Cauterização em círculo completo do plexo vascular limbal no glaucoma induzido cirurgicamente em roedores

Resumo

O objetivo deste protocolo é caracterizar um novo modelo de neurodegeneração glaucomatosa baseado na cauterização térmica 360° do plexo vascular limbal, induzindo hipertensão ocular subaguda.

Resumo

O glaucoma, segunda causa de cegueira no mundo, é um grupo heterogêneo de doenças oculares caracterizadas por danos estruturais ao nervo óptico e degeneração das células ganglionares da retina (CGR), resultando em disfunção visual pela interrupção da transmissão de informações visuais do olho para o cérebro. A pressão intraocular elevada é o fator de risco mais importante; Assim, vários modelos de hipertensão ocular têm sido desenvolvidos em roedores por abordagens genéticas ou experimentais para investigar as causas e efeitos da doença. Dentre essas, algumas limitações têm sido relatadas, como invasividade cirúrgica, avaliação funcional inadequada, exigência de treinamento extensivo e extensão altamente variável do dano retiniano. O presente trabalho caracteriza um método simples, de baixo custo e eficiente para induzir hipertensão ocular em roedores, baseado na cauterização em círculo completo do plexo limbal a baixa temperatura, um dos principais componentes da drenagem aquosa do humor. O novo modelo proporciona uma hipertensão ocular subaguda tecnicamente fácil, não invasiva e reprodutível, associada à degeneração progressiva do CGR e do nervo óptico, e uma taxa de recuperação clínica pós-operatória única que permite estudos funcionais in vivo por métodos eletrofisiológicos e comportamentais.

Introdução

A literatura médica entende o glaucoma como um grupo heterogêneo de neuropatias ópticas caracterizadas por degeneração progressiva das células ganglionares da retina (CGRs), dendritos, soma e axônios, resultando em escavação estrutural (escavação) do disco óptico e deterioração funcional do nervo óptico, levando à amaurose em casos não controlados pela interrupção da transmissão de informações visuais do olho para o^cérebro1. Atualmente, o glaucoma é a causa mais comum de cegueira irreversível em todo o mundo, com previsão de atingir aproximadamente 111,8 milhões de pessoas em 2040², afetando profundamente a qualidade de ....

Protocolo

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com a Declaração para o Uso de Animais em Pesquisa Oftalmológica e Visual da Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) e aprovada pelo Comitê de Ética no Uso de Animais em Experimentação Científica do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal do Rio de Janeiro (protocolo 083/17). No presente trabalho, foram utilizados ratos Lister Hooded, de ambos os sexos, com idade entre 2-3 meses e peso de 180-320 g. No entanto, o procedimento pode ser adaptado em diferentes linhagens de ratos de várias faixas etárias.

1. Cirurgia de hipertensão ocular e seguimento clínic....

Resultados

As variáveis quantitativas foram expressas como média ± erro padrão da média (EPM). Com exceção da comparação da dinâmica da PIO entre os grupos ESB e controle (Figura 1F), a análise estatística foi realizada por meio de ANOVA two-way seguida do teste de comparações múltiplas de Sidak. Um valor de p < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

A Figura 1 ilustra os passos cirúrgicos do modelo de cauterização do plexo limb.......

Discussão

A cauterização do plexo limbal (LPC) é um novo modelo pós-trabecular com a vantagem de ter como alvo estruturas vasculares de fácil acesso, não necessitando de dissecção conjuntival ou^{tenonal 17,28}. Diferentemente do modelo de cauterização de veias vórtices, um renomado modelo de OHT baseado no comprometimento cirúrgico da drenagem venosa coroide, não se espera que a congestão venosa influencie a elevação da PIO no modelo LPC, uma vez que as veias límbicas estão .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Acetona	Isofar	201	Usado para preparação de tecido de microscopia eletrônica (passo 5)
Eletrodo ativo para eletroretinografia	Hansol Medical	Co-Agulha	de aço inoxidável 0,25 mm &vezes; 15 mm
Anestalcon	Novartis Biociê ncias S / A	MS-1.0068.1087	Cloridrato de Proxymetacaína 0,5%
Cloreto de cálcio	Vetec	560	Usado para preparação de tecido de microscopia eletrônica (etapa 5)
Cautery Low Temp Fine Tip 10 / bx	Bovie Medical Corporation	AA00	Cautério oftálmico de baixa temperatura
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	Cloridrato de cetamina 10%
DAKO	Dako North America	S3023	Meio de montagem antidesvanecimento
DAPI	Thermo Fisher Scientific	28718-90-3	diamidino-2-fenilindol; contramancha nuclear fluorescente azul; emissão a 452± Acrílico
Ecofilm	á lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0298.0487	Carmelose sódica 0.5%
EPON Resina	Polysciences, Inc.	-	Resina epóxi utilizada para microscopia eletrônica, composta por uma mistura de quatro reagentes: Resina Poly/Bed 812 (CAT#08791); DDSA - Anidrido dodecenilsuccínico (CAT#00563); NMA - Anidrido de Metila Nadic (CAT#00886); DMP-30 - 2,4,6-tris (dimetilaminometil) fenol (CAT # 00553)
Ciências de Microscopia Eletrônica	de Glutaraldeído	16110	Usado para preparação de tecido de microscopia eletrônica (etapa 5)
Hyabak	Uniã o Quí mica Farmacê utica Nacional S / A	MS-8042140002	Hialuronato de sódio 0,15%
Icare Tonolab	Icare Finlândia Oy	TV02 (número do modelo)	Tonômetro portátil de rebote
IgG anticorpo anti-rato de burro + Alexa Fluor 555	Thermo Fisher Scientific	A31570	Solução de anticorpos
secundários Monitor LCD 23 polegadas	Samsung Electronics Co. Ltd.	S23B550	Modelo LS23B550, para gravação de eletrorretinograma
LSM 510 Meta	Carl Zeiss-Microscópio		de epifluorescência confocal
Maxiflox	Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0298.0489	Ciprofloxacina 3,5 mg/g
MEB-9400K	Nihon Kohden	Corporation-Sistema	para registro de eletrorretinograma
monoclonal IgG1 camundongo anti-Brn3a	MilliporeSigma	MAB-1585	Brn3a solução de anticorpo primário
Neuropack Manager v08.33	Nihon Kohden	Corporation-Software	para processamento de
sinal de eletrorretinogramaOptomotry	CerebralMechanics-System		para análise de resposta optomotora
Tetróxido de ósmio	Microscopia Eletrônica Sciences	19100	Usado para preparação de tecido de microscopia eletrônica (etapa 5)
Ferrocianeto de potássio	Electron Microscopy Sciences	20150	Usado para preparação de tecido de microscopia eletrônica (etapa 5)
Eletrodos de referência e terra para eletrorretinografia	Chalgren Enterprises	110-63	Agulhas de aço inoxidável 0,4 mm &vezes; 37 mm
Tampão de cacodilato de sódio	Microscopia Eletrônica Sciences	12300	Usado para preparação de tecido de microscopia eletrônica (passo 5)
Ster MD	Uniã o Quí mica Farmacê utica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	Acetato de prednisolona 0.12%
Terolac	Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0497.1286	Cetorolaco trometamol 0,5%
Terramicina	Laborató rios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Cloridrato de oxitetraciclina 30 mg/g + polimixina B 10.000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	Tonômetro portátil de aplanação digital
TO-PRO-3	Thermo Fisher Scientific	T3605	Contracoloração nuclear fluorescente vermelha distante; emissão a 661 nm
Triton X-100	Sigma-Aldrich	9036-19-5	Surfactante não iônico
22400	microscopia eletrônica	do acetato de uranilo	usadas para a preparação do tecido da microscopia eletrônica (etapa 5)
	Carl Zeiss-Stereo	do	para a cirurgia e a dissecção da retina

de 3 nmCiências da Hidrocloro 2%Carl Zeiss-Stereo do hidrocloro 2% Ltda 7899 do acetato de uranila