Geração de Modelo de Isquemia-Reperfusão de Gancho usando um embrião de pintinho em desenvolvimento de três dias

Summary

Este artigo descreve a modelagem isquemia-reperfusão (I/R) em um embrião de 3 dias usando um gancho personalizado de agulha espinhal para entender melhor o desenvolvimento e o tratamento da I/R. Este modelo é simples, rápido e barato.

Abstract

Distúrbios de isquemia e reperfusão (I/R), como infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral e doença vascular periférica, são algumas das principais causas de doença e morte. Muitos modelos in vitro e in vivo estão atualmente disponíveis para estudar o mecanismo de I/R em doenças ou tecidos danificados. No entanto, até o momento, nenhum modelo de I/R de ovo foi relatado, o que permitiria uma melhor compreensão dos mecanismos de I/R e uma triagem mais rápida de medicamentos. Este artigo descreve a modelagem de I/R usando um gancho personalizado de agulha espinhal em um embrião de 3 dias para entender os mecanismos de desenvolvimento e tratamento de I/R. Nosso modelo pode ser usado para investigar anomalias nos níveis de DNA, RNA e proteína. Este método é simples, rápido e barato. O modelo atual pode ser usado de forma independente ou em conjunto com os modelos in vitro e in vivo I/R existentes.

Introduction

A lesão tecidual isquemia-reperfusão tem sido associada a uma série de patologias, incluindo ataques cardíacos, acidente vascular cerebral isquêmico, trauma e doença vascular periférica1,2,3,4,5. Isso se deve principalmente à falta de uma compreensão abrangente da progressão da doença e à falta de um modelo de pesquisa eficaz. A lesão isquêmica ocorre quando o suprimento de sangue para uma área específica do tecido é cortado. Como resultado, o tecido isquêmico eventualmente necrosa, embora a taxa varie depe....

Protocol

O Comitê de Ética Animal Institucional da Era's Lucknow Medical College and Hospital emitiu uma renúncia por escrito afirmando que nenhuma aprovação formal foi necessária para realizar esses experimentos de acordo com o Comitê para fins de controle e supervisão de experimentos em animais (CPCSEA). No entanto, foram seguidos procedimentos operacionais padrão para minimizar qualquer potencial de sofrimento embrionário.

1. Preparação do buffer (Tabela 1)

1. Preparar a solução de Ringer
   1. Para preparar a solução de Ringer, dissolva 0,72 g de NaCl (123 mM), 0,017 g de _CaCl2 (1,53 mM), 0,037 g de KCl (4,96....

Results

A técnica do Doppler Blood Flow Imaging foi utilizada para avaliar a eficácia do nosso modelo. Em suma, comparamos os dados do grupo controle com os dados do grupo RVA para determinar o sucesso de nossa criação. A Figura 4A retrata um fluxo típico associado ao animal de controle, enquanto a Figura 4B retrata os resultados obtidos de um RVA. O 1-8 numérico representa os diversos eventos associados às fases de I/R. Resumindo, o 1-3 numérico corresponde à fase da n.......

Discussion

O objetivo da pesquisa isquemia-reperfusão é criar estratégias terapêuticas que previnem a morte celular e promovam a recuperação ^29,30. Para superar as restrições atuais na pesquisa de I/R, projetamos um modelo de embrião de pintinhos Hook I/R para produzir um modelo de I/R confiável e reprodutível. Para nosso conhecimento, o nosso é o primeiro modelo de I/R já criado em um embrião de 3 dias para experimentos de I/R de rotina, além de estudar sinais de estresse .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
(-80° C) freezer	Haier,
Tubo de centrífuga	TARSONS, Índia	500010X
100mm Placa de Petri (estéril)	Tarsons, Índia	460050
Agulha 18G (18G&vezes; 1.5 (1.25&vezes; 38mm)	Ramsons, Índia	13990
Seringa de 1mL	DISPO
Agulha (26G&vezes; 1/2 (10.45x13mm)	DISPO VAN, Índia	30722D
37° Incubadora de ovos C com umidade percentual ajustável	Gentek, Índia	GL-100
37° Incubadora de laboratório	C SCIENCE TECH, Índia	CB 101-14
3-metiladenina (3-MA)	Sigma Aldrich, EUA	M9281
Pipeta de pastagem de 3mL	TARSONS, Índia	940050
Copo de 50mL	TARSONS, Índia-Seringa
5mL	DISPO VAN, Índia	IP53
70% etanol	Merck Millipore, Estados Unidos	64-17-5
Fita adesiva / fita de violoncelo	Sunrise,	Índia-Ambra1
primers	Applied Biosystems, Foster City, EUA	Hs00387943_m1
Tecnologia de sinalização de células	IgG anti-mouse	7076S
Anti-Rabbit IgG	Jackson Immuno Research Laboratories, EUA	711-035-152
Atg7	R & D Systems, EUA	MAB6608
Primers Atg7	Applied Biosystems, Foster city, EUA	Hs00893766_m1
Saco de autoclave	Tarsons, Índia	Máquina de
	fabricada localmente, Lucknow,	Índia-Beclin-1
	Proteintech, EUA	66665-1-Ig
Beta Actin	ImmunoTag, EUA	ITT07018
Albumina de soro bovino	Himedia, Mumbai, Índia	TC194
Cloreto de cálcio	Himedia, Mumbai, Índia	GRM534
Catalase	ImmunoTag, EUA	ITT5155
Toalhetes de limpeza	Kimberly-Clark, Índia	370080
Caspase3 clivada	ImmunoTag, EUA	ITT07022
dissódico hidrogenofosfato heptahidratado	Himedia, Mumbai, Índia	GRM39611
Doppler medidor de fluxo sanguíneo	Moors instrument, Reino Unido	moorVMS-LDF1
Rack	de ovos -	Rack
de		ovos	-
GAPDH	ImmunoTag, EUA	M1000110
Primers GAPDH	Applied Biosystems, Foster city, EUA
Glycine	Himedia, Mumbai, Índia	MB013
Bandeja renal	HOSPITO-LC3A
/B	Cell Signaling Technology, EUA	4108S
Metanol	Rankem laboratories, Mumbai, Índia	M0252
Micromanipulador	Narishige, Japão	M-152
N-acetil-L-cisteína (NAC)	Sigma Aldrich, EUA	A7250
Naringenin	Sigma Aldrich, EUA	67604-48-2
NF-kβ	Thermo Fisher Scientific, EUA	51-0500
NLRP3	ImmunoTag, EUA	ITT07438
Alicate de nariz	Feito localmente, Lucknow,	Índia-Pinça
ocular	Stoelting, Alemanha	52106-40
Íris ocular	Instrumentos cirúrgicos Tufft, Jaipur, Índia	Tesoura Micro Vannas Hard Age Angulada 8CM / 3 1/8"
OHP caneta marcadora	Camlin,
	ImmunoTag, EUA	ITT08329
Tesoura de borda afiada pontiaguda	Stoelting, Alemanha	52132-11
Cloreto de potássio	Himedia, Mumbai, Índia	MB043
Fosfato de potássio monobásico anidro	Himedia, Mumbai, Índia	MB050
Inibidor de protease	Abcam, Estados Unidos	Ab65621
SOD-1	ImmunoTag, EUA	ITT4364
Cloreto de Sódio	Fisher Scientific, Mumbai, Índia	27605
Dodecil sulfato de sódio	Himedia, Mumbai, Índia	GRM886
Agulha espinhal 25GA; 3,50 POL (90,51 X 90 mm)	Ramson, Índia	GS-2029
	Olympus, Japão	SZ2-STU3
Descartador de seringa	BIOHAZARD	882210
Pinça dentada	Stoelting, Alemanha	52102-30
Tris Base	G Biosciences, Estados Unidos	RC1217
Tris Hydrochloric Acid	Himedia, Mumbai, Índia	MB030
Tween 20	G Biosciences, Estados Unidos	RC1227
Ovos de 0 dias de frango White Leghorn	-
Z-Val-Ala-Asp (OMe) -FMK	MP Biomedicals, LLC, EUA	FK009