Artigo de método

Indução e Diversos Indicadores de Avaliação da Encefalomielite Autoimune Experimental

DOI:

10.3791/63866

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9 de setembro de 2022

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1Putuo People's Hospital, Shanghai Key Laboratory of Signaling and Disease Research, School of Life Sciences and Technology, Tongji University, 2National Laboratory of Biomacromolecules, CAS Center for Excellence in Biomacromolecules, Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences, 3Department of Infectious Diseases, Shanghai Key Laboratory of Infectious Diseases and Biosafety Emergency Response, National Medical Center for Infectious Diseases, Huashan Hospital, Fudan University

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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O presente protocolo descreve a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo utilizando glicoproteína de oligodendrócitos de mielina e monitorando o processo da doença usando um sistema de pontuação clínica. Os sintomas experimentais relacionados à encefalomielite autoimune são analisados usando tomografia microcomputadorizada de fêmur de camundongo e teste de campo aberto para avaliar o processo da doença de forma abrangente.

Resumo

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A esclerose múltipla (EM) é uma doença autoimune típica do sistema nervoso central (SNC) caracterizada por infiltração inflamatória, desmielinização e dano axonal. Atualmente, não há medidas para curar completamente a EM, mas várias terapias modificadoras da doença (DMT) estão disponíveis para controlar e mitigar a progressão da doença. Existem semelhanças significativas entre as características patológicas do SNC da encefalomielite autoimune experimental (EAE) e pacientes com EM. O EAE tem sido amplamente utilizado como um modelo representativo para determinar a eficácia dos medicamentos para EM e explorar o desenvolvimento de novas terapias para a doença da EM. A indução ativa de EAE em camundongos tem um efeito estável e reprodutível e é particularmente adequada para estudar os efeitos de drogas ou genes na neuroinflamação autoimune. O método de imunização de camundongos C57BL/6J com glicoproteína de oligodendrócitos de mielina (MOG35-55) e a avaliação diária dos sintomas da doença usando um sistema de pontuação clínica são compartilhados principalmente. Dada a complexa etiologia da SM com diversas manifestações clínicas, o sistema de pontuação clínica existente não pode satisfazer a avaliação do tratamento da doença. Para evitar as deficiências de uma única intervenção, novos indicadores para avaliar EAE com base nas manifestações clínicas de humor semelhante à ansiedade e osteoporose em pacientes com EM são criados para fornecer uma avaliação mais abrangente do tratamento da EM.

Introdução

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As doenças autoimunes são um espectro de distúrbios causados pela resposta imune do sistema imunológico aos seus próprios antígenos, resultando em danos ou disfunção tecidual1. A esclerose múltipla (EM) é uma doença autoimune crônica de polineuropatia no sistema nervoso central (SNC), caracterizada por infiltração inflamatória, desmielinização e degeneração axonal neuronal 2,3. Atualmente, a EM afetou até 2,5 milhões de pessoas em todo o mundo, principalmente jovens e pessoas de meia-idade com idades entre 20 e 40 anos, que são muitas vezes a espinha dorsal de suas famílias e da socieda....

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Protocolo

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O Comitê de Cuidados com os Animais da Universidade de Tongji aprovou o presente trabalho, e todas as diretrizes de cuidados com os animais foram seguidas. Camundongos C57BL/6J machos ou fêmeas entre 8-12 semanas de idade foram utilizados para os experimentos. Garantiu-se que a idade e o sexo fossem os mesmos nos grupos experimentais; caso contrário, a suscetibilidade à doença foi afetada. Os camundongos foram alojados em um ambiente específico livre de patógenos com ciclos alternados de 12 h de luz e escuridão sob condições constantes (temperatura ambiente de 23 ± 1 °C, umidade de 50% ± 10%), com livre acesso a alimentos e água de camundongos.

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Resultados

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Após a imunização dos camundongos, o peso corporal dos camundongos é registrado diariamente, e seus sintomas clínicos são avaliados de acordo com o protocolo descrito acima (etapa 4). Em camundongos C57BL / 6J imunizados com peptídeo MOG, porque a localização da lesão está confinada principalmente à medula espinhal, a patogênese dos camundongos EAE se espalha da extremidade da cauda até a cabeça. No início da doença, os camundongos EAE exibem fraqueza e queda da cauda, seguidos por fraqueza dos membros posteriores, movim.......

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Discussão

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A SM é uma doença inflamatória desmielinizante do SNC e é um dos distúrbios neurológicos mais comuns causadores de incapacidade crônica em jovens, impondo um enorme fardo às famílias e à sociedade 3,4. A SM sempre foi classificada como uma doença autoimune mediada por células T específicas de órgãos, induzindo o sistema autoimune a corroer lentamente o SNC, o que envolverá múltiplos sistemas em todo o corpo27. Os sintomas clínicos típicos .......

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Divulgações

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Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

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Os autores reconhecem o apoio da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (32070768, 31871404, 31900658, 32270754) e do State Key Laboratory of Drug Research.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Seringa de 1 mL (com agulha de 26 G)Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd60017031
tubo de microcentrífuga de 2 mLHAIKELASIKY-LXG2A
22 G agulhaShanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd60017208
Complete Freund' s AdjuvanteSigmaF5881Armazenado a 4 ° C, 1 mg de MTB inativado por calor (H37Ra) por mL
Sistema de preferência de lugar condicionadoShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdComportamento animal
EtanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10009218Armazenado no
RT Sistema de análise de vídeo de atividade de locomoção (campo aberto)Shanghai Jiliang Software Technology Co., LtdDigBehv-002Comportamento animal
MOG35-55 peptídeoGill Biochemical Co., LtdGLS-Y-M-03590Armazenado a -20 ° C
Mycobacterium tuberculosis H37RaBD231141Armazenado a 4 ° C
Câmara de reação de campo abertoShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdComportamento animal
Toxina da coquelucheCalbiochem516560Armazenado a 4 &graus; C
Fosfato tampolado com solução salinaFabricado em nosso laboratório
TesouraShanghai Medical Instrument (grupo) Co., LtdJ21010
Filme de vedaçãoHeathrow ScientificHS 234526B
Sorvall Legend Micro 21R MicrocentrífugaThermo Scientific75002447
Bola de açoQIAGEN69975
Pinça TissueLyser IIQIAGEN85300
Shanghai Medical Instrument (grupo) Co., LtdJD1060
μ Scanner microCT de mesa CT 35Scanco Medical AG, Bassersdorf, Suíça

Referências

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  1. Zhernakova, A., Withoff, S., Wijmenga, C. Clinical implications of shared genetics and pathogenesis in autoimmune diseases. Nature Reviews Endocrinology. 9 (11), 646-659 (2013).
  2. Filippi, M., et al. Multiple sclerosis. Nature Reviews Disease Primers. 4

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Etiquetas

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