É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Minhoca de Tabaco como um sistema modelo de insetos para estudos pré-clínicos canabinoides

2.5K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/63228

⸱

29 de dezembro de 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Cannabis Research, Colorado State University-Pueblo, 2Department of Biology, Colorado State University-Pueblo, 3Department of Chemistry, Colorado State University-Pueblo, 4Chuncheon Bioindustry Foundation

Neste artigo

Resumo

O presente protocolo fornece informações instrucionais para o uso do tromfo de tabaco Manduca sexta na pesquisa canabinoide. O método descrito aqui inclui todos os suprimentos e protocolos necessários para monitorar alterações fisiológicas e comportamentais do modelo de insetos em resposta ao tratamento do canabidiol (CBD).

Resumo

Com maior atenção aos canabinóides na medicina, vários organismos modelo de mamíferos têm sido usados para elucidar suas funções farmacêuticas desconhecidas. No entanto, muitas dificuldades permanecem na pesquisa de mamíferos, o que requer o desenvolvimento de organismos modelo não-mamíferos para a pesquisa canabinoide. Os autores sugerem o chifre de tabaco Manduca sexta como um novo sistema de modelo de insetos. Este protocolo fornece informações sobre a preparação da dieta artificial com quantidades variadas de canabidiol (CBD), criação de um ambiente de cultivo e monitoramento de suas mudanças fisiológicas e comportamentais em resposta ao tratamento cbd. Resumidamente, ao receber ovos de vermes, os ovos foram permitidos de 1 a 3 dias a 25 °C em um ciclo claro-escuro de 12:12 para eclodir antes de serem distribuídos aleatoriamente no controle (dieta artificial à base de germes de trigo; AD), veículo (AD + 0,1% óleo de triglicerídeo de cadeia média; Óleo mct) e grupos de tratamento (AD + 0,1% MCT + 1 mM ou 2 mM de CBD). Uma vez que a mídia foi preparada, 1ª larva instar foram colocadas individualmente em um tubo de ensaio de 50 mL com um espeto de madeira, e então o tubo de ensaio foi coberto com um pano de queijo. As medições foram tomadas em intervalos de dois dias para respostas fisiológicas e comportamentais à administração do CBD. Este simples procedimento de cultivo permite que os pesquisadores testem grandes espécimes em um determinado experimento. Além disso, os ciclos de vida relativamente curtos permitem que os pesquisadores estudem o impacto dos tratamentos canabinoides ao longo de várias gerações de uma população homogênea, permitindo que os dados apoiem um design experimental em organismos de modelos de mamíferos mais altos.

Introdução

Nos últimos anos, a atenção pública tem sido centrada nos canabinoides devido ao seu potencial terapêutico, incluindo o tratamento da epilepsia1, doença de Parkinson2, esclerose múltipla3 e várias formas de câncer4,5,6 com canabidiol (CBD). Como a Cannabis é legalizada como uma mercadoria agrícola na Lei de Melhoria Agrícola de 2018, a Lei Pública 115-334 (a Lei da Fazenda 2018), a Cannabis e seus derivados canabinóides nas indústrias alimentícia, cosmética e farmacêutica aumentaram exponencialmente. Além disso, isolados de grau clínico de canabinoides únicos e misturas canabinoides foram testados com sucesso em indivíduos humanos7, linhas celulares5,8 e diversos sistemas de modelo animal9,10.

Um ensaio clínico seria ideal para validar a eficácia e os efeitos adversos dos canabinoides em uma doença específica. No entanto, existem inúmeros desafios em ensaios clínicos, incluindo aprovação ética/IRB, recrutamento e retenção dos sujeitos11. Para superar esses obstáculos, várias linhas de células humanas foram usadas porque as linhas celulares derivadas do homem são econômicas, fáceis de manusear, podem contornar as questões éticas e fornecer resultados consistentes e reprodutíveis, pois as linhas celulares são uma "população pura de células que não têm contaminação cruzada de outras células e produtos químicos"12.

Alves et al. (2021)13 testaram CBD de forma dependente de dose nos trophoblastos placentários, que são células especializadas da placenta que desempenham um papel essencial na implantação e interação com o útero materno deciditizado14. Seus resultados mostraram que o CBD causou perda de viabilidade celular, interrupção da progressão do ciclo celular e indução da apoptose. Essas observações demonstram os potenciais impactos negativos do uso da Cannabis por mulheres grávidas13. Da mesma forma, uma série de linhas celulares também foram utilizadas para examinar os efeitos farmacológicos do CBD em doenças humanas, em particular, várias formas de câncer. Os estudos in vitro demonstraram com sucesso efeitos anticu câncer em células cancerígenas pancreáticas15, mama8 e colorretal16. No entanto, embora esteja amplamente disponível e fácil de manusear, linhas celulares específicas como HeLa, HEK293 são propensas a alterações genéticas e fenotípicas devido a alterações em suas condições de crescimento ou manuseio17.

Na pesquisa da Cannabis, vários sistemas de modelos animais, que vão desde pequenos animais como mouse18, cobaia-pig19 e coelho19 até animais de grande porte como canino20, leitão21, macaco22, cavalo23, têm sido usados para explorar efeitos terapêuticos desconhecidos. Os camundongos têm sido o sistema de modelo animal mais preferido para a pesquisa canabinoide devido à sua semelhança anatômica, fisiológica e genética com os humanos24. Mais significativamente, os camundongos têm receptores CB1/2 em seu sistema nervoso, que estão presentes em humanos. Eles também têm um ciclo de vida mais curto do que os seres humanos, com manutenção mais fácil e recursos genéticos abundantes, tornando muito mais fácil monitorar os efeitos dos canabinoides durante todo um ciclo de vida. O sistema mamífero é amplamente utilizado e demonstrou com sucesso que o CBD alivia distúrbios convulsivos1, transtorno de estresse pós-traumático9, úlceras bucais25 e sintomas semelhantes a demência10. O modelo de camundongos também possibilitou um estudo de interação social de indivíduos dentro de uma comunidade que é extremamente difícil em animais de grande porte e humanos26.

Apesar de todas as vantagens do sistema de modelo animal, ele ainda é caro e requer cuidados intensivos durante a administração de medicamentos e coleta de dados. Além disso, há escrutínio do uso de camundongos em pesquisas devido à irreprodutividade e má recapitulação das condições humanas devido a limitações no design experimental e rigor27.

Com a crescente demanda por estudos médicos/pré-clínicos de canabinóides, é necessário um sistema modelo não-mamífero. Modelos invertebrados tradicionalmente conferiam benefícios distintos sobre modelos de vertebrados. Os benefícios significativos incluem a facilidade e o baixo custo de criar muitos espécimes e permitir que os pesquisadores monitorem múltiplas gerações de populações geneticamente homogêneas28. Um estudo recente comprovou que a mosca-das-frutas, Drosophila melanogaster, é um sistema eficaz de modelo de insetos para investigar funções farmacológicas de canabinóides na modulação dos comportamentos alimentares29. Entre os sistemas de modelos de insetos, os autores se concentraram na minhoca do tabaco, manduca sexta, também conhecida como mariposa de esfinge carolina ou mariposa falcão, como um novo sistema modelo de insetos para pesquisa canabinoide.

Manduca sexta pertence à família de Sphingidae. O inseto é a praga vegetal mais comum no sul dos Estados Unidos, onde se alimentam de plantas solanáceas. O modelo de insetos tem uma longa história em pesquisas em estudos de fisiologia de insetos, bioquímica, neurobiologia e interação medicamentosa. O portfólio de pesquisa de Manduca sexta inclui uma sequência de genomas, permitindo uma compreensão em nível molecular dos processos celulares essenciais30. Outro benefício crucial deste sistema modelo é o seu grande tamanho, atingindo mais de 100 mm de comprimento e 10 g de peso nos 18-25 dias de desenvolvimento larval. O tamanho grande permite que os pesquisadores monitorem facilmente as mudanças morfológicas e comportamentais em tempo real em resposta ao tratamento do CBD. Além disso, devido ao tamanho, as respostas eletrofisiológicas foram examinadas com o sistema nervoso abdominal, incluindo gânglios dissecados das larvas sem configurações de microscópio de alta resolução. O recurso único permite que os pesquisadores investiguem prontamente respostas agudas e de longo prazo aos canabinoides administrados.

Apesar de tal versatilidade, M. sexta só recentemente foi explorado por sua adequação como modelo experimental para estudos de Cannabis e canabinoides. Em 2019, os autores utilizaram pela primeira vez o sistema modelo de insetos para abordar a hipótese de que a Cannabis evoluiu para produzir canabidiol para se proteger de herbívoros de insetos30,31. O resultado mostrou claramente que as plantas exploraram o CBD como um impedimento alimentar e inibiram o crescimento da lagarta m. sexta inseto de pragas, além de causar aumento da mortalidade31. O estudo também demonstrou os efeitos de resgate do CBD para larvas de etanol intoxicados, identificando o potencial efeito veicular do etanol como portador do CBD. Como mostrado, o sistema modelo de insetos investigou efetivamente os efeitos terapêuticos dos canabinóides dentro de 3-4 semanas com menos mão-de-obra e custos do que outros sistemas animais. Embora o modelo de insetos carece de receptores canabinoides (ou seja, sem receptores CB1/2), o sistema modelo fornece uma ferramenta valiosa para entender os papéis farmacológicos dos canabinóides através de uma maneira canabinoide independente do receptor.

Os autores deste estudo já trabalharam com a minhoca de tabaco como um sistema modelo para pesquisas canabinoides31. Após cuidadosa consideração dos benefícios e riscos do uso de M. sexta, fornecemos um método que envolve o cuidado adequado e a preparação da dieta para ensaios pré-clínicos que permitem oportunidades para futuros usos laboratoriais pré-clínicos.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

1. Preparação de minhoca e tratamento de canabidiol

  1. Obter 150-200 M viável. sexta ovos e dietas artificiais à base de germes de trigo (ver Tabela de Materiais).
  2. Coloque os ovos de minhoca em uma placa de Petri de poliestireno com uma camada de dieta artificial baseada em germes de trigo (AD) e transfira os ovos para uma câmara de criação de insetos (ver Tabela de Materiais) mantida a 25 °C com 40%-60% de umidade relativa.
  3. Deixe os ovos de múmbriga de tabaco por 1-3 dias para eclodir dentro da câmara de criação de insetos mantida a 25 °C com 40%-60% de umidade relativa.
  4. Prepare a solução de estoque de canabidiol (CBD) (200 mM) adicionando 1,26 g de >98% de pureza O CBD isolou em 20 mL de EtOH (200 à prova) ou 100% de óleo de triglicerídeos de cadeia média (MCT) (ver Tabela de Materiais).
    NOTA: O isolado do CBD é sensível à luz, por isso manuseie ao escuro.
  5. Adicione 5 mL e 10 mL da solução de estoque cbd de 200 mM aos 1.000 g de AD para trazer as concentrações finais das dietas 1 mM e 2 mM de CBD, respectivamente.
    NOTA: Certifique-se de que a solução de estoque de dieta e CBD esteja bem misturada até formar uma mistura completamente homogênea. Misture o AD contendo estoque de CBD em um saco plástico por pelo menos 45 minutos à mão.
    ATENÇÃO: O misturador de café ou qualquer outro moedor de metal parecia ser ineficaz.
  6. Dispense 20 g das três mídias, controle (AD), veículo (AD + 0,1% de óleo EtOH ou MCT) e CBD contendo mídia (AD + 0,1% de óleo EtOH ou MCT + 1 mM/2 mM de CBD) para a parte inferior do tubo de 50 mL.
  7. Distribua aleatoriamente 1ª larva instar (~2 mm de comprimento) individualmente em um tubo de ensaio de 50 mL e cubra com uma tampa perfurada ou pano de queijo (ver Tabela de Materiais).
    NOTA: Coloque o tubo de cabeça para baixo e cresça insetos em uma câmara de criação de insetos mantida 25 °C com 40%-60% de umidade relativa.
  8. Plante-os dentro de uma câmara de criação de insetos (ver Tabela de Materiais) mantida a 25 °C com um ciclo claro/escuro de 12 horas.

2. M. sexta crescimento larval, consumo de dieta e medidas de mortalidade

  1. Meça o crescimento larval (ou seja, tamanho e peso) com um equilíbrio analítico e mortalidade em intervalos de 2 dias após ser transferido para recipientes individuais até que a pupação seja reconhecida como a coloração marrom escura de uma camada de exocutíscal endurecida.
    1. Registre a massa inicial (em gramas) de cada grupo de larvas antes de introduzir as larvas em suas respectivas dietas e subtraia a massa das larvas em cada medição a partir da massa inicial para determinar ganhos de massa entre os estágios de desenvolvimento das larvas até que as larvas completem o estágio de pupação.
    2. Regisso número de dias entre as etapas instar de desenvolvimento para entender diferenças no prazo de desenvolvimento entre os estágios de crescimento das larvas até a pupação em cada dieta.
      NOTA: Raspe a matéria fecal do recipiente para evitar qualquer contaminação do molde. Colete a matéria para testes futuros dependentes de propósitos de experimento (por exemplo, cálculo da taxa de acumulação de CBD, perfil microbiano). É importante manusear cuidadosamente o inseto durante os períodos frágeis de apólise ou ecdísis. Ao retirar as larvas de um recipiente, pegue delicadamente o corpo principal do inseto com uma ponta plana e fórceps largos e não force a remover a camada externa da pele quando um inseto está em processo de derramamento.
  2. Meça o consumo de dieta31 pesando a perda de dieta do recipiente entre 1ª larva instar e pupação. Registre os gramas iniciais da dieta no início do experimento e subtraia a quantidade inicial da quantidade restante da dieta quando as larvas entrassem na fase completa de pupação.
    NOTA: A matéria fecal deve ser excluída da medição da dieta. A matéria fecal e outros detritos (ou seja, galpões de pele) podem ser facilmente removidos da mídia colocando o recipiente de cabeça para baixo.
  3. Para medições de mobilidade, permita que o inseto submetido aclimata o ambiente da câmara por pelo menos 5 minutos e rastreie as distâncias31 que três grupos de 5º instar insetos (80-100 mm de comprimento) viajaram usando uma câmara automatizada e informatizada de condicionamento do medo (ver Tabela de Materiais).
  4. Analise a resposta de mobilidade31 através de vídeo gravado 60 quadros/s por 5 minutos usando um software de detecção de movimento (ver Tabela de Materiais) que gera um índice de movimento.

3. Análise estatística

  1. Analise as diferenças no crescimento larval (ou seja, tamanho e peso) e o índice de movimento por ANOVA unidirecional com o pós-teste de Tukey32.
  2. Use o teste de log-rank (Mantel-Cox)33 para comparações de curvas de sobrevivência.
    NOTA: Todas as análises estatísticas foram realizadas por meio de software de análise estatística (ver Tabela de Materiais).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Manduca sexta como um sistema modelo para examinar a toxicidade dos canabinóides
A Figura 1 retrata os principais componentes do experimento CBD usando o múmbrinho de tabaco Manduca sexta. Um grande número de insetos (>20) foram criados individualmente a 25 °C em um 12 h:12 h = luz: ciclo escuro. O tamanho, o peso e a mortalidade dos insetos foram medidos em intervalos de 2 dias para monitorar respostas de curto e longo prazo após tra...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

O estudo de alimentação demonstrou que altas doses de CBD (2 mM) inibiram o crescimento do inseto e aumentaram a mortalidade31. O modelo de insetos também mostrou sensibilidade ao etanol; no entanto, o CBD efetivamente desintoxicou a toxicidade do etanol, aumentando sua taxa de sobrevivência, consumo de dieta e comportamentos de busca de alimentos para níveis semelhantes ao grupo controle (Figura 3A,B)31. O sistema de modelo de...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse.

Agradecimentos

Esta pesquisa foi apoiada pelo Instituto de Pesquisa da Cannabis da Universidade do Estado do Colorado-Pueblo e do Ministério da Ciência e TIC (2021-DD-UP-0379) e pela cidade de Chuncheon (CânhamO P&D e industrialização, 2020-2021).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Balança analíticaMettler Instrument Corp.AE100S
Isolado de canabidiol (>99,4%)Gaze de jardim
VWR INTERNATIONAL470150-438
Tubos de centrífuga de polipropileno (PP) transparente Corning 50mL VWR89093-192
Álcool etílico, 200 provasSigma-AldrichEX0276-1
Câmara de condicionamento do medoCoulbourn Instrumentos
Câmara de criação de insetosDarwin ChambersINR034
Óleo de triglicéridos de cadeia média (MCT)Walmart
Software de deteção de movimento (Actimetrics)Coulbourn Instruments
Placa de Petri de poliestireno (120 mm x 120 mm x 17 mm)VWR INTERNATIONAL688161
Tabaco hormworm artificial dietCarolina Biological Supply CompanyItem # 143908Ovos de
hormworm de tabacoCarolina Biological Supply CompanyItem # 143880Unidade de 30-50
de Lilu prontos para uso e dieta

Referências

  1. Kaplan, J. S., Stella, N., Catterall, W. A., Westenbroek, R. E. Cannabidiol attenuates seizures and social deficits in a mouse model of Dravet syndrome. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (42), 11229-11234 (2017).
  2. Leehey, M. A., et al. Safety and tolerability of cannabidiol in Parkinson Disease: An open label, dose-escalation study. Cannabis and Cannabinoid Research. 5 (4), 326-336 (2020).
  3. Al-Ghezi, Z. Z., Miranda, K., Nagarkatti, M., Nagarkatti, P. S. Combination of cannabinoids, delta 9- tetrahydrocannabinol and cannabidiol, ameliorates experimental multiple sclerosis by suppressing neuroinflammation through regulation of miRNA-mediated signaling pathways. Frontiers in Immunology. 10, 1921(2019).
  4. Seltzer, E. S., Watters, A. K., MacKenzie, D., Granat, L. M., Zhang, D. Cannabidiol (CBD) as a promising anti-cancer drug. Cancers (Basel). 12 (11), 3203(2020).
  5. Garcia-Morales, L., et al. CBD reverts the mesenchymal invasive phenotype of breast cancer cells induced by the inflammatory cytokine IL-1beta). International Journal of Molecular Sciences. 21 (7), 2429(2020).
  6. Jeong, S., et al. Cannabidiol promotes apoptosis via regulation of XIAP/Smac in gastric cancer. Cell Death and Disease. 10 (11), 846(2019).
  7. Devinsky, O., et al. Open-label use of highly purified CBD (Epidiolex®) in patients with CDKL5 deficiency disorder and Aicardi, Dup15q, and Doose syndromes. Epilepsy & Behavior. 86, 131-137 (2018).
  8. de la Harpe, A., Beukes, N., Frost, C. L. CBD activation of TRPV1 induces oxidative signaling and subsequent ER stress in breast cancer cell lines. Biotechnology and Applied Biochemistry. , (2021).
  9. Gasparyan, A., Navarrete, F., Manzanares, J. Cannabidiol and sertraline regulate behavioral and brain gene expression alterations in an animal model of PTSD. Frontiers in Pharmacology. 12, 694510(2021).
  10. Aso, E., et al. Cannabidiol-enriched extract reduced the cognitive impairment but not the epileptic seizures in a Lafora disease animal model. Cannabis and Cannabinoid Research. 5 (2), 150-163 (2020).
  11. Kadam, R. A., Borde, S. U., Madas, S. A., Salvi, S. S., Limaye, S. S. Challenges in recruitment and retention of clinical trial subjects. Perspectives in Clinical Research. 7 (3), 137-143 (2016).
  12. Kaur, G., Dufour, J. M. Cell lines: Valuable tools or useless artifacts. Spermatogenesis. 2 (1), 1-5 (2012).
  13. Alves, P., Amaral, C., Teixeira, N., Correia-da-Silva, G. Cannabidiol disrupts apoptosis, autophagy and invasion processes of placental trophoblasts. Archives of Toxicology. , (2021).
  14. Trophoblast. , Available from: https://en.wikipedia.org/wiki/Trophoblast (2021).
  15. Yang, Y., et al. Cannabinoids inhibited pancreatic cancer via P-21 activated kinase 1 mediated pathway. International Journal of Molecular Sciences. 21 (21), 8035(2020).
  16. Jeong, S. Cannabidiol-induced apoptosis is mediated by activation of Noxa in human colorectal cancer cells. Cancer Letters. 447, 12-23 (2019).
  17. Capes-Davis, A., et al. Cell lines as biological models: Practical steps for more reliable research. Chemical Research in Toxicology. 32 (9), 1733-1736 (2019).
  18. Chuang, S. H., Westenbroek, R. E., Stella, N., Catterall, W. A. Combined antiseizure efficacy of cannabidiol and clonazepam in a conditional mouse model of Dravet syndrome. Journal of Experimental Neurology. 2 (2), 81-85 (2021).
  19. Orvos, P., et al. The electrophysiological effect of cannabidiol on hERG current and in guinea-pig and rabbit cardiac preparations. Scientific Reports. 10 (1), 16079(2020).
  20. Verrico, C. D., et al. A randomized, double-blind, placebo-controlled study of daily cannabidiol for the treatment of canine osteoarthritis. Pain. 161 (9), 2191-2202 (2020).
  21. Barata, L., et al. Neuroprotection by cannabidiol and hypothermia in a piglet model of newborn hypoxic-ischemic brain damage. Neuropharmacology. 146, 1-11 (2019).
  22. Beardsley, P. M., Scimeca, J. A., Martin, B. R. Studies on the agonistic activity of delta 9-11-tetrahydrocannabinol in mice, dogs and rhesus monkeys and its interactions with delta 9-tetrahydrocannabinol. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 241 (2), 521-526 (1987).
  23. Ryan, D., McKemie, D. S., Kass, P. H., Puschner, B., Knych, H. K. Pharmacokinetics and effects on arachidonic acid metabolism of low doses of cannabidiol following oral administration to horses. Drug Testing and Analysis. 13 (7), 1305-1317 (2021).
  24. Bryda, E. C. The Mighty Mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).
  25. Qi, X., et al. CBD promotes oral ulcer healing via inhibiting CMPK2-mediated inflammasome. Journal of Dental Research. , (2021).
  26. Mastinu, A., et al. Prosocial effects of nonpsychotropic Cannabis sativa in mice. Cannabis and Cannabinoid Research. , (2021).
  27. Justice, M. J., Dhillon, P. Using the mouse to model human disease: increasing validity and reproducibility. Disease Models & Mechanisms. 9 (2), 101-103 (2016).
  28. Andre, R. G., Wirtz, R. A., Das, Y. T., An, C. Insect Models for Biomedical Research. , CRC Press. 61-72 (1989).
  29. He, J., Tan, A. M. X., Ng, S. Y., Rui, M., Yu, F. Cannabinoids modulate food preference and consumption in Drosophila melanogaster. Scientific Reports. 11 (1), 4709(2021).
  30. Kanost, M. R., et al. Multifaceted biological insights from a draft genome sequence of the tobacco hornworm moth, Manduca sexta. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 76, 118-147 (2016).
  31. Park, S. H., et al. Contrasting roles of cannabidiol as an insecticide and rescuing agent for ethanol-induced death in the tobacco hornworm Manduca sexta. Scientific Reports. 9 (1), 10481(2019).
  32. Tukey, J. W. Comparing individual means in the analysis of variance. Biometrics. 5 (2), 99-114 (1949).
  33. Mantel, N. Evaluation of survival data and two new rank order statistics arising in its consideration. Cancer Chemotherapy Reports. 50 (3), 163-170 (1966).
  34. Watts, S., Kariyat, R. Picking sides: Feeding on the abaxial leaf surface is costly for caterpillars. Planta. 253 (4), 77(2021).
  35. McPartland, J. M., Agraval, J., Gleeson, D., Heasman, K., Glass, M. Cannabinoid receptors in invertebrates. Journal of Evolutionary Biology. 19 (2), 366-373 (2006).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Etiquetas

Estudos Pr cl nicos de CanabinoidesManduca sextaTratamento com CanabidiolPrepara o de Dieta ArtificialMedi o do Crescimento LarvalMonitoramento da Resposta ComportamentalResposta Eletrofisiol gicaSistema Nervoso Central
Minhoca de Tabaco como um sistema modelo de insetos para estudos pré-clínicos canabinoides
Fale conosco
Recomendar à biblioteca

Privacidade

Termos de Uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos os direitos reservados.