Isolamento e cultura de três tipos de células-tronco mesenquimais do cordão umbilical

Yanjun Yang; Chunxue Zhang; Xiaoqiang Sheng

doi:10.3791/64065

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Artigo de método

Isolamento e cultura de três tipos de células-tronco mesenquimais do cordão umbilical

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DOI:

10.3791/64065

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23 de agosto de 2022

Yanjun Yang^*¹ , Chunxue Zhang^*² , Xiaoqiang Sheng³

¹Department of Obstetrics and Gynecology, the Third Affiliated Hospital, Soochow University, ²Department of Obstetrics and Gynecology, Nanjing First Hospital, Nanjing Medical University, ³Center for Reproductive Medicine and Obstetrics and Gynecology, Nanjing Drum Tower Hospital, Nanjing University Medical School

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O presente protocolo descreve o isolamento e a cultura de células-tronco mesenquimais das artérias do cordão umbilical, veia e geléia de Wharton.

Resumo

As células-tronco mesenquimais do cordão umbilical (UC-MSCs) são uma importante fonte celular para a medicina regenerativa. As UC-MSCs podem ser isoladas da geléia de Wharton do cordão umbilical, bem como das artérias umbilicais e da veia umbilical. Eles são conhecidos como células-tronco perivasculares obtidas de artérias umbilicais (UCA-PSCs), células-tronco perivasculares obtidas da veia umbilical (UCV-PSCs) e células-tronco mesenquimais obtidas da geléia de Wharton (WJ-MSCs). UCA-PSCs e UCV-PSCs são pericitos derivados de regiões perivasculares que são progenitoras de MSCs. O isolamento e a cultura dos três tipos de células são uma fonte importante para o estudo do transplante e reparo de células-tronco. O presente protocolo se concentra no isolamento e cultura de células por meio de separação mecânica, cultura aderente e rastreamento de células. Por meio dessa técnica, os três tipos diferentes de células-tronco podem ser derivados. Os marcadores de superfície celular foram detectados por citometria de fluxo. As células-tronco foram detectadas quanto ao potencial de diferenciação de múltiplas linhagens por diferenciação adipogênica, osteogênica e semelhante a neurais, o que é consistente com o fenótipo das MSCs. Este protocolo experimental expande a fonte de UC-MSCs. Além disso, o método de isolamento celular fornece uma base para estudos adicionais da medicina regenerativa e outras aplicações.

Introdução

As células-tronco mesenquimais do cordão umbilical humano (UC-MSCs) são amplamente utilizadas na medicina regenerativa devido à sua operação não invasiva, baixa imunogenicidade e falta de disputa ética¹. Em muitos estudos, as UC-MSCs isoladas da geléia de Wharton (WJ) podem se fixar na parede, sofrer multidiferenciação e expressar marcadores de células-tronco mesenquimais (MSCs)². No entanto, quase todas as CTMs são originárias da região perivascular³. Os pericitos, como um subconjunto de células perivasculares, são células progenitoras das^{CTMs 4....}