholate de sódio no ducto biliopancreático

DOI:

10.3791/63129

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1 de abril de 2022

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1Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Soochow University, 2MOE Engineering Center of Hematological Disease, Soochow University, 3Cyrus Tang Hematology Center, Soochow University, 4National Clinical Research Center for Hematologic Diseases, the First Affiliated Hospital of Soochow University, 5MOH Key Lab of Thrombosis and Hemostasis, Jiangsu Institute of Hematology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 6Collaborative Innovation Center of Hematology, Soochow University

Neste artigo

Resumo

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Um modelo de rato de pancreatite aguda grave é descrito aqui. O procedimento aqui apresentado é muito rápido, simples e acessível, permitindo, assim, potencialmente o estudo dos mecanismos moleculares e diferentes intervenções terapêuticas na pancreatite aguda de forma conveniente.

Resumo

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A prevalência de pancreatite aguda (AP), especialmente pancreatite aguda grave (SAP), está aumentando anualmente em faixas etárias mais jovens. No entanto, faltam tratamentos eficazes na prática clínica atual. Com a fácil acessibilidade das cepas transgênicas e eliminatórias e seu pequeno tamanho, que permite doses mínimas de medicamentos necessários para avaliação in vivo , um modelo experimental bem estabelecido em camundongos é preferido para a pesquisa ap. Além disso, a SAP induzida através de taurocholate de sódio (TC) é atualmente um dos modelos mais utilizados e caracterizados. Este modelo tem sido investigado para novas terapias e possíveis eventos moleculares durante o processo de AP. Aqui, apresentamos a geração de um modelo de mouse AP usando taurocholate de sódio e uma simples microsinga caseira. Além disso, também fornecemos a metodologia para a histologia subsequente e testes sorológicos.

Introdução

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Pancreatite aguda (AP) é uma inflamação aguda do pâncreas caracterizada pela obstrução do duto pancreático principal com distensão ductal subsequente e autogestão do pâncreas por suas enzimas anormalmente ativadas. Suas manifestações clínicas incluem inflamação local ou sistêmica, dor abdominal e elevação do amilase sérico1,2. De acordo com a classificação de gravidade3, a AP pode apresentar-se em formas leves, moderadas e graves, e entre elas, a pancreatite aguda grave (SAP) é a condição mais preocupante devido à sua alta taxa de mortalidade superior a 30%4. Nos....

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Protocolo

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Todos os experimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Soochow. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob anestesia total. Os analgésicos não foram utilizados para evitar interferências no curso natural da doença segundo as literaturas anteriores28,29. A aprovação da falta de analgesia também foi concedida pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Soochow.

1. Preparação

  1. Acelere um rato C57BL/6 tipo selvagem 8-12 h antes da cirurgia.
  2. Prepare 5% (p/v) solução TC (93 mM) diluída em c....

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Resultados

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Seguindo cuidadosamente as instruções acima, obtivemos uma duração média da cirurgia de aproximadamente 40 min. Os camundongos estavam ligeiramente inativos e perderam aproximadamente 0,5-1,75 g, 0,85-1,85 g e 0,5-4,73 g de peso em 24 h, 48 h e 72 h pós-operação, respectivamente (Figura 2).

Desde o momento da conclusão da cirurgia até 24 horas após a operação, à medida que a doença se desenvolveu, os camundongos ficaram inativos e apresentaram respostas e ações le.......

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Discussão

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O modelo SAP induzido pelo TC é uma excelente ferramenta de pesquisa. Como mostrado neste estudo, este modelo é muito facilmente realizado em laboratórios gerais sem empregar dispositivos específicos. Quando usado em combinação com histologia e análise bioquímica, fornece uma abordagem de custo (reagentes baratos) e economia de tempo (24h de janela de tempo) para induzir e avaliar AP. Ajustar a concentração de TC também oferece a possibilidade de produzir ap. Perides et al. também empregaram TC para induzir SAP em

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Agradecimentos

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Somos gratos pelo apoio das seguintes bolsas: uma Bolsa de Pesquisa Translacional da NCRCH [2020WSA01], uma Bolsa Científica KJXW da Comissão de Saúde para Jovens Acadêmicos de Suzhou [KJXW2020002], um Plano de Ciência e Tecnologia da Cidade de Suzhou (SKY2021038 e SKJY2021050), uma bolsa do Programa Acadêmico Prioritário de Desenvolvimento das Instituições de Ensino Superior de Jiangsu (PAPD) e um Plano de Pesquisa Primária & Desenvolvimento Social da Província de Jiangsu (BE2018659).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
0,5% iodóforoShanghai Likang Desinfetante3101024 mL / mouse
0,9% cloreto de sódioSinopharm Group Co., Ltd.100193180,8 mL / camundongo
1% Pentobarbital sódicoSigmaP37610,2 -0,25 mL / camundongo
25 μ Seringa de microlitro de ponta plana LGaoge, XangaiA124019
4% ParaformaldeídoBeyotime, Nantong, ChinaP0099-500ml
Taurocolato de sódio a 5% (TC)AladdinS100834-5g10 μ L / SAP mouse
6-0 Microssutura de nylon estéril com agulha rosqueada (1/2 círculo)Cheng-He20093
75% álcoolSinopharm Group Co., Ltd.100092184 mL/mouse
8-0 Microssutura de nylon estéril com agulha rosqueada (círculo 3/8)Cheng-He19064
ALT Kit de ensaio de atividadeEPNK, Anhui, ChinaALT0012
Kit de ensaio de amilaseEPNK, Anhui, ChinaAMY0012
Braçadeira de buldogue pequena angular com mandíbula de 12 mm (3 cm)Cheng-HeHC-X022
aparas de álamo ou fragmentos para cama de camundongoBeijing Vital River Laboratory Animal TechnologyVR03015
AST Activity Assay KitEPNK, Anhui, Chinade ensaio de
BUN)EPNK, Anhui, ChinaBUN0011
camundongo C57BL/6 BeijingVital River Laboratory Animal Technology213
Kit de ensaio de creatinaEPNK, Anhui, China
Característica lâmina de micrótomoBeyotime, Nantong, ChinaE0994
Fórceps hemostático (9,5 cm, curvo)JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.JC3901
Lipase Assay KitJiancheng, Nanjing, ChinaA054-2-1
micrótomoLeica biosystem, AlemanhaRM2245
Mindray analisador bioquímicoMindray, Shenzhen, ChinaBS-420
MPO Assay KitJiancheng, Nanjing, ChinaA044-1-1
Ração de rato normaltrófica, Nantong, ChinaLAD 1000
Fosfato tamponado solução salinaBeyotime, Nantong, ChinaC0221A
Braçadeira micro-bulldog reta com mandíbula de 5 mm (1,5 cm)JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.W40130
Pinça reta ou curva (11,0 cm)Tesoura reta Cheng-HeHC-X091A ou HC-X090A
(10,0 cm)Cheng-He, Ningbo, ChinaHC-J039102
Centrífuga Thermo ScientificThermo Scientific, EUAMultifuge X1R
Kit nitrogênio ureico no sangue AST0012 (CRE0012

Referências

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  1. Lee, P. J., Papachristou, G. I. New insights into acute pancreatitis. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 16 (8), 479-496 (2019).
  2. Mandalia, A., Wamsteker, E. J., DiMagno, M. J. Recent advances in understanding and managing acute pancreatitis. F1000Research.....

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