A infecção materna é um fator de risco para distúrbios do neurodesenvolvimento. Modelos de camundongos de ativação imune materna (MIA) podem elucidar o impacto da infecção no desenvolvimento e função cerebral. Aqui, diretrizes gerais e um procedimento são fornecidos para produzir descendentes confiáveis e suscetíveis expostos ao MIA.
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Artigo de método
Gerando um Modelo Reprodutível de Ativação Imune Materna de Gestações Médias usando Poly(I:C) para Estudo de Suscetibilidade e Resiliência em Descendentes
Neste artigo
Resumo
Resumo
A ativação imune materna (MIA) durante a gravidez está consistentemente ligada ao aumento do risco de distúrbios neurodesenvolvimentais e neuropsiquiátricos na prole. Modelos animais de MIA são usados para testar a causalidade, investigar mecanismos e desenvolver diagnósticos e tratamentos para esses distúrbios. Apesar de seu uso generalizado, muitos modelos de MIA sofrem de falta de reprodutibilidade e quase todos ignoram dois aspectos importantes desse fator de risco: (i) muitos descendentes são resilientes ao MIA e (ii) descendentes suscetíveis podem exibir combinações distintas de fenótipos. Para aumentar a reprodutibilidade e modelar a suscetibilidade e a resiliência à AIM, a imunorreatividade basal (BIR) de camundongos fêmeas antes da gravidez é usada para prever quais gestações resultarão em descendentes resilientes ou descendentes com anormalidades comportamentais e moleculares definidas após a exposição à MIA. Aqui, um método detalhado de indução de MIA via injeção intraperitoneal (i.p.) do RNA de fita dupla (dsRNA) viral mimético poli(I:C) aos 12,5 dias de gestação é fornecido. Este método induz uma resposta inflamatória aguda na barragem, o que resulta em perturbações no desenvolvimento do cérebro em camundongos que mapeiam domínios de impacto semelhante em transtornos psiquiátricos e do neurodesenvolvimento (NDDs) humanos.
Introdução
Evidências epidemiológicas ligam a infecção materna ao aumento do risco de doenças psiquiátricas e DDNs, incluindo esquizofrenia (SZ) e transtorno do espectro autista (TEA)1,2,3,4,5,6,7. O modelo de camundongos com AIM foi desenvolvido para testar a causalidade e o papel mecanicista da AIM na etiologia desses distúrbios, bem como para identificar biomarcadores moleculares e desenvolver ferramentas diagnósticas e te....
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Protocolo
Todos os protocolos são realizados sob a aprovação do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade da Califórnia-Davis (IACUC).
1. Preparação animal
- Ao adquirir animais, mantenha os seguintes parâmetros consistentes para garantir a máxima reprodutibilidade.
- Local do fornecedor e do fornecedor: como relatado anteriormente, os camundongos do tipo selvagem C57BL/6J exibem respostas diferentes à mesma dose de poli(I:C), dependendo do fornecedor8. Escolha um fornecedor e uma cepa de mouse que mostrem uma resposta consistente. Para os experimentos aqui, camundongos C57....
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Resultados
Nem todos os animais expostos a 30 mg/kg de poli(I:C) em E12.5 produzem descendentes com anormalidades comportamentais consistentes 8,31. Embora tanto 30 mg/kg quanto 40 mg/kg de poli(I:C) produzam de forma confiável comportamentos de doença em barragens, incluindo diminuição dos níveis de atividade, respostas hipotérmicas e perda de peso, e também causem elevações significativas na IL-6, apenas um subconjunto de ninhadas expostas à IAM continuará a desenvolver a.......
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Discussão
A infecção materna altera o curso do desenvolvimento cerebral em humanos e em roedores e primatas não humanos 4,5,7. Aqui, um procedimento para induzir MIA em camundongos em um ponto de tempo médio gestacional usando poli(I:C) é descrito. Esse método incorpora a avaliação da BIR antes da gravidez, o que aumenta a reprodutibilidade e oferece a chance de investigar mecanicamente os mecanismos que levam à resiliência e suscetibilid.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse a divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos à Dra. Myka Estes por sua persistência em abordar a variabilidade no modelo MIA de camundongos e a todos os colaboradores em Estes et al.8 por seu trabalho que levou ao desenvolvimento do protocolo de métodos aqui descrito. A pesquisa aqui relatada foi apoiada pelo NIMH 2P50 MH106438-06 (A.K.M.) e NIMH T32MH112507 (K.P.).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,9% NaCl fisiológico endotoxina livre | salina livre Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | Controle e veículo para placa de Petri Poly(I:C) |
| 35mm | Thomas Scientific | 1219Z45 | Usado para segurar o óleo durante o sangramento da cauda |
| 7,5% TGX géis | Bio-rad | 4561084 | |
| Opcional Ancare Nestlets | Fisher Scientific | NC9365966 | Opcional |
| anti-& beta;-tubulina | Millipore | MAB3408 | Opcional |
| Bio-Plex Pro Mouse Cytokine Standards Grupo I | Bio-rad | 171I50001 | |
| Kit de reagentes Bio-Plex Pro com placa plana | Bio-rad | 171304070M | |
| Albumina de soro bovino | ThermoFisher | 23209 | |
| Centrífuga | Eppendorf | 5810R | Opcional |
| Seringa de Insulina Covidien Monoject 1/2 mL com 28G x 1/2 pol. Espectro de agulhas | 552-58457-083 | ||
| Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D9779-10G | |
| Enriquecimento ambiental | Bio-serv | K3327 e K3322 | |
| Opcional Ethovision | Noldus | Ethovision | Opcional |
| Corpos seondários marcados com fluorescência | Li-cor | 925-32213 e 925-68072 | Opcional |
| Óleo comestível de qualidade alimentar (como azeitona, canola ou semente de uva) | Vários fornecedores | Use para lubrificar a cauda durante sangramentos de cauda | |
| HBSS | ThermoFisher | 14060040 | Opcional |
| Poliinosítico de alto peso molecular: ácido policitidílico | Invivogen | #tlrl-pic-5 | Usado para estabelecer |
| BIR Humane Mouse Restrainer | AIMS | 1000 | Usado para conter o mouse durante a cauda sangra |
| Software de Estúdio de Imagem | Licor | 5.2 | |
| Tampão Laemmli | Bio-rad | 1610737EDU | Opcional |
| Luminex200 | ThermoFisher | APX10031 | |
| Microvette CB300 300μ l Tubo capilar sérico | Sarstedt | 16.440.100 | |
| Peso molecular misto poliinosítico: ácido policitidílico | Sigma-Aldrich | #P0913 | Indução gestacional de MIA |
| monoclonal anti-MEF2A | AbCam | ab76063 | |
| Sinalização celular monoclonal anti-STAT3 | 12640S | Observador opcional | |
| Observador | NoldusTampão | ||
| de bloqueio Odyssey opcional (TBS) | Li-cor | 927-50003 | Sistema de |
| imagem Odyssey CLx | Li-cor | 9140 | Omnipure |
| PBS | Millipore | 65054L | |
| Pierce BCA Protein Assay Kit | ThermoFisher | 23227 | |
| anti_TH policlonal | Pel-Freez | P4101-150 | Opcional |
| Membrana PVDF | Bio-rad | 162-0177 | Opcional |
| Qsonica Sonicator Q500 | Fisher Scientific | 15-338-282 | |
| Opcional Rolha rápida de sangue | Petco | 17140 | |
| Tubo de microcentrífuga Seal-Rite de 1,5 ml, natural não estéril | USA Scientific | 1615-5500 | |
| Amazon | B08Y12QC73 | Usado para segurar o tubo capilar durante sangramentos de cauda Sementes | |
| girassol | Bio-serv | S5137-1 | Use para aumentar a eficiência de reprodução |
| O conjunto Bio-Plex Pro Mouse IL-6, | Base Tris Bio-rad | 171G5007M | |
| Fisher Scientific | BP152-1 | Opcional | |
| Tween 20 | Bio-rad | 23209 | Opcional |
Referências
- Adams, W., Kendell, R. E., Hare, E. H., Munk-Jørgensen, P. Epidemiological evidence that maternal influenza contributes to the aetiology of schizophrenia. An analysis of Scottish, English, and Danish data. The British Journal of Psychiatry: The Journal of Mental Science. 163 (4), 522-534 (1993).
- Brown, A. S., et al.
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Reimpressões e permissões
