Este protocolo descreve um novo método para administrar medicamentos antirretrovirais combinacionais orais que suprimem com sucesso a replicação do RNA do HIV-1 em camundongos humanizados.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Tratamento Antirretroviral Combinacional Oral em Camundongos Humanizados Infectados pelo HIV-1
Neste artigo
Resumo
Resumo
A pandemia do vírus da imunodeficiência humana (HIV-1) continua a se espalhar incessantemente em todo o mundo e, atualmente, não há vacina disponível contra o HIV. Embora a terapia antirretroviral combinacional (cTARV) tenha sido bem-sucedida na supressão da replicação viral, ela não pode erradicar completamente o reservatório de indivíduos infectados pelo HIV. Uma estratégia de cura segura e eficaz para a infecção pelo HIV exigirá métodos multifacetados e, portanto, os avanços dos modelos animais para a infecção pelo HIV-1 são fundamentais para o desenvolvimento da pesquisa de cura do HIV. Camundongos humanizados recapitulam as principais características da infecção pelo HIV-1. O modelo de camundongo humanizado pode ser infectado pelo HIV-1 e a replicação viral pode ser controlada com regimes de cTARV. Além disso, a interrupção da cART resulta em um rápido rebote viral em camundongos humanizados. No entanto, a administração de cART ao animal pode ser ineficaz, difícil ou tóxica, e muitos regimes de cART clinicamente relevantes não podem ser utilizados de forma ideal. Além de ser potencialmente insegura para os pesquisadores, a administração de cART por um procedimento de injeção diária intensiva comumente usado induz o estresse pela contenção física do animal. O novo método de cART oral para tratar camundongos humanizados infectados pelo HIV-1 descrito neste artigo resultou na supressão da viremia abaixo do nível de detecção, aumento da taxa de restauração CD4+ e melhoria da saúde geral em camundongos humanizados infectados pelo HIV-1.
Introdução
A expectativa de vida de indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana crônica (HIV) melhorou significativamente com o tratamento antirretroviral combinatório (cTARV)1,2. A cTARV reduz com sucesso a replicação do HIV-1 e aumenta a contagem de células T CD4+ para a normalidade na maioria dos participantes cronicamente infectados pelo HIV-13, resultando em melhora da saúde geral e redução drástica da progressão da doença4. No entanto, o reservatório latente do HIV-1 é estabelecido mesmo quando a TARV é iniciada durante a infecç....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
O tecido fetal humano anonimizado foi adquirido comercialmente. A pesquisa em animais foi realizada de acordo com protocolos aprovados pela Universidade da Califórnia, Los Angeles, e pelo Comitê de Pesquisa Animal (ARC) (UCLA), de acordo com todas as diretrizes federais, estaduais e locais. Especificamente, todos os experimentos foram realizados de acordo com as recomendações e diretrizes para alojamento e cuidado de animais de laboratório dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) e da Associação para a Avaliação e Acreditação de Cuidados com Animais de Laboratório (AALAC) Internacional sob o Número de Protocolo UCLA ARC 2010-038-02B. Todas as cirurgias foram realizadas....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Supondo que um rato médio pesando 25 g consuma 4 g de alimento por dia, a dose diária do medicamento através da ingestão oral corresponde a 2,88 mg/kg TFV, 83 mg/kg FTC e 768 mg/kg RAL. Para testar se o regime alimentar otimizado é tóxico e influencia a saúde geral em comparação com a injeção diária de cART, o peso dos ratos foi monitorado semanalmente antes e durante a cART através de injeção oral ou subcutânea. Não houve diferenças significativas de peso antes da administração da TARV em cada grupo (
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Um método de administração oral de cART é desenvolvido aqui para camundongos humanizados infectados pelo HIV-1, combinando três medicamentos antirretrovirais em alimentos ricos em nutrientes. Em comparação com a administração por injeções diárias, o parto oral é mais fácil de usar, limita a frequência de administração, reduz o manuseio dos animais, minimiza o estresse e melhora a segurança55. Até este ponto, apenas alguns estudos em camundongos humanizados 24,37,41
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
A SK é fundadora da CDR3 Inc. Os demais autores declaram que a pesquisa foi realizada na ausência de quaisquer relações comerciais ou financeiras que pudessem ser interpretadas como um potencial conflito de interesses.
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer aos Drs. Romas Geleziunas e Jeff Murry e ao pessoal da Gilead por fornecerem os medicamentos antirretrovirais utilizados neste estudo. Este trabalho foi financiado pelo NCI 1R01CA239261-01 (to Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core e Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (para Zhen), NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Este trabalho também foi apoiado pelo UCLA AIDS Institute, o James B. Pendleton Charitable Trust e a McCarthy Family Foundation.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Placa de Petri de 60 mm | Thermo Scientific Nunc | 150288 | Para aliquoting ART alimentos |
| APC anticorpo CD8 humano | Biolegend | 344722 | Para citometria de fluxo |
| BD LSRFortessa | BD biosciences | Para coleta de dados de fluxo | |
| Microesferas CD34 | Miltenyi Biotec | 130-046-702 | Para geração de camundongos NSG-BLT |
| Tubos de | centrífugaFalcon | 14-432-22 | Para dissolver ART |
| DietGel Boost | ClearH2O | 72-04-5022 | Para fazer comida ART |
| Elvitegravir | Gilead | Gifted de Gilead | |
| Emtricitabina | Gilead | Gifted de Gilead | |
| FITC anti-humano CD3 Anticorpo | Biolegend | 317306 | Para citometria de fluxo |
| Flowjo software | FlowJo | Para análise de dados de citometria de fluxo | |
| , primer direto do HIV-1: 5′-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3′; | IDT | personalizado | para carga viral Sonda RT-PCR |
| HIV-1: 5′-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3′; | IDT | personalizado | para carga viral RT-PCR |
| HIV-1 primer reverso: 5′-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3′; | IDT | Personalizado | Para carga viral RT-PCR |
| Tecido fetal humano | Advanced Bioscience Resources, Inc | ||
| Ratos, cepa NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ | O Laboratório Jackson | 5557 | Para construir os camundongos humanizados |
| Pacific Blue anti-humano CD45 | Biolegend | 304022 | Para citometria de fluxo |
| PerCP anti-humano CD4 Anticorpo | Biolegend | 300528 | Para citometria de fluxo |
| QIAamp Kits de RNA Viral | Qiagen | 52904 | Para medir a carga viral |
| Raltegravir | Merck | Gifted da Merck | |
| Raspadores de células estéreis | Thermo Scientific | 179693 | Para aliquotar alimentos |
| ART TaqMan RNA-To-Ct Kit de 1 passo | Applied Biosystems | 4392653 | Para detecção de carga viral plasmática |
| Tenofovir disoproxil fumarato | Gilead | Gifted da Gilead | |
| Trimetoprim-Sulfametoxazol | Pharmaceutical Associates | NDC 0121-0854-16 | Para manter os alimentos ART estéreis. Cada colher de chá de 5mL contém 200 mg de Sulfametoxazol, USP 40 mg de Trimetoprima, USP NMT 0,5% Álcool |
Referências
- Antiretroviral Therapy Cohort Collaboration. Life expectancy of individuals on combination antiretroviral therapy in high-income countries: a collaborative analysis of 14 cohort studies. Lancet. 372 (9635), 293-299 (2008).
- May, M. T., et al.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
