Apresentamos um método de injeção celular através da tecnologia de jato de água livre de agulhas, juntamente com uma sequência de investigações pós-entrega em termos de viabilidade celular, proliferação e medidas de elasticidade.
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Artigo de método
Injeção de células de stroma derivadas de tecido adiposo porcina através da tecnologia waterjet
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
A incontinência urinária (UI) é uma condição altamente prevalente caracterizada pela deficiência do músculo esfíncter uretral. Os ramos da medicina regenerativa, particularmente a terapia celular, são novas abordagens para melhorar e restaurar a função de esfíncter uretral. Embora a injeção de células funcionais ativas seja realizada rotineiramente em ambientes clínicos por agulha e seringa, essas abordagens têm desvantagens e limitações significativas. Neste contexto, a tecnologia de jato d'água livre de agulhas (WJ) é um método viável e inovador que pode injetar células viáveis por cistoscopia guiada visual no esfíncter uretrais. No presente estudo, utilizamos o WJ para fornecer células estromais derivadas do tecido adiposo porcina (pADSCs) em tecido uretral cadavérico e, posteriormente, investigamos o efeito da entrega de WJ no rendimento e viabilidade celular. Também avaliamos as características biomecânicas (ou seja, elasticidade) por medições de microscopia de força atômica (AFM). Mostramos que o WJ entregou pADSCs foram significativamente reduzidos em sua elasticidade celular. A viabilidade foi significativamente menor em relação aos controles, mas ainda está acima de 80%.
Introdução
A incontinência urinária (UI) é uma doença generalizada com prevalência de 1,8 - 30,5% nas populações europeias1 e caracteriza-se principalmente pelo mau funcionamento do esfíncter uretral. Do ponto de vista clínico, o tratamento cirúrgico é frequentemente oferecido aos pacientes quando terapias conservadoras ou fisioterapia não conseguem abordar e aliviar os sintomas emergentes.
A terapia celular para o potencial reparo regenerativo do mau funcionamento do complexo esfíncter vem surgindo como uma abordagem vanguardista para o tratamento da patologia da interfacedo usuário 2,3
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Protocolo
As amostras de tecido adiposo porcina foram obtidas do Instituto de Cirurgia Experimental da Universidade de Tuebingen. Todos os procedimentos foram aprovados pelas autoridades locais de bem-estar animal sob o número de experimento animal CU1/16.
1. Isolamento de células estromais derivadas do tecido adiposo suíno
- Use tecido adiposo porcino entregue do Instituto de Cirurgia Experimental em um tubo de centrífuga de 50 mL para o laboratório.
- Transfira o tecido para uma placa de Petri estéril sob o banco estéril e pique-o com dois bisturis (Nº 10) para pequenos fragmentos e mingau.
NOTA: A tesoura também....
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Resultados
Após a entrega de células através das duas abordagens, a viabilidade das células entregues através da WN (97,2 ± 2%, n=10, p<0,002) foi maior quando comparada às injeções por WJ utilizando as configurações E60-10 (85,9 ± 0,16%, n=12) (Figura 2). Os resultados da avaliação biomecânica mostraram que: as injeções de WN de células em fluido de captura não apresentaram diferença significativa em relação ao moduli elástico (EM; 0,992 kPa) quando comparado com os controles (1.176 kPa;
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Discussão
No presente estudo, demonstramos e apresentamos uma abordagem passo a passo para o procedimento de entrega de células WJ e empregamos uma sequência de investigações quantitativas para avaliar o efeito da entrega de WJ em características celulares: viabilidade celular e características biomecânicas (ou seja, EM). Após a injeção de WJ, 85,9% das células colhidas eram viáveis. Em termos de injeção de WN, 97,2% das células mantiveram sua viabilidade após a injeção. Assim, a abordagem do WJ preenche um requisito absoluto para.......
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Divulgações
Os autores J.K., M.D., T.A., A.S., W.K.A. não têm nada a revelar. Os autores W.L. e M.D.E. são funcionários da ERBE Medizintechnik Tenente Tübingen, produtora do ERBEJet2 e do protótipo WJ empregado neste estudo.
Agradecimentos
Agradecemos aos nossos coautores das publicações originais pela ajuda e apoio.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tubo de centrífuga de 50 mL | Greiner BioOne | 227261 | |
| 1 mL BD Luer-LokTM Seringa | BD Plastik Inc | n.a.100 | |
| µ peneira de células m | Greiner BioOne | 542000 | |
| tubo de centrífuga de 15 mL | Greiner BioOne | 188271 | |
| frasco de cultura de tecidos de 75 cm2 | Corning Incorporated | 353136 | |
| cabeça AFM | (CellHesion 200) JPK | JPK00518 | |
| software de processamento | AFM Bruker | JPK00518 | |
| software | AFMSistema Bruker | JPK00518 | |
| AFM Cell Hesion 200 | Bruker | JPK00518 | |
| All-In-One-Al cantilever | Budget Sensors | AIO-10 | ponta A, Modo Conatct, Forma: Feixe Constante de Força: 0,2 N/m (0,04 - 0,7 N/m) Frequência de Ressonância: 15 kHz (10 - 20 kHz) Comprimento: 500 µ m (490 - 510 µ m) Largura: 30 µ m (35 - 45 µ m) Espessura: 2.7 µ m (1,7 - 3,7 µ m) |
| Solução de anfotericina B | Sigma | A2942 | 250 µ g/ml |
| Microscópio de Força Atômica (AFM) | CellHesion 200, JPK Instruments, Berlim, Alemanha | JPK00518 | |
| BD Microlance 3 18G | BD | 304622 | |
| albumina de soro bovino | Gibco | A10008-01 | |
| Cantilever | All-In-One-AleTl, Budget Sensors, Sofia, Bulgária | AIO-TL-10 | ponta A, k ¼ Hemocitômetro descartável C-chip de 0,2 N/m |
| Centrífuga NanoEnTek | 631-1098 | ||
| : Rotina 420R | Hettich Zentrifugen | ||
| Collagenase, Tipo I, pó | Gibco | 17100-017 | |
| Dulbecco' s Águia Modificada' s Medium - low glucose | Sigma | D5546 | |
| Bisturi descartável de penas (N.º 10) | Feather | 02.001.30.010 | |
| soro bovino fetal (FBS) | Sigma | F7524 | |
| HEPES (1 M) | Microscópio | H3662 | |
| (Integrado com AFM) | AxioObserver D1, Carl Zeiss Microscopy, Jena, Alemanha | L201306_ 03 | |
| bolsas de laboratório | Marca | 759705 | |
| Meio L-15 da Leibovitz sem l-glutamina | Merck | F1315 | |
| Meio L-15 da Leibovitz sem L-glutamina | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha) | F1315 | |
| L-glutamina | Lonza | BE 17-605C1 | 200 mM |
| LIVE/DEADTM Kit | de Viabilidade/CitotoxicidadeInvitrogen by Thermo Fisher Scientific | L3224 | Calcein AM e EthD-1 são usados a partir deste kit. |
| Software do microscópio: Zen 2.6 | Zeiss | ||
| Microscópio: AxioVertA.1 | Zeiss | ||
| Nelaton-Cateter fêmea | Bicakcilar | 19512051 | |
| Penicilina-Estreptomicina | Gibco | 15140-122 | 10000 U/ml Penicilina 10000 µ g/ml |
| associado ao AFM | Bruker | T-05-0117 | |
| Aquecedor de placa de Petri associado ao AFM | JPK Instruments AG, Berlim, Alemanha | T-05-0117 | |
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Gibco | 10010-015 | |
| Software estatístico: SPSS Statistics 22 | |||
| Placa de Petri estéril - CellStar | Greiner BioOne | 664160 | |
| Placas de cultura de tecidos | TPP AG | TPP93040 | |
| Placas de cultura de tecidos | TPP Techno Plastic Products AG, Trasadingen, Suíça | TPP93040 | |
| Trypan Blue 0,4% 0,85% NaCl | Lonza | 17-942E | |
| Solução de tripsina-EDTA | Sigma | T3924 | |
| Jato de água: dispositivo ERBEJET2 | Erbe Elektromedizin GmbH | ||
| Williams Agulha de Injeção Cistoscópica | Cook Medical | G14220 | 23G, 5.0 Fr, 35 cm |
Referências
- Milsom, I., et al. Global prevalence and economic burden of urgency urinary incontinence: a systematic review. European Urology. 65 (1), 79-95 (2014).
- Lee, J. Y., et al.
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Reimpressões e permissões
