Medições do reflexo H terminal em camundongos

Resumo

A avaliação clínica da espasticidade baseada no reflexo de Hoffmann (reflexo H) e utilizando a estimulação elétrica de nervos periféricos é um método estabelecido. Aqui, nós fornecemos um protocolo para uma estimulação nervosa terminal e direta para quantificação do reflexo H na pata dianteira de camundongos.

Resumo

O reflexo de Hoffmann (reflexo H), como análogo elétrico ao reflexo de estiramento, permite a validação eletrofisiológica da integridade dos circuitos neurais após lesões como lesão medular ou acidente vascular cerebral. Um aumento da resposta reflexa H, juntamente com sintomas como contrações musculares não voluntárias, reflexo de estiramento patologicamente aumentado e hipertonia no músculo correspondente, é um indicador de espasticidade pós-AVC (PSS).

Em contraste com medidas transcutâneas bastante inespecíficas do nervo, apresentamos aqui um protocolo para quantificar o reflexo-H diretamente nos nervos ulnar e mediano da pata anterior, que é aplicável, com pequenas modificações, ao nervo tibial e ciático da pata traseira. Baseado na estimulação direta e na adaptação a diferentes nervos, o método representa uma ferramenta confiável e versátil para validar mudanças eletrofisiológicas em modelos de doenças relacionadas à espasticidade.

Introdução

O reflexo de Hoffmann (reflexo H), nomeado em homenagem ao fisiologista Paul Hoffmann, pode ser evocado pela estimulação elétrica de nervos periféricos, que carregam axônios de neurônios sensoriais e motores que surgem e levam aos mesmos músculos. É o análogo eletricamente induzido do reflexo de estiramento monossináptico e compartilha a mesma via¹. Diferentemente do alongamento muscular, o reflexo H resulta da estimulação elétrica. Quando os nervos periféricos são estimulados eletricamente em baixa intensidade de corrente, as fibras aferentes de Ia são tipicamente despolarizadas primeiro devido ao seu grande diâmetro axonal^2<....

Protocolo

Todos os experimentos foram conduzidos em conformidade com as leis europeias e nacionais de cuidados com animais e diretrizes institucionais, e foram aprovados pelo Landesamt für Natur-, Umwelt-, und Verbraucherschutz North Rhine-Westphalia (Az: 81-02.04.2019.A309). O protocolo é otimizado para camundongos adultos (aprox. 8-16 semanas de idade C57Bl/6J) e para o registro do membro torácico. Pode ser facilmente adaptado, estimulando-se os respectivos nervos do membro pélvico e registrando-se os músculos da pata traseira (Figura 1B). Uma descrição dos eletrodos de gravação e estimulação é adicionada na Tabela de Materiais. ....

Resultados

A partir do n = 15 tentativas de estimulação por frequência de estimulação e pata, selecione pelo menos n = 10 registros bem-sucedidos para a análise. Tentativas com erros de medição (por exemplo, ausência de onda M) são excluídas da análise. Analise cada ensaio separadamente e gere uma média para comparações de grupo/tempo mais tarde. A latência entre a estimulação e o aparecimento da onda M e da onda H é registrada para cada tentativa. Em nossa experiência, a onda M ocorre aproximadamente 2 ms após a estimulação, e a o.......

Discussão

Em contraste com as medidas transcutâneas do reflexo H previamente descritas em^camundongos6, fornecemos uma medida mais direta e específica do nervo. Essa nova abordagem pode ser aplicada aos nervos dos membros anteriores e posteriores (por exemplo, mediano, ulnar e radial, tibial e ciático, respectivamente), tornando esse método adaptável como ferramenta diagnóstica a muitos modelos de doenças (por exemplo, acidente vascular cerebral, esclerose múltipla, esclerose lateral amiotrófica, traumatismo.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Absorvente Underpad	VWR	115-0684
AD converter	Cambridge Electronic Design, UK	CED 1401micro
Amplifier	Workshop Zoological Institute, UoC-Digital
stimulator	Workshop Zoological Institute, UoC	MS 501
EMG electrodes	Workshop Zoological Institute, UoC		Dois fios de cobre isolados e torcidos (50 µ m de diâmetro externo) foram soldados a um plugue macho e conectados a um amplificador diferencial.
Pomada para os olhos	Bayer	Bepanthen
Oficina de pipeta de vidro	Instituto Zoológico, UoC-Prepare		uma pipeta de vidro dobrada em um simples gancho de vidro na chama de um bico de Bunsen.
Caixa de aquecimento	MediHeat	MediHeat V1200
Almofada de aquecimento	WPI	61840 Almofada
Eletrodos de gancho	Oficina Instituto Zoológico, UoC-Para		produzir os eletrodos, dobre os pinos em miniatura de aço inoxidável em ganchos em uma extremidade e insira em cânulas rombas para criar contato mecânico direto. Solde a extremidade da cânula a fios de cobre (comprimento aprox. 50 cm), que estão conectados a um dispositivo de estimulação ou gravação.
Cetamina	Pfizer	Ketavet
Sonda retal	WPI	RET-3
Unidade de isolamento do estimulador	Workshop Zoological Institute, UoC	MI 401
Esterilizador	CellPoint Scientific	Germinator 500	A desinfecção pré e pós-operatória de rotina do equipamento cirúrgico deve ser feita por esterilização por calor. Descontamine instrumentos por 15 s no banho de esferas de vidro aquecido (260° C).
Controlador de temperatura	WPI	ATC200
Vaselina
	Bayer	Rompun

de aquecimento Bayer-Xilazina