Técnicas de Dissecção e Amostragem Histológica do Coração em Modelos de Grandes Animais para Doenças Cardiovasculares

Resumo

Devido à anatomia complexa, um protocolo de dissecção e colheita consistentemente reprodutível para amostras cardíacas pode ser difícil de implementar. Este manuscrito apresenta os elementos-chave de alguns protocolos padrão de dissecção cardíaca, destacando tanto as abordagens de exame macroscópica quanto os locais de amostragem comumente utilizados para o exame histopatológico.

Resumo

O exame grosseiro padrão e a amostragem são elementos-chave na reprodutibilidade e sucesso de estudos experimentais de doenças cardiovasculares realizados em animais de grande porte. Considerando a complexa anatomia do coração, as diferenças entre espécies e os tipos de reações compensatórias e patológicas, protocolos consistentes são difíceis de implementar. A utilização de protocolos de dissecção múltipla é geralmente adaptada para se adequar à experiência do pró-setor, e a preferência pessoal continua a ser uma fonte de variabilidade experimental e interobservador. Aqui, o objetivo é apresentar as principais características anatômicas e marcos, protocolos de dissecção e padrões de amostragem histológica do coração em algumas espécies comumente utilizadas (incluindo cães, suínos, ruminantes e gatos) como modelos de doenças cardiovasculares.

Dois protocolos de exame grosseiro padrão são apresentados aqui. Primeiro, o método de entrada-saída, que segue a direção fisiológica do fluxo sanguíneo através do coração e grandes vasos (frequentemente usado em cães, ruminantes e porcos), e segundo, a técnica de dissecção de quatro câmaras (exemplificada em gatos). Ambas as técnicas podem ser adaptadas a qualquer espécie em determinadas circunstâncias experimentais. Os protocolos de amostragem incluem todas as áreas de interesse (linfonodo sinoatrial, ventrículos, septo interventricular, átrios, válvulas e aorta) e, se bem realizados, melhoram tanto a reprodutibilidade quanto a confiabilidade dos estudos experimentais.

Introdução

Devido à anatomia complexa e ao rigor precoce, que podem interferir na avaliação da espessura da parede cardíaca, o exame macroscópica do coração é desafiador e propenso a vários erros relacionados à técnica ou de interpretação. Isso é amplificado pelas variações morfológicas interespecíficas e pelo fato de que muitas patologias cardíacas clínicas importantes (incluindo casos precoces de doenças coronarianas, fibrose, arterite e amiloidose) não estão associadas a alterações macroscópicas, sendo, em essência, patologias histológicas. Um protocolo padronizado de dissecção e colheita histológica de amostras pode trazer consistência entre os observadores e, ao mesmo tempo....

Protocolo

O protocolo experimental recebeu acordo bioético (nº 311 de 2022) e foi aprovado pelo Comitê de Bioética da Universidade de Ciências Agrárias e Medicina Veterinária Cluj-Napoca, em conformidade com a legislação nacional (Lei nº 43 de 2014) e europeia (Diretiva da UE nº 63 de 2010). Consulte a Tabela de Materiais para obter detalhes sobre todos os materiais e instrumentos utilizados neste protocolo.

1. Protocolo de necropsia

NOTA: Recomenda-se que o mesmo protocolo de necropsia seja utilizado para todas as espécies apresentadas, devido à facilidade de acesso quando realizada

Resultados

Este protocolo foi utilizado para visualizar características anatômicas e coletar amostras para exame histológico do coração em quatro espécies diferentes (cão, gato, porco e vaca). O protocolo de necropsia foi repetido em cada uma das espécies acima mencionadas, mas ilustrado apenas em cães. O protocolo de necropsia inicia-se com um extenso exame externo do corpo (Figura 1A) (incluindo a pele, linfonodos exploráveis e mucosa externa), medindo o peso total e pontuando o estado geral do anima.......

Discussão

Ao executar o protocolo atual, várias etapas críticas devem ser cuidadosamente consideradas para resultados consistentes. Em animais jovens, as medidas cardíacas são diferentes daquelas em adultos (incluindo a espessura da parede ventricular) e, geralmente, o coração representa maior proporção do peso corporal^11,12. O grau de hipertrofia ventricular pode ser quantificado pela aplicação de uma fórmula de peso geral, a razão entre o ventrículo esquerdo mais septo d.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução salina a 0,9%	B. BRAUN MELSUNGEN AG		Para lavar todo o sangue e coágulos sanguíneos do coração.
10% de formalina tamponada neutra (NBF)	Caminho	Q 11699404	Materiais para coleta de amostras histopatológicas.
Pinça de corte ósseo	HELEN SRL	LS109HV	Instrumento robusto para cortar osso.
Tábua de cortar	Ambition	86304	Para uma manipulação mais fácil, e corte dos órgãos.
Solução descalcificante	Thermo Scientific TBD-2	6764004	mistura 1:1 de ácido fórmico a 8% e ácido clorídrico.
Câmera digital	Canon Inc.	PowerShot SX540 HS	Para documentação fotográfica e videográfica.
Fórceps	MKD-Medicale	15-430	Instrumentos de dissecação.
histológicos	Q Path	720-2215	Materiais para coleta de amostras histopatológicas. Dimensões: 3 &vezes; 2,5 &vezes; 0,4 cm
Faca	TEHNO FOOD COM SERV SRL	D2006/15	Lâmina afiada para corte de tecidos moles.
Luvas de látex	MKD-Medicale	SANTEX-S	Equipamento de proteção.
Máscara	MKD-Medicale	21221	Equipamento de proteção.
Placas de Petri	MKD-Medicale	0598-1V	Materiais para coleta de amostras de testes auxiliares.
Recipientes de plástico	Corning Gosselin	TP200-02	Materiais para coleta de amostras histopatológicas.
Balança	ESPERANZA	MEEKS008	Para pesagem dos órgãos.
Balança	Branca Ofertas	72	Para pesar os assuntos.
Bisturi	MKD-Medicale	10322E	Lâmina afiada para cortar tecidos moles.
Tesoura	MKD-Medicale	13-260 Instrumentos de	dissecação.
Scrub	MKD-Medicale	410100-52	Equipamento de proteção.
Seringas	MKD-Medicale	10573EU	Materiais para coleta de amostras de testes auxiliares.

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