Um modelo murino clinicamente relevante de fibrose peritoneal por dialisado e cateteres

Resumo

Pacientes com fibrose peritoneal grave apresentam alta morbidade e mortalidade. O mecanismo da fibrose peritoneal não é claro. Neste estudo, descrevemos um modelo murino experimental simples de fibrose peritoneal induzida pela injeção de fluido de diálise peritoneal.

Resumo

A fibrose peritoneal pode ocorrer em pacientes submetidos à diálise peritoneal (DP), e pacientes com fibrose peritoneal grave apresentam alta morbidade e mortalidade. Peritonite, fluido de diálise peritoneal com alto teor de glicose e um longo período de DP precipitam o início da fibrose peritoneal. Um estudo animal da fibrose peritoneal é necessário devido às limitações dos estudos em humanos e in vitro . No entanto, a maioria dos modelos animais não mimetiza condições clínicas. Para estudar a fibrose peritoneal, desenvolvemos um modelo murino clinicamente relevante implantando um cateter peritoneal e injetando 2,5% de fluido de DP com alto teor de glicose mais 20 mM de metilglioxal (MGO) na cavidade peritoneal diariamente por 21 dias. O implante do cateter peritoneal evita lesões peritoneais por agulhas e mimetiza pacientes clínicos com DP. A coloração por imunofluorescência mostrou que os miofibroblastos se acumularam no peritônio fibrótico. O grupo experimental apresentou menor volume de ultrafiltração e função de transporte da membrana peritoneal (teste de equilíbrio peritoneal). Neste artigo, fornecemos um protocolo detalhado do modelo.

Introdução

A diálise peritoneal (DP) é um tipo de terapia renal substitutiva recebida por cerca de 11% dos pacientes com doença renal terminal (DRT)¹. Estudos relataram que a fibrose peritoneal se desenvolve em pacientes que recebem DP². A esclerose peritoneal encapsulante (EEF), uma forma grave de fibrose peritoneal, resulta em alta morbidade e mortalidade³. Os fatores de risco da fibrose peritoneal incluem peritonite, líquido de diálise peritoneal com alto teor de glicose, longo período de DP e fatores genéticos⁴. O mecanismo d....

Protocolo

Os experimentos foram aprovados e conduzidos de acordo com o Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Faculdade de Medicina da Universidade Nacional de Taiwan e da Faculdade de Saúde Pública (IACUC). Todos os ratos foram alojados sob cuidados padrão.

1. Experiência animal

1. Use camundongos C57BL / 6 machos e fêmeas do tipo selvagem (WT) com mais de 11 semanas de idade.
2. Prepare os materiais cirúrgicos, incluindo uma porta de silicone 4-french de camundongo, luvas, cortinas, cateteres, suturas e agulhas.
3. Implante a porta do mouse da seguinte maneira:<....

Resultados

A histologia do tecido peritoneal foi examinada, o que mostrou que a fibrose peritoneal foi induzida com sucesso no grupo PD fluido mais MGO (PDF). A coloração por imunofluorescência do peritônio visceral da superfície hepática mostrou maior acúmulo de miofibroblastos no peritônio lesado do grupo PDF do que no grupo controle (Figura 1). Conforme mostrado na Figura 2A, o grupo PDF apresentou um volume de ultrafiltração menor do que o grupo controle. Conforme most.......

Discussão

O peritônio tem um peritônio visceral e parietal, cobrindo os órgãos abdominais e as paredes abdominais. É composto por uma monocamada de células mesoteliais, uma camada submesotelial, serosa, fibroblastos, linfócitos e proteínas secretadas¹⁴. A fibrose peritoneal é a perda e desnudamento de células mesoteliais, espessamento submesotelial e acúmulo de muitas células inflamatórias, como miofibroblastos e macrófagos ^4,14

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
anticorpo anti-amplo da citoqueratina	abcam	ab9377
Beckman Coulter	Beckman Coulter	AU5800	Analisador bioquímico
DAPI, 4′, anticorpo anti-diamidino-2-fenilindol	Sigma-Aldrich	98718-90-3
Cortinas			qualquer
cabra FITC anti-coelho	Jackson ImmunoResearch Secundário Anticorpo	111-095-144
Luvas			qualquer
GraphPad Prizm	GraphPad Software	GraphPad 9.0
Kellys			qualquer
Metilglioxal (MGO)	Sigma-Aldrich
Mini-UTE Mouse Port	Access Technologies	MMP-4S 061108B	Mouse 4-French silicone port
Anti-actina monoclonal, anticorpo α-músculo liso-Cy3	Sigma-Aldrich	C6198
Agulhas			qualquer
Clipes reflexos 7 mm			qualquer
Sutura 4-0 Nylon			qualquer