Ensaio mecânico de prevenção de conflitos para medir o comportamento da dor em camundongos

Resumo

O ensaio mecânico de prevenção de conflitos é usado como uma leitura não reflexiva da sensibilidade à dor em camundongos que podem ser usados para entender melhor as respostas afetivas-motivacionais em uma variedade de modelos de dor de rato.

Resumo

A dor compreende tanto as dimensões sensorial (nociceptiva) quanto afetivas (desagradáveis). Em modelos pré-clínicos, a dor tem sido tradicionalmente avaliada por meio de testes reflexivos que permitem inferências em relação ao componente nociceptivo da dor, mas fornecem poucas informações sobre o componente afetivo ou motivacional da dor. Desenvolver testes que capturem esses componentes da dor são, portanto, traduções importantes. Assim, os pesquisadores precisam usar ensaios comportamentais não reflexivos para estudar a percepção da dor nesse nível. A prevenção de conflitos mecânicos (MCA) é um ensaio de comportamento voluntário não reflexivo estabelecido, por estudar respostas motivacionais a um estímulo mecânico nocivo em um paradigma de 3 câmaras. Uma mudança na preferência de localização de um rato, quando confrontada com estímulos nocivos concorrentes, é usada para inferir o descontentamento percebido da luz brilhante versus estimulação tátil das patas. Este protocolo descreve uma versão modificada do ensaio mca que os pesquisadores da dor podem usar para entender respostas afetivas-motivacionais em uma variedade de modelos de dor de rato. Embora não seja especificamente descrito aqui, nossos dados mca exemplo usar o intraplantar complete Freund's adjuvante (CFA), poupado lesão nervosa (SNI) e um modelo de fratura/fundição como modelos de dor para ilustrar o procedimento mca.

Introdução

A dor é uma experiência complexa com componentes sensoriais e afetivos. Uma redução no limiar da percepção da dor e da hipersensibilidade aos estímulos térmicos e/ou mecânicos são características fundamentais dessa experiência, que os testes de comportamento de dor evocados por estímulos podem capturar (como o teste de hargreaves de sensibilidade térmica e o teste von Frey de sensibilidade mecânica)^1,2. Embora tais testes dêem resultados robustos e reprodutíveis, eles são limitados por sua dependência da retirada reflexiva de um estímulo nocivo percebido. Isso pôs em causa uma dependência contínua da pesquisa ....

Protocolo

Todos os experimentos envolvendo o uso de camundongos e os procedimentos nele realizados foram aprovados pelos Comitês Institucionais de Cuidado e Uso de Animais do MD Anderson Cancer Center e da Universidade de Stanford, em estrita conformidade com o Guia dos Institutos Nacionais de Saúde para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.

1. Construção mca

1. Construa a câmara 1 com as seguintes dimensões: 125 mm x 125 mm x 125 mm (largura x profundidade x altura) a partir de acrílico branco opaco de 3 mm de espessura usado para as paredes laterais, piso, teto. Use um acrílico de 3 mm de espessura para a pared....

Resultados

O ensaio MCA tem sido usado com sucesso com vários modelos de dor de rato mecanisticamente distintos. A Figura 2 mostra dados onde a medida de escolha foi o cruzamento do ponto médio da câmara 2 (Figura 2A). Os dados obtidos usando o meio-termo versus fuga na câmara 3 são muito semelhantes, ~40 s para a metade versus ~45 s para a fuga da câmara 3 no modelo de lesão nervosa poupada (SNI) de dor neuropática com altura da sonda de 5 mm¹³.

Discussão

Como em todos os testes comportamentais, o manuseio adequado, a randomização e a cegueira ao tratamento dos animais são essenciais em todos os momentos. Dadas as insumos multifatoriais em comportamentos complexos e tomada de decisões, é imperativo que os animais sejam manuseados, habituados e testados da forma mais consistente possível, minimizando a angústia. Deve-se também ter cuidado para reproduzir o tempo de colocação do mouse na câmara 1, ligar as luzes LED e remover a barreira, uma vez que as diferenças aqui podem.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Luzes de tira LED brancas sintonizáveis de 32,8 pés 3000K-6000K, luzes de fita LED super brilhantes reguláveis com 600 LEDs SMD 2835	Lepro	SKU: 410087-DWW-US	Para câmara de iluminação 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html
'cama de espigões' e 'câmara 2 andares' impressas em 3D	Shapeways	N/A	Opcional, para sondas mecânicas como alternativa aos pinos de mapa embotados.
70% de etanol	Vários	N/A	Para limpar o MCA entre camundongos.
Acryl-Hinge 2	TAP Plastics	N/A	para fixar as tampas da câmara nas paredes traseiras. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122
Folha de acrílico fundido Chemcast, Clear	TAP Plastics	N/A	com 3 mm de espessura. Para a parede frontal da câmara 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510
Chemcast Acrílico Colorido Transparente, Vermelho Escuro Transparente - 50%	TAP Plásticos	N/A	3mm de espessura. 50% de transmissão de luz. Para paredes e tampas das câmaras 2 e 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519
Chemcast Translúcido & Acrílico Colorido Opaco, Branco Opaco - 0.1%	TAP Plásticos	N/A	3mm de espessura. Para paredes laterais e tampa da câmara 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341
Desinfetante (por exemplo, Quatricida)	Pharmacal Research Laboratories, Inc.	65020F	Para desinfetar MCA no final de uma sessão de teste.
Marcadores e quadro de apagamento a seco	Vários	N/A	Para adicionar informações experimentais ao início das imagens de vídeo.
Vários		N/A	opcionais, para sondas mecânicas. Use uma lixa para embotar as pontas afiadas antes de usar. Pode ser usado no lugar de peças impressas em 3D.
Toalhas de papel	Vários	N/A	Para limpar/desinfetar MCA.
SCIGRIP Weld-On #3 Cimento Acrílico	TAP Plastics	N/A	Para montar chapas de acrílico em câmaras e fixar dobradiças. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131
Cronômetro	Vários	N/A	Para registrar latências/tempos de permanência em tempo real ou a partir de vídeo gravado.
Temporizador	Vários	N/A	Para garantir que o LED acenda, a remoção da barreira e a conclusão do teste sejam cronometradas de forma consistente.
Câmara de vídeo	Várias	HDRCX405 Câmara de vídeo Handycam	Para gravar o comportamento do rato no dispositivo MCA. Pode ser substituído por qualquer câmera de vídeo de nível de consumidor com resolução de 1080p.
	Tripé Famall	N/A	Qualquer tripé que possa segurar a câmera na altura da bancada para gravar imagens MCA é aceitável.