Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O infarto agudo do miocárdio é uma doença cardiovascular comum e com alta mortalidade. A lesão de reperfusão miocárdica pode neutralizar os efeitos benéficos do refluxo cardíaco e induzir lesão miocárdica secundária. Um modelo simples e reprodutível de infarto do miocárdio e lesão de isquemia-reperfusão miocárdica é uma boa ferramenta para os pesquisadores. Aqui, um método personalizável para criar um modelo de infarto do miocárdio (IM) e MIRI por ligadura de precisão da artéria coronária descendente anterior (DA) por meio de micromanipulação é descrito. O posicionamento preciso e reprodutível da ligadura da DA ajuda a obter resultados consistentes para lesão cardíaca. As alterações no segmento ST podem ajudar a identificar a precisão do modelo. O nível sérico de troponina T cardíaca (cTnT) é usado para avaliar a lesão miocárdica, o ultrassom cardíaco é empregado para avaliar a função sistólica miocárdica e a coloração de Evans-Blue/cloreto de trifenil tetrazólio é usada para medir o tamanho do infarto. Em geral, esse protocolo reduz a duração do procedimento, garante o tamanho controlável do infarto e melhora a sobrevida do camundongo.
Introdução
O infarto agudo do miocárdio (IAM) é uma doença cardiovascular comum em todo o mundo e acarreta altamortalidade1. O avanço das tecnologias torna a revascularização precoce e eficaz disponível para pacientes com IAM. Após esses tratamentos, em alguns pacientes, pode ocorrer lesão de isquemia-reperfusão miocárdica (MIRI)2. Assim, é de grande importância compreender os mecanismos de ações e como melhorar o MI/MIRI. Camundongos são amplamente utilizados como modelos devido ao seu baixo custo, rápido tempo de reprodução e facilidade para realizar alteraçõesgenéticas 3. Estudiosos têm desenvolvido difer....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Os estudos em animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Utilização de Animais da Universidade de Ciência e Tecnologia de Huazhong (Wuhan, China).
NOTA: Camundongos C57BL/6J machos (8-10 semanas) são usados como modelos. Os camundongos têm livre acesso a comida e água e são criados em condições específicas livres de patógenos. A sala é mantida sob temperatura controlada (22 °C ± 2 °C) e umidade (45%-65%). Os ratos são expostos a um ambiente claro/escuro de 12 horas no Centro de Cuidados com Animais da Faculdade de Medicina de Tongji (Wuhan, China), de acordo com as diretrizes estabelecidas por esta instituição. Use instrumentos micro....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
O fluxo de trabalho experimental é mostrado na Figura 1A. O pesquisador pode programar os nós de tempo de acordo com o desenho experimental no início do estudo. A duração da ligadura da DAE está de acordo com o objetivo da pesquisa. Para o IM, a pesquisa pode ignorar a etapa de reperfusão. A ultrassonografia cardíaca está disponível em diferentes estágios do estudo porque não é invasiva, enquanto a coloração Evans-Blue/TTC pode ser realizada apenas quando o camundongo é sacrificado. Para pes.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Nos últimos anos, a criação de modelos para IM e MIRI em pesquisas clínicas e científicas tem se desenvolvido rapidamente20,21. No entanto, ainda existem algumas questões, como os mecanismos de ações e como melhorar o MI/MIRI, que devem ser resolvidas. Aqui, um protocolo modificado para estabelecer um modelo murino de IM e MIRI é descrito. Vários pontos-chave devem ser considerados com cuidado.
O primeiro ponto-chave é a intubação endo.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores declaram a inexistência de conflitos de interesse.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82070317, 81700390 para Jibin Lin, 8210021880 para Bingjie Lv e 82000428 para Boyuan Wang) e o Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento da China ( 2017YFA0208000 para Shaolin He).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução de cloreto de sódio a 0,9% | Kelun Industry Group, solução | China-4 | |
| % | Servicebio, China | G1101-4-0 | |
| sutura de seda | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products, China | C412-8-0 | |
| sutura | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products, China | H801-Buprenorphine | |
| IsoReag, China | IR-11190-Camera | ||
| Canon, Japão | EOS 80D-creme | ||
| depilatório | Veet, | Francês-Elecsys | |
| Troponina T hs STAT | Roche, | Alemanha-Eletroquímica | |
| luminescência imunoanalyzer | Roche, Alemanha | Elecsys 2010-Evans | |
| azul | Sigma, América | E2129 | - |
| Tesoura ocular | Shanghai Medical Instruments, China | JC2303-Fórceps | |
| hemostático | Shanghai Medical Instruments, China | J31020-High | |
| freqüência in vivo imaging systems | Visualsonics, Canadá | Vevo2100-Ibuprofeno | |
| PerFeMiKer, China | CLS-12921-Cateter | ||
| intravenoso | Introcan, Alemanha | 4254090B-Cetamina | |
| Sigma-Aldrich,América | K2753-Medical | ||
| álcool | Huichang, | China-Microneedle | |
| titulares | Shanghai Medical Instruments, China | WA2040-Tesouras | |
| microscópicas | Shanghai Medical Instruments, China | WA1040-Microsurgical | |
| fórceps | Shanghai Medical Instruments, China | WA3020-Mouse | |
| eletrocardiógrafo | Techman, China | BL-420F-Needle | |
| titulares | Shanghai Medical Instruments, China | JC3202-operating | |
| piso | Chico, China | ZK-HJPT-PE-10 | |
| tubo | Huamei, | ||
| Merck, América | |||
| 1030001-Roedor Ventilador | Shanghai Alcott Biotech, China | ALC-V8S-P | - |
| Microscópio estéreo | Aomei Industry, China | SZM0745-STL3-T3-Surgical | |
| almofada de aquecimento termostático | Globalebio, China | GE0-20W-Triphenyltetrazolium | |
| chloride | Servicebio, China | G1017-Xylazine | |
| Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts, China | 323004 | - |
Referências
- Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. Acute myocardial infarction. Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).
- Ibanez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van de Werf, F. Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury. Journal of the American College of Cardiology. 65....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
