Agravamento da Isquemia do Miocárdio sobre exposição de matéria particulada no modelo animal de aterosclerose

Resumo

Este protocolo descreve um modelo animal composto com exposição a material particulado (PM) que agrava a isquemia miocárdica com aterosclerose.

Resumo

Os problemas de saúde causados pela poluição do ar (especialmente a poluição das partículas) estão recebendo cada vez mais atenção, especialmente entre pacientes com doenças cardiovasculares, o que agrava transtornos complicados e causa mau prognóstico. O modelo simples de isquemia miocárdica (MI) ou material particulado (PM) é inadequado para tais estudos de doenças com múltiplas causas. Aqui, foi descrito um método para a construção de um modelo composto que combina exposição à PM, aterosclerose e isquemia do miocárdio. Os camundongos apoE^-/− foram alimentados com uma dieta rica em gordura por 16 semanas para desenvolver aterosclerose, a instilação traqueal da suspensão padrão pm foi realizada para simular a exposição pulmonar da PM, e a artéria coronária descendente anterior esquerda foi ligalada uma semana após a última exposição. A instilação traqueal da PM pode simular exposição pulmonar aguda, reduzindo significativamente o custo do experimento; a clássica ligatração da artéria descendente anterior com intubação traqueal não invasiva e um novo dispositivo de expansão auxiliar podem garantir a taxa de sobrevivência do animal e reduzir a dificuldade da operação. Este modelo animal pode simular razoavelmente as alterações patológicas do infarto do miocárdio agravado pela poluição do ar e fornecer referência para a construção de modelos animais relacionados a estudos envolvendo doenças com múltiplas causas.

Introdução

A poluição do ar tem sido associada à alta mortalidade por todas as causas e contribuiu com uma carga significativa da doença mais do que a soma da poluição da água, poluição do solo e exposição ocupacional¹. Um relatório da OMS revelou que a poluição atmosférica ao ar livre causou 4,2 milhões de mortes prematuras em ambas as cidades e áreas rurais em todo o mundo em 2016². 91% das pessoas em todo o mundo vivem em locais onde a qualidade do ar excede os limites^de diretrizes da OMS 2. Além disso, a matéria particulada fina (PM) (≤2,5 μm de diâmetro, PM_2,5) é reconhecida como a ameaça mai....

Protocolo

Todas as atividades animais descritas aqui foram aprovadas pelo Comitê de Ética Animal do Instituto de MateriaMedim Chinês, Academia chinesa de Ciências Médicas Chinesas. Foram utilizados para o estudo camundongos machos ApoE^−/− (C57BL/6 de 6 a 8 semanas de idade).

1. Preparação experimental

1. Preparar anestésicos tribromoetanol (15 mg/mL): dissolver 0,75 g de tribromoetanol em 1 mL de álcool tert-amilo (ver Tabela de Materiais). Após a dissolução completa, dilui-o a 50 mL com soro fisiológico estéril. Armazene a solução a 4 °C em um recipiente estéril e evite a exposição à luz.
   NOTA: ....

Resultados

Os camundongos foram eutanizados 24 h após a ligadura da artéria coronária, e o sangue foi coletado após anestesia. Os camundongos foram anestesiados por tribromoetanol (conforme o passo 3.2), e a amostra de sangue foi coletada do seio retroorbital. O coração foi colhido, e o grau de Isquemia foi examinado por 2,3,5-Triphenyltetrazolium Cloreto (TTC) (Figura 1). Os tecidos normais ficam vermelhos quando o TTC reage com desidrogenase de succinato, enquanto os tecidos isquêmic.......

Discussão

O estabelecimento de um modelo animal composto é ligeiramente diferente do modelo MI único. Manter uma alta taxa de sobrevivência é um desafio no desenvolvimento do modelo composto. A gravidade da aterosclerose em camundongos ApoE^−/− se tornará mais severa com a extensão do tempo de alimentação de alta gordura⁷, e a fraqueza dos camundongos leva ao aumento da mortalidade. Portanto, é necessário monitorar a condição dos camundongos durante o experimento continuamente e ajustar o tempo pa.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
2,2,2-Tribromoethanol	Sigma-Aldrich	T48402
75% desinfetante
Ventilador para animais	Shanghai Alcott Biotech	ALC-V8S
Cotonetes			estéreis
para bebês			Estéril, aproximadamente 3 mm de diâmetro
Prato	de culturaCorning	430597	150 mm x 25 mm
Diesel Particulate Matter	National Institute of Standards Technology	1650b
		dissecação	Cerca de 25 x 17 cm. A placa de dissecação pode ser substituída por uma placa de madeira do mesmo tamanho
Dieta rica em gordura para ratos			Prescrição: gema de ovo em pó 10%, banha de porco 10%, esterol 1%, alimentação de manutenção 79%
Iodóforo desinfetante
LED holofote			5 V, 3 W, com mangueiras e braçadeiras Bola
fio de seda médica	Shanghai Medical Suture Needle Factory Co., Ltd.	-	0-0
Fita médica	3M	1527C-0
Micro Vascular Hemostática Forceps	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de Instrumentos Cirúrgicos	W40350
Porta-agulhas	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de Instrumentos Cirúrgicos	JC32010
Solução salina
normalTesoura oftálmica	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de instrumentos cirúrgicos	Y00040
Pinça oftálmica, 10 cm, curva, com ganchos	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de instrumentos cirúrgicos	JD1080
Pinça oftálmica, 10 cm, curva, com dentes	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de instrumentos cirúrgicos	JD1060
Pontas de pipeta	Axygen	T-200-Y-R-S	0-200 μ L
Pipeta	eppendorf	3121000074	100 uL
Pino			Aproximadamente 4,5 cm de comprimento, para fazer ferramentas de abertura do peito
Cânulas intravenosas para pequenos animais	Baayen healthcare suzhou	BAAN-322025	CATETER I.V 22FG x 25 MM
Agulha de sutura com rosca	Shanghai Medical Suture Needle Factory Co., Ltd.	-	6-0, linha de nylon
agulha de sutura com linha	JinHuan Medical	F503	5-0
Seringa			1 mL
Terc-amílico álcool
Zoom-microscópio estéreo	Mshot	MZ62

de álcool de algodão Placa de de de segurança