Cultivo de Linfócitos em Microgravidade Simulada utilizando Sistema de Cultura de Células Rotativas

Summary

Este é um guia passo a passo para o uso de um sistema de cultura de células rotativas comercialmente disponível para cultivar linfócitos em microgravidade simulada usando vasos de cultura descartáveis especializados. Este método de cultura pode ser aplicado a qualquer cultura celular do tipo suspensão.

Abstract

Dadas as limitações atuais da realização de pesquisas biológicas no espaço, existem algumas opções para submeter a cultura de células à microgravidade simulada (SMG) na Terra. Essas opções variam em seus métodos, princípios e adequação para uso com cultura de células em suspensão. Aqui, um método de cultura celular é descrito para submeter linfócitos a microgravidade simulada usando um sistema de cultura de células rotativas comercialmente disponível, também conhecido como clinostato 2D ou dispositivo de vaso de parede rotativa (RWV). Este método de cultura de células utiliza o princípio da anulação vetorial gravitacional em média no tempo para simular a microgravidade girando as células em um eixo horizontal. As células cultivadas neste sistema podem ser colhidas e utilizadas em diferentes ensaios experimentais para avaliar os efeitos da microgravidade simulada sobre a função e fisiologia celular. A técnica de cultivo pode variar ligeiramente dependendo do tipo ou linhagem celular utilizada, mas o método aqui descrito pode ser aplicado a qualquer cultura celular do tipo suspensão.

Introduction

Foi demonstrado que o voo espacial impacta muitos aspectos da fisiologia humana, incluindo o sistema imunológico. Muitos estudos têm demonstrado evidências de desregulação imunológica como resultado de voo espacial in vivo e exposição à microgravidade simulada (SMG) in vitro 1,2,3,4. Um aspecto importante do ambiente espacial que impacta a fisiologia humana é a microgravidade. A microgravidade refere-se à "ausência de gravidade" experimentada devido às baixas forças gravitacionais no ambiente espacial

Protocol

NOTA: As seguintes etapas devem ser concluídas dentro de um armário de segurança biológica estéril.

1. Preparação dos vasos para cultura celular

1. Retire os recipientes de cultura das embalagens plásticas. Rotular cada recipiente na borda de acordo com o tipo/linha celular que está sendo usado, se é o controle (1G) ou o tratamento (SMG), e qualquer outra informação relevante.
2. Estabilize o navio e abra a porta de enchimento cuidadosamente, sem tocar na tampa da porta de enchimento peg/O-ring. Coloque a tampa em uma almofada de etanol, com o pino / O-ring voltado para cima, enquanto o recipiente está sendo p....

Results

Esse método de cultivo é considerado bem-sucedido se 1) a proliferação das células for aproximadamente consistente entre os grupos controle (e idealmente todos os grupos experimentais), 2) a proliferação for apropriada dada a densidade de semeadura, o tempo de tratamento e o tempo de duplicação do tipo/linhagem celular, e 3) a viabilidade das células colhidas for de 85% ou mais (Tabela 1 ). Idealmente, as células resultantes deveriam ser tão saudáveis quanto seriam em cultura celular padrão, especialment.......

Discussion

À medida que a humanidade se prepara para missões espaciais mais longas à Lua e a Marte, mais pesquisas precisam ser conduzidas para mitigar sérios riscos à saúde dos astronautas. Um aspecto importante do ambiente espacial que impacta a fisiologia humana é a microgravidade. Aqui, um método de cultura celular foi descrito para submeter linfócitos à SMG usando um sistema de cultura de células rotativas comercialmente disponível.

Esse protocolo contém algumas etapas críticas que talvez precisem s.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Vaso descartável de alta proporção (HARV) (10 mL)	Synthecon	D-410	Vasos de cultura esterilizados por gama (4/caixa)
Seringas de ponta Luer-Lok (3 mL)	BD	309657	Para anexar aos 10 mL HARVs
NK92 Cell-line	ATCC	CRL-2407
Sistema de Cultura de Células Rotativas (RCCS)	Synthecon	RCCS-4D	Dispositivo de vaso de parede rotativa; 2D clinostat
Tubos cônicos Sarsedt 15 mL	Fisher Scientific	50-809-220
Sarsedt Tubos cônicos de 50 mL	Fisher Scientific	50-809-218
Pipetas sorológicas estéreis Sarsedt	Fisher Scientific	86.1254.001
Frascos de cultura com suspensão T25	Sarsedt	83.3910.502	Para controle de frascos