Name: Tratamento Antirretroviral Combinacional Oral em Camundongos Humanizados Infectados pelo HIV-1 (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Aprenda a administrar TARV combinado por via oral em camundongos humanizados infectados pelo HIV-1. Este método suprime a replicação do RNA viral com segurança e reduz o estresse animal em comparação com injeções diárias.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gostaríamos de agradecer aos Drs. Romas Geleziunas e Jeff Murry e ao pessoal da Gilead por fornecerem os medicamentos antirretrovirais utilizados neste estudo. Este trabalho foi financiado pelo NCI 1R01CA239261-01 (to Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core e Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (para Zhen), NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Este trabalho também foi apoiado pelo UCLA AIDS Institute, o James B. Pendleton Charitable Trust e a McCarthy Family Foundation.

O tecido fetal humano anonimizado foi adquirido comercialmente. A pesquisa em animais foi realizada de acordo com protocolos aprovados pela Universidade da Califórnia, Los Angeles, e pelo Comitê de Pesquisa Animal (ARC) (UCLA), de acordo com todas as diretrizes federais, estaduais e locais. Especificamente, todos os experimentos foram realizados de acordo com as recomendações e diretrizes para alojamento e cuidado de animais de laboratório dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) e da Associação para a Avaliação e Acreditação de Cuidados com Animais de Laboratório (AALAC) Internacional sob o Número de Protocolo UCLA ARC 2010-038-02B. Todas as cirurgias foram realizadas sob anestesia com cetamina (100 mg/kg)/xilazina (5 mg/kg) e isoflurano (2-3 vol%) e todos os esforços foram feitos para minimizar a dor e o desconforto dos animais.
1. Camundongos humanizados infectados com HIV-1
NOTA: Camundongos humanizados foram construídos conforme descrito anteriormente em30,31,49. O protocolo é brevemente descrito abaixo.
<ol><li>Purificar as células progenitoras hematopoiéticas CD34+ do fígado fetal humano através de microesferas anti-CD34 de acordo com o protocolo do fabricante.</li>
	<li>Anestesiar camundongos machos e fêmeas NOD/SCID/IL2Rγ−/− (NSG) de 6-8 semanas de idade e irradiar subletalmente (2,7 Gy) antes da cirurgia.</li>
	<li>Implante timo, derivado do mesmo doador que o fígado fetal, sob a cápsula renal junto com o fígado.</li>
	<li>Após a implantação, injete camundongos com 0,5 milhão a um milhão de células CD34+, por via intravenosa.</li>
	<li>Após 8-10 semanas, recolher 100 μL de sangue de rato através de sangria retro-orbital50 em tubos de microcentrífuga contendo 5 μL de EDTA e centrífuga a 350 x g durante 3 min.</li>
	<li>Armazenar o plasma a -80 °C para monitorizar a carga viral após o rato ter sido infectado com o VIH-1. Adicione 2 mL de solução de NH4C a 83% e incube por 5 minutos à temperatura ambiente para lisar os glóbulos vermelhos.</li>
	<li>Adicione 10 mL de RPMI com 10% de soro fetal bovino (FBS) para interromper a lise. Gire a 300 x g por 5 min.</li>
	<li>Aspirar sobrenadante. Células corantes com painel de anticorpos (ver Tabela de Materiais) e analisar por citometria de fluxo para verificar o enxerto de células imunes humanas.</li>
	<li>Infectar camundongos que exibem mais de 50% das células CD45+ circulantes por injeção de veia retroorbital51,52 com pelo menos 200 ng de p24 de uma cepa HIV-1 (ou seja, NFNSXSL9 30,53,54) usando uma seringa de insulina. Coletar sangue quinzenalmente para análise de citometria de fluxo e para medir a carga viral.</li>
</ol>2. Preparação de medicamentos antirretrovirais
<ol><li>Pesar drogas individuais; por exemplo, para fazer 10 copos de alimentos com cART, use raspadores de células estéreis para pesar 250 mg de FTC (Emtricitabina), 375 mg de TDF e 500 mg de RAL ou ELV em tubos de centrífuga estéril de 15 mL individuais em um gabinete de biossegurança.</li>
	<li>Adicionar 1 mL de DMSO em tubo FTC de 250 mg (concentração final de 250 mg/mL), adicionar 1,5 mL de DMSO em tubo de TDF de 375 mg (concentração final de 250 mg/mL) e adicionar 1mL de DMSO em tubo de 500 mg de RAL ou ELV (concentração final de 500 mg/mL). Mexa ou pipete a mistura de drogas até que esteja totalmente dissolvida e uma solução clara seja obtida.</li>
	<li>Use um filtro de membrana PVDF hidrofílico de tamanho de poro de 0,22 μM para esterilizar soluções com uma seringa estéril. Soluções medicamentosas individuais podem ser armazenadas a -20 °C por 12 semanas.</li>
	<li>Quando estiver pronto a utilizar, descongelar recentemente uma alíquota de cada solução medicamentosa a 37 °C até que a solução se torne límpida. Misture bem usando uma pipeta.</li>
	<li>Combine drogas e misture bem para compor a mistura mestre: 1 mL de FTC em DMSO, 1,5 mL de TDF em DMSO e 1 mL de ELV ou RAL em DMSO. NOTA: Esta quantidade fará 10 xícaras de comida.</li>
	<li>Adicione 350 μL de solução de mistura master cART em um copo para fazer um copo cART DietGel Boost.</li>
	<li>Adicionar 0,75 ml de Sulfametoxazol-Trimetoprima (concentração final de 0,48 mg/ml) ao copo.</li>
	<li>Mexa bem usando 1 mL de pontas de pipeta estéreis.</li>
	<li>Aliquote o copo de comida contendo cART do copo original com uma microespátula em uma placa de Petri de 60 mm, conforme necessário. Pese o alimento em uma balança para calcular a quantidade de copo de alimento contendo cART para cada gaiola de acordo com o número de camundongos.</li>
</ol>3. Administração de medicamentos antirretrovirais em camundongos infectados pelo HIV-1
<ol><li>Remova a ração regular da gaiola e substitua-a por um copo de comida contendo cART. NOTA: Em média, um rato vai comer até 5 g de comida por dia. Aproximadamente um copo de comida pode ser administrado a cinco ratos por 2 dias.</li>
	<li>Atualize a comida cART três vezes por semana.</li>
	<li>Pesar copos usados para monitorar a ingestão. Pese os ratos semanalmente para confirmar o consumo.</li>
</ol>4. Monitore a carga viral por PCR em tempo real
<ol><li>Avaliar as células imunes humanas (níveis de células T CD4 e CD8) e a replicação do HIV-1 em camundongos BLT a cada 2 semanas por sangramento retroorbital. Colha o plasma seguindo as instruções nas etapas 1.5-1.8.</li>
	<li>Monitore as cargas virais plasmáticas de camundongos infectados com HIV-1 antes e durante a administração oral de cART por 8 semanas. Extrair o RNA viral plasmático do plasma usando um kit de extração de RNA viral e quantificá-lo por PCR em tempo real usando os primers e sondas (ver Tabela de Materiais) conforme descrito anteriormente 27,30,31. Use o seguinte protocolo de ciclismo: 48 °C (15 min), 95 °C (10 min), depois pedale 95 °C (15 s), 60 °C (1 min) por 45 ciclos.</li>
</ol>5. Avaliar as relações CD4/CD8 por citometria de fluxo
<ol><li>Prepare suspensões unicelulares do sangue periférico de hemorragias quinzenais seguindo os passos 1.5-1.8.</li>
	<li>Células corantes com marcadores de superfície e analisadas por citometria de fluxo. Utilizar os seguintes anticorpos marcadores de superfície 27,30,43,49 na citometria de fluxo: CD45 (clone HI30), CD8 (clone SK1), CD3 (clone OKT3), CD4 (clone RPA-T4)27,30,42,49.</li>
</ol>

A SK é fundadora da CDR3 Inc. Os demais autores declaram que a pesquisa foi realizada na ausência de quaisquer relações comerciais ou financeiras que pudessem ser interpretadas como um potencial conflito de interesses.

Um método de administração oral de cART é desenvolvido aqui para camundongos humanizados infectados pelo HIV-1, combinando três medicamentos antirretrovirais em alimentos ricos em nutrientes. Em comparação com a administração por injeções diárias, o parto oral é mais fácil de usar, limita a frequência de administração, reduz o manuseio dos animais, minimiza o estresse e melhora a segurança55. Até este ponto, apenas alguns estudos em camundongos humanizados 24,37,41</su...

A expectativa de vida de indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana crônica (HIV) melhorou significativamente com o tratamento antirretroviral combinatório (cTARV)1,2. A cTARV reduz com sucesso a replicação do HIV-1 e aumenta a contagem de células T CD4+ para a normalidade na maioria dos participantes cronicamente infectados pelo HIV-13, resultando em melhora da saúde geral e redução drástica da progressão da doença4. No entanto, o reservatório latente do HIV-1 é estabelecido mesmo quando a TARV é iniciada durante a infecção aguda 5,6,7. Os reservatórios persistem ao longo dos anos durante a TARV e o rápido rebote viral após a interrupção da TARV está bem documentado 8,9. Pessoas vivendo com HIV em TARV também estão predispostas a um maior risco de comorbidades como doenças cardiovasculares, câncer e distúrbios neurológicos10,11,12. Portanto, uma cura funcional para o HIV é necessária. Modelos animais para a infecção pelo HIV-1 oferecem vantagens óbvias no desenvolvimento e validação de novas estratégias de cura do HIV13,14,15. Camundongos humanizados, como modelo animal de pequeno porte, podem proporcionar reconstituição de células imunes humanas multilinhagem em diferentes tecidos, o que permite o estudo minucioso da infecção pelo HIV16,17,18,19. Dentre os modelos humanizados, o modelo humanizado de medula óssea-fígado-timo (BLT) recapitula com sucesso a infecção crônica pelo HIV-1, bem como as respostas imunes humanas funcionais à infecção pelo HIV-1 20,21,22,23,24. Portanto, o modelo humanizado de camundongo BLT tem sido amplamente utilizado para investigar diversos aspectos no campo da pesquisa sobre HIV. Camundongos BLT humanizados não são apenas modelos bem estabelecidos para a recapitulação da infecção persistente pelo HIV-1 e patogênese, mas também ferramentas consequentes para a avaliação de estratégias de intervenção baseadas em terapia celular. Os autores atuais e outros demonstraram que o modelo humanizado de camundongos BLT recapitula a infecção persistente pelo HIV-1 e a patogênese 25,26,27 e fornece ferramentas para avaliar estratégias de intervenção baseadas em terapia celular 28,29,30,31,32,33 .
Os esquemas de cTARV que consistem em combinações de medicamentos antirretrovirais que são tomados diariamente suprimem a replicação do HIV-1 a ponto de a carga viral em indivíduos tratados com sucesso permanecer indetectável a longo prazo34. Os resultados do tratamento de camundongos humanizados infectados pelo HIV com regimes de TARV clinicamente relevantes assemelham-se aos observados em indivíduos infectados pelo HIV-1 tratados com TARV22: os níveis de HIV-1 são suprimidos abaixo dos limites de detecção e interrupção dos resultados da cART em um rebote da replicação do HIV do reservatório latente35. A injeção subcutânea (SC)27,36,37 ou intraperitoneal (IP)37,38,39 é a via comumente utilizada para o tratamento da cART em camundongos humanizados. No entanto, a injeção diária intensiva induz estresse aos animais pela contenção física40. Também é trabalhoso e potencialmente inseguro para os pesquisadores devido ao aumento da exposição ao HIV durante o uso de objetos cortantes. A administração oral é ideal para imitar a absorção, distribuição e excreção de medicamentos cART que são tomados por indivíduos infectados pelo HIV-1. A administração oral geralmente envolve procedimentos personalizados e muitas vezes trabalhosos para colocar os medicamentos antirretrovirais em alimentos esterilizados (necessários devido à imunodeficiência dos camundongos) 24,37,41 ou água 42,43,44,45,46 , que pode ou não ser quimicamente compatível com muitos medicamentos antirretrovirais, ou resultar em algo que os ratos não comeriam ou beberiam prontamente (o que afetaria a dose e os níveis de drogas no corpo). O novo método de administração de cART peroral proposto aqui supera as tentativas de parto anteriores devido à sua compatibilidade com diferentes tipos de medicamentos antirretrovirais, segurança e facilidade de preparação e administração, e redução do estresse e ansiedade animal resultantes da injeção diária.
Tenofovir disoproxil fumarato (TDF), Elvitegravir (ELV) e Raltegravir (RAL) são drogas pouco solúveis em água. Curiosamente, o aumento da biodisponibilidade do TDF é observado com alimentos gordurosos, sugerindo que a inibição competitiva das lipases por alimentos gordurosos pode fornecer certa proteção para o TDF47. Portanto, os copos DietGel Boost foram selecionados para substituir a ração regular de roedores como método de entrega com base em seu modesto teor de gordura (20,3 g por 100 g) em comparação com a ração regular de roedores (10 g por 100 g) e uma dieta típica rica em gordura de camundongo (40-60 g por 100 g)48. O peso total de um copo é de 75 g; assim, cada xícara conterá a quantidade de alimento e, portanto, droga, suficiente para cinco ratos ao longo de 3 dias.

<table><tbody><tr><td>Placa de Petri de 60 mm</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>150288</td><td>Para aliquoting ART alimentos</td></tr><tr><td>APC anticorpo CD8 humano</td><td>Biolegend</td><td>344722</td><td>Para citometria de fluxo</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>Para coleta de dados de fluxo</td></tr><tr><td>Microesferas CD34</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-046-702</td><td>Para geração de camundongos NSG-BLT</td></tr><tr><td>Tubos de</td> <td>centrífugaFalcon</td><td>14-432-22</td><td>Para dissolver ART</td></tr><tr><td>DietGel Boost</td><td>ClearH2O</td><td>72-04-5022</td><td>Para fazer comida ART</td></tr><tr><td>Elvitegravir</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gifted de Gilead</td></tr><tr><td>Emtricitabina</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gifted de Gilead</td></tr><tr><td>FITC anti-humano CD3 Anticorpo</td><td>Biolegend</td><td>317306</td><td>Para citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Flowjo software</td><td>FlowJo</td><td></td><td>Para análise de dados de citometria de fluxo</td></tr><tr><td>, primer direto do HIV-1: 5&prime;-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>personalizado</td><td>para carga viral Sonda RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1: 5&prime;-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>personalizado</td><td>para carga viral RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1 primer reverso: 5&prime;-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Personalizado</td><td>Para carga viral RT-PCR</td></tr><tr><td>Tecido fetal humano</td><td>Advanced Bioscience Resources, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ratos, cepa NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>O Laboratório Jackson</td><td>5557</td><td>Para construir os camundongos humanizados</td></tr><tr><td>Pacific Blue anti-humano CD45</td><td>Biolegend</td><td>304022</td><td>Para citometria de fluxo</td></tr><tr><td>PerCP anti-humano CD4 Anticorpo</td><td>Biolegend</td><td>300528</td><td>Para citometria de fluxo</td></tr><tr><td>QIAamp Kits de RNA Viral</td><td>Qiagen</td><td>&nbsp; 52904</td><td>Para medir a carga viral</td></tr><tr><td>Raltegravir</td><td>Merck</td><td></td><td>Gifted da Merck</td></tr><tr><td>Raspadores de células estéreis</td><td>Thermo Scientific</td><td>179693</td><td>Para aliquotar alimentos</td></tr><tr><td>ART TaqMan RNA-To-Ct Kit de 1 passo</td><td>Applied Biosystems</td><td>4392653</td><td>Para detecção de carga viral plasmática</td></tr><tr><td>Tenofovir disoproxil fumarato</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gifted da Gilead</td></tr><tr><td>Trimetoprim-Sulfametoxazol</td><td>Pharmaceutical Associates</td><td>NDC 0121-0854-16</td><td>Para manter os alimentos ART estéreis. Cada colher de chá de 5mL contém 200 mg de Sulfametoxazol, USP 40 mg de Trimetoprima, USP NMT 0,5% Álcool</td></tr></tbody></table>

tratamento antirretroviral combinacional oral em camundongos humanizados infectados pelo hiv-1

Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

A pandemia do vírus da imunodeficiência humana (HIV-1) continua a se espalhar incessantemente em todo o mundo e, atualmente, não há vacina disponível contra o HIV. Embora a terapia antirretroviral combinacional (cTARV) tenha sido bem-sucedida na supressão da replicação viral, ela não pode erradicar completamente o reservatório de indivíduos infectados pelo HIV. Uma estratégia de cura segura e eficaz para a infecção pelo HIV exigirá métodos multifacetados e, portanto, os avanços dos modelos animais para a infecção pelo HIV-1 são fundamentais para o desenvolvimento da pesquisa de cura do HIV. Camundongos humanizados recapitulam as principais características da infecção pelo HIV-1. O modelo de camundongo humanizado pode ser infectado pelo HIV-1 e a replicação viral pode ser controlada com regimes de cTARV. Além disso, a interrupção da cART resulta em um rápido rebote viral em camundongos humanizados. No entanto, a administração de cART ao animal pode ser ineficaz, difícil ou tóxica, e muitos regimes de cART clinicamente relevantes não podem ser utilizados de forma ideal. Além de ser potencialmente insegura para os pesquisadores, a administração de cART por um procedimento de injeção diária intensiva comumente usado induz o estresse pela contenção física do animal. O novo método de cART oral para tratar camundongos humanizados infectados pelo HIV-1 descrito neste artigo resultou na supressão da viremia abaixo do nível de detecção, aumento da taxa de restauração CD4+ e melhoria da saúde geral em camundongos humanizados infectados pelo HIV-1.

Supondo que um rato médio pesando 25 g consuma 4 g de alimento por dia, a dose diária do medicamento através da ingestão oral corresponde a 2,88 mg/kg TFV, 83 mg/kg FTC e 768 mg/kg RAL. Para testar se o regime alimentar otimizado é tóxico e influencia a saúde geral em comparação com a injeção diária de cART, o peso dos ratos foi monitorado semanalmente antes e durante a cART através de injeção oral ou subcutânea. Não houve diferenças significativas de peso antes da administração da TARV em cada grupo (<strong class="xfig...

Este protocolo descreve um novo método para administrar medicamentos antirretrovirais combinacionais orais que suprimem com sucesso a replicação do RNA do HIV-1 em camundongos humanizados.

Tratamento Antirretroviral Combinacional Oral em Camundongos Humanizados Infectados pelo HIV-1

The human immunodeficiency virus (HIV-1) pandemic continues to spread unabated worldwide, and currently, there is no vaccine available against HIV. ...

Este protocolo descreve um novo método para administrar medicamentos antirretrovirais de combinação oral, ou TARV, que suprime com sucesso a replicação do RNA do HIV em camundongos humanizados. O novo método de TARV oral supera as tentativas de parto anteriores devido à sua segurança, facilidade de preparação e administração e redução do estresse animal resultante de uma injeção diária. O método de entrega oral proposto para suprimir a replicação do RNA do HIV em camundongos humanizados será altamente valioso para estudos pré-clínicos de prova de conceito para desenvolver novos tratamentos de cura que imitem de perto a administração de medicamentos em indivíduos crônicos infectados pelo HIV.Demonstrando o procedimento estará Valerie Rezak, gerente de laboratório e técnica do nosso laboratório. Comece pesando drogas individuais. Faça 10 copos de alimentos com cART usando raspadores de células estéreis para pesar 250 miligramas de FTC, 375 miligramas de TDF e 500 miligramas de RAL ou ELV em tubos de centrífuga individuais e estéreis de 50 mililitros em um gabinete de biossegurança.Adicionar DMSO ao tubo FTC e TDF para formar uma concentração final de 250 miligramas por mililitro, e n

oral-combinational-antiretroviral-treatment-hiv-1-infected-humanized

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

A geração e caracterização de células T específicas de tumor utilizando ratinhos humanizados é descrita aqui. Tecido do timo humano e geneticamente modificadas de células-tronco hematopoiéticas são transplantadas em ratos imunocomprometidos. Isto resulta na reconstituição de um sistema imune humano permitindo engenharia para exame in vivo de anticorpos anti-tumorais respostas imunes.

Utilizando o rato como um BLT humanizado baseado Stem Modelo Gene Therapy célula tumoral

Este vídeo demonstra um ensaio para avaliar a eficácia da terapia antirretroviral oral combinada (cART oral) em um modelo de camundongo humanizado infectado pelo vírus da imunodeficiência humana-1 (HIV-1). Uma combinação de medicamentos direcionados ao HIV-1, incluindo inibidores da transcriptase reversa de nucleosídeos e inibidores de transferência de fita integrase, é administrada junto com um suplemento nutricional e antibióticos. Após o consumo dessa mistura pelos camundongos humanizados...

Terapia Antirretroviral Combinada Oral para Tratar a Infecção pelo HIV-1 em Modelo de Camundongo Humanizado

O vídeo demonstra uma técnica para gerar um modelo de camundongo humanizado com imunidade projetada baseada em células-tronco contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV). O tecido do timo fetal humano e as células-tronco hematopoiéticas (HSCs) projetadas são implantados na cápsula renal de um camundongo gravemente imunocomprometido. As HSCs, que expressam receptores de antígenos quiméricos (CARs) contra o HIV, são misturadas em uma mistura de proteínas gelatinosas que promove sua...

Construindo um modelo de camundongo humanizado com imunidade projetada contra o HIV

Este protocolo descreve os métodos na construção de um modelo humanizado de camundongo medula óssea/fígado/timo com imunidade projetada baseada em células-tronco contra a infecção pelo HIV.

De células-tronco Baseado Imunidade Engineered contra infecção por HIV no modelo humanizado mouse

Este protocolo fornece um método para estabelecer ratos humanizados (hu-NSG) através da injeção de colestase de células estaminais hematopoiéticas em camundongos NSG neonatais condicionada por radiação. O mouse hu-NSG é suscetível à infecção pelo HIV e terapia anti-retroviral combinatória (carrinho) e serve como um modelo fisiopatológico apropriado para investigações de latência e a replicação do HIV.

Humanizado NOD/SCID/IL2rγnula (hu-NSG) Mouse modelo para estudos de latência e a replicação do HIV

Este protocolo fornece um método confiável para estabelecer camundongos humanizados com o sistema imunológico humano e células hepáticas. Os ratos imunodeficientes reconstituídos duplos conseguidos através da injeção pseudoaneurysms de hepatócitos humanos e de pilhas de haste hematopoietic de CD34+ são suscetíveis à infecção do vírus-1 da imunodeficiência humana e recapitulam dano de fígado como observado em Doentes infectados pelo VIH.

Estabelecimento do modelo humanizado duplo do rato de TK-NOG para a patogénese HIV-associada do fígado

Aqui estão três abordagens experimentais para estudar a dinâmica da infecção pelo HIV em camundongos humanizados. O primeiro permite o estudo de eventos de infecção crônica, enquanto os dois últimos permitem o estudo de eventos agudos após infecção primária ou reativação viral.

Infecção por HIV crônica, aguda e reativada em modelos de camundongos imunodeficientes humanizados

Desenvolvemos um protocolo para a geração e avaliação de um modelo de camundongo NOG infectado por vírus humanizado e humano com base no transplante de células-tronco, exposição intravaginal do vírus da imunodeficiência humana e RNA PCR digital de gota digital Quantificação.

Camundongos NOG humanizados para exposição intravaginal ao HIV e tratamento da infecção pelo HIV

Tropismo do HIV pode ser inferida a partir da região V3 do envelope viral. V3 é PCR amplificados em triplicata utilizando nested RT-PCR, sequenciado, e interpretados usando software de bioinformática. Amostras com a seqüência de um ou mais (s) com pontuações baixas são G2P classificados como não-R5 vírus.

Inferência genotípica do HIV-1 Tropismo Usando de base populacional de Seqüenciamento V3

Ensaios de citotoxicidade para medir as respostas das células natural killer lítica de células infectadas pelo HIV é limitada pela pureza das células-alvo. Demonstramos aqui o isolamento de uma população altamente purificada de HIV-1 infectados primários de células T explosões tirando vantagem da capacidade do HIV-1 s para down-modular CD4.

Preparação e Uso de HIV-1 infectados CD4 + T-Primária células como as células-alvo em Ensaios Natural Killer Celular citotóxicos

Aprenda a administrar TARV combinado por via oral em camundongos humanizados infectados pelo HIV-1. Este método suprime a replicação do RNA viral com segurança e reduz o estresse animal em comparação com injeções diárias.

Tratamento Antirretroviral Combinacional Oral em Camundongos Humanizados Infectados pelo HIV-1

Explorar mais vídeos