Artigo de método

Preparação, características, toxicidade e avaliação da eficácia da vacina contra tumores em nanoemulsão automontada nasal in vitro e in vivo

DOI:

10.3791/64299

⸱

28 de setembro de 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1National Engineering Research Centre of Immunological Products, Department of Microbiology and Biochemical Pharmacy, College of Pharmacy, Third Military Medical University of Chinese PLA

Neste artigo

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aqui, apresentamos métodos detalhados para a preparação e avaliação da vacina tumoral em nanoemulsão auto-montada nasal in vitro e in vivo.

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Peptídeos de epítopos têm atraído ampla atenção no campo das vacinas tumorais por causa de sua segurança, alta especificidade e produção conveniente; em particular, alguns epítopos restritos ao MHC I podem induzir atividade citotóxica efetiva de linfócitos T para limpar células tumorais. Além disso, a administração nasal é uma técnica de administração eficaz e segura para vacinas tumorais devido à sua conveniência e melhor adesão do paciente. No entanto, peptídeos de epítopos são inadequados para entrega nasal devido à sua baixa imunogenicidade e falta de eficiência de entrega. Nanoemulsões (NEs) são sistemas termodinamicamente estáveis que podem ser carregados com antígenos e entregues diretamente à superfície da mucosa nasal. Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV) é o pentapeptídeo central da laminina, um peptídeo ligador de integrina expresso por células epiteliais respiratórias humanas. Neste estudo, uma vacina intranasal auto-montada do peptídeo epítopo NE tumoral contendo o peptídeo sintético IKVAV-OVA257-264 (I-OVA ) foi preparada por um método de emulsificação de baixa energia. A combinação de IKVAV e OVA257-264 pode aumentar a captação de antígenos pelas células epiteliais da mucosa nasal. Aqui, estabelecemos um protocolo para estudar as características físico-químicas por microscopia eletrônica de transmissão (MET), microscopia de força atômica (AFM) e espalhamento dinâmico de luz (DLS); estabilidade na presença de proteína mucina; toxicidade pelo exame da viabilidade celular das células BEAS-2B e dos tecidos nasal e pulmonar de camundongos C57BL/6; captação celular por microscopia confocal de varredura a laser (MMC); perfis de liberação por imagem de pequenos animais in vivo; e o efeito protetor e terapêutico da vacina usando um modelo portador de tumor E.G7. Antecipamos que o protocolo fornecerá pistas técnicas e teóricas para o desenvolvimento futuro de novas vacinas de mucosa de peptídeos epítopos de células T.

Introdução

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Como uma das inovações de saúde pública mais críticas, as vacinas desempenham um papel fundamental no combate à carga global de doenças humanas1. Por exemplo, atualmente, mais de 120 vacinas candidatas para doenças COVID-19 estão sendo testadas, algumas das quais foram aprovadas em muitos países2. Relatos recentes afirmam que as vacinas contra o câncer têm efetivamente melhorado o progresso dos tratamentos clínicos do câncer, pois direcionam o sistema imunológico de pacientes com câncer a reconhecer antígenos como estranhos ao corpo3. Além disso, múltiplos epítopos de células T localizados dentro ....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os experimentos com animais foram conduzidos de acordo com o Laboratory Animal – Guideline for ethical review of animal welfare (GB/T 35892-2018) e foram aprovados pelo Comitê de Ética e Bem-Estar Animal de Laboratório da Terceira Universidade Médica Militar. Os camundongos foram eutanasiados por injeção intraperitoneal de 100 mg/kg de pentobarbital sódico a 1%.

1. Preparação do I-OVA NE

  1. Misture 1 mg de lipídio monofosforílico A (MPLA) com 100 μL de DMSO, vórtice por 5 min, e deixe repousar por 4 h à temperatura ambiente (TR) para dissolver completamente.
  2. Adicione Tween 80 e I-OVA quantitativamente e mis....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De acordo com o protocolo, concluímos o preparo e a avaliação experimental in vitro e in vivo da liberação da nanovacina tumoral nasal. MET, AFM e DLS são meios eficazes para a avaliação das características básicas do potencial zeta superficial e do tamanho de partícula da nanovacina (Figura 1). As células epiteliais BEAS-2B são um modelo de triagem útil para o teste de toxicidade in vitro de vacinas nasais (Figura 2A). As microfotogra.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nanovacinas funcionalizadas com membranas de imunoócitos têm grandes vantagens na terapia doença-alvo, e os efeitos colaterais são minimizados por propriedades como tropismo tumoral único, identificação de alvos específicos, circulação prolongada, interações intercelulares aumentadas e baixa toxicidade sistêmica. Também podem ser facilmente integrados com outros módulos de tratamento para tratar os cânceres de forma cooperativa16,20. Atributos desejáveis podem se.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores declaram não ter interesses financeiros concorrentes conhecidos ou relações pessoais que possam ter influenciado o trabalho relatado neste artigo.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este estudo foi apoiado pelo No. 31670938, 32070924, 32000651 do Programa da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China, No. 2014jcyjA0107 e No. 2019jcyjA-msxmx0159 do Programa de Projeto da Fundação de Ciências Naturais de Chongqing, No. 2020XBK24 e No. 2020XBK26 dos projetos especiais da Universidade de Medicina do Exército, e No. 202090031021 e No. 202090031035 do Programa Nacional de Inovação e Empreendedorismo para estudantes universitários.

....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Placas de 96 poçosCorning Incorporated, EUACLS3922
Leitor de microplacas Bio-Rad 6.0Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, EUA  Kits Bio-Rad 6.0
CCK-8Dojindo, JapãoCK04
Centrífuga 5810 REppendorf, Alemanha 
DAPISigma-Aldrich, St. Louis, EUAD9542
soro fetal bovino (FBS)Hyclone (Life Technology, EUA)SH30088.03
I-OVA marcado com FITCShanghai Botai
Biotechnology Co., Ltd.		NA
HF 90/240 IncubadoraHeal Force, SuíçaNA
HPLC Fornecedor verificado - Shanghai Botai Biotechology Co., Ltd.E2695
Microscópio InvertidoNikon, JapãoDSZ5000X
IPC-208Chong Qing University, ChinaNA
Sistema IVIS Caliper Life Science Limited CompanyNA
JEM-1230 TEMJEOL Limited Company of Japan1230 TEM
Malvern NANO ZSMalvern Instruments Ltd., UKNA
MPLA  Invivogen
Lit. Co.		pomada de sulfato de neomicina tlrl-mpla
Shanghai CP General Pharmaceutical Co., Ltd.
OVA257– 264Shanghai Botai
Biotechnology Co., Ltd.		NA
RPMI 1640 meioHyclone (Life Technology, EUA)SH30809.01
Conjugação de peptídeo sintético (I-OVA) de IKVAV-PAShanghai Botai
Biotechnology Co., Ltd.		Microscópio
, AlemanhaZeiss LSM800
5811000398H31022262 confocal Zeiss Zeiss LSM800 da fluorescência da exploração de laser do NA

Referências

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
  2. Mohammed, I., et al.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Solicitar permissão para reutilizar o texto ou as figuras deste artigo JoVE

Solicitar permissão

Etiquetas

Administra o de Vacina NasalVacina de Pept deo Ep topoPept deo IKVAVAvalia o In VitroAvalia o In VivoMicroscopia Eletr nica de Transmiss oMicroscopia de For a At micaC lulas BEAS2BLibera o Prolongada

Artigos relacionados