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Artigo de método

Um modelo de camundongo de fibrose pulmonar induzida por nebulização de bleomicina nasal

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DOI:

10.3791/64097

20 de janeiro de 2023

Neste artigo

Resumo

Vários modelos animais de fibrose pulmonar foram estabelecidos usando bleomicina para esclarecer a patogênese da fibrose pulmonar e encontrar novos alvos de drogas. No entanto, a maioria dos modelos de fibrose pulmonar direcionados ao tecido pulmonar tem administração desigual de medicamentos. Aqui, propomos um modelo de fibrose pulmonar uniforme induzida por nebulização de bleomicina nasal.

Resumo

A fibrose pulmonar é característica de várias doenças pulmonares humanas que surgem de várias causas. Dado que as opções de tratamento são bastante limitadas, os modelos de camundongos continuam a ser uma ferramenta importante para o desenvolvimento de novas estratégias antifibróticas. Neste estudo, a administração intrapulmonar de bleomicina (BLM) é realizada por nebulização nasal para criar um modelo de camundongo de fibrose pulmonar que imita de perto as características clínicas da doença. Camundongos C57BL/6 receberam BLM (7 U/mL, 30 min/dia) por nebulização nasal por 3 dias consecutivos e foram sacrificados no dia 9, 16 ou 23 para observar alterações inflamatórias e fibróticas no tecido pulmonar. O BLM aerossolizado nasal atingiu diretamente os pulmões, resultando em inflamação e fibrose pulmonar generalizada e uniforme. Assim, geramos com sucesso um modelo experimental de camundongo de fibrose pulmonar humana típica. Este método poderia ser facilmente usado para estudar os efeitos da administração de vários aerossóis nasais na fisiopatologia pulmonar e validar novos tratamentos anti-inflamatórios e antifibróticos.

Introdução

A fibrose pulmonar é um processo de doença progressiva no qual a deposição excessiva de componentes da matriz extracelular, principalmente colágeno tipo I, no interstício dos pulmões leva ao comprometimento da função pulmonar1. A fisiopatologia da fibrose pulmonar é complexa e as opções de tratamento são atualmente bastante limitadas. Os modelos de camundongos continuam sendo uma ferramenta importante para estudar os mecanismos patogênicos que contribuem para o surgimento e progressão da doença, bem como novas estratégias para o desenvolvimento de medicamentos.

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Protocolo

O Comitê de Estudos Animais do Hospital da Amizade China-Japão (Pequim, China) aprovou todos os procedimentos envolvendo camundongos que foram realizados como parte deste estudo (NO.190108). Os camundongos foram mantidos na sala de animais estéreis do Instituto de Pesquisa Médica Clínica da Amizade China-Japão, com temperatura ambiente de 20-25 °C, umidade relativa de 40%-70%, intensidade de luz animal de 15-20 LX e luz e escuridão alternadas por 12 h/12 h. Os animais tinham livre acesso a comida e água.

1. Ratos

  1. Certifique-se de que todos os animais estejam aclimatados ao alojame....

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Resultados

A lesão pulmonar foi induzida por BLM nebulizada, e os animais controle foram nebulizados com o mesmo volume de solução salina normal. Os camundongos foram nebulizados uma vez ao dia durante 3 dias, 30 min por dia, usando uma concentração de BLM de 7 U / mL. Os camundongos foram sacrificados nos dias 9, 16 e 23 após a administração de BLM para coloração H & E ( Figura 2B ). Lesões pneumônicas difusas com perda da arquitetura alveolar normal, espessamento septal, alvéolos aumentados e aumento da infil.......

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Discussão

A injeção intratraqueal de bleomicina resulta em uma resposta inflamatória e fibrótica aguda em ambos os pulmões e pode ser considerada uma abordagem eficaz para estabelecer um modelo experimental de camundongo de doença pulmonar intersticial humana. A administração intratraqueal é a via de administração mais comumente utilizada 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.

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Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse a divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (nº 92068108).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
  bleomicinaBioway/Nippon Kayaku Co Ltd  O modelo de fibrose DP721droga
a solução salina a 0,9% para injeçãoBaxter Healthcare (Tianjin) Co., Ltd.Preparação de bleomicina
Seringa de 1 mLBD300481Anestesiar animais
10% tampão de formalina neutroTechaLab Biotech CompanyFixar tecido pulmonar
15 mL tubo de centrífugacorning430790Preparar para anestesia
20 ° C geladeiraGrupo de moscas novasBCD-213KArmazenar drogas
4 ° C geladeiraGrupo de moscas novasBCD-213KArmazenar drogas
Adobe illustrator cc2020AdobeProcess imagens
azul de volta líquidaBeijing Chemical Worksmancha de tecido
bancada limpaSuzhou Sujie Purifying Equipment Co., Ltd.preparação de bleomicina
Beijing Chemical Workscoloração de tecido
Balança eletrônicaMETTLER TOLEDOAA-160Prepare-se para
a coloração de eosinaBeijing Yili Fine Chemicals Co, Ltd.coloração de tecido
Almofada de aquecimentoHIDOMRatos de incubação
hematoxilina manchaPequim Yili Fine Chemicals Co, Ltd.tampão
coloração de tecido tampão com fosfato salino (PBS)HycloneSH30256.01Limpe o tecido pulmonar
Photoshop software de desenhoAdobeProcess images
SCIREQ INEXPOSEEMKA Biotech Beijing Co.,Ltd.Dispositivo de atomização
Microscópio de fluorescência verticalOlympusBX53Observe a fatia
Fluido de diferenciação de de anestesia de

Referências

  1. Raghu, G., et al. Diagnosis of idiopathic pulmonary fibrosis. An official ATS/ERS/JRS/ALAT clinical practice guideline. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 198 (5), e44-e68 (2018).
  2. Moore, B. B., Hogaboam, C. M.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Nebuliza o NasalInflama o PulmonarAltera es Fibr ticasCamundongos C57BL 6Bleomicina AerossolizadaFisiopatologia PulmonarTratamentos Antifibr ticos