O presente protocolo descreve uma nova técnica de bandagem aórtica em camundongos para induzir hipertrofia cardíaca por sobrecarga pressórica. Para bandas, um anel de borracha com um diâmetro interno fixo é usado. Esta nova técnica promete menos variância e mais dados reprodutíveis para experimentos futuros.
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Artigo de método
Bandas Aórticas O-Ring versus Constrição Aórtica Transversa Tradicional para Modelagem da Hipertrofia Cardíaca Induzida por Sobrecarga de Pressão
Neste artigo
Resumo
Resumo
A banda aórtica em camundongos é um dos modelos experimentais mais comumente utilizados para hipertrofia cardíaca induzida por sobrecarga de pressão cardíaca e indução de insuficiência cardíaca. A técnica utilizada anteriormente é baseada em uma sutura rosqueada ao redor do arco aórtico amarrada sobre uma agulha 27 G embotada para criar estenose. Este método depende do cirurgião apertar manualmente a rosca e, assim, leva a uma alta variância no tamanho do diâmetro. Um método recém-refinado descrito por Melleby et al. promete menor variância e mais reprodutibilidade após a cirurgia. A nova técnica, a bandagem o-ring-aórtica (ORAB), usa um anel de borracha antiderrapante em vez de uma sutura com um fio, resultando em variação reduzida na sobrecarga de pressão e fenótipos reprodutíveis de hipertrofia cardíaca. Durante a cirurgia, o o-ring é colocado entre as artérias braquiocefálica e carótida esquerda. A constrição bem-sucedida é confirmada pela ecocardiografia. Após 1 dia, a colocação correta do anel resulta em um aumento da velocidade de fluxo na aorta transversal sobre a estenose induzida pelo anel o. Após 2 semanas, a função cardíaca prejudicada é comprovada pela diminuição da fração de ejeção e aumento da espessura da parede. É importante ressaltar que, além de menor variância no tamanho do diâmetro, o ORAB está associado a menores taxas de mortalidade intra e pós-operatórias em comparação com a constrição aórtica transversa (TAC). Assim, o ORAB representa um método superior à cirurgia TAC comumente utilizada, resultando em resultados mais reprodutíveis e uma possível redução no número de animais necessários.
Introdução
Embora a hipertrofia cardíaca fisiológica possa ser observada durante o desenvolvimento, o exercício e a gravidez, a hipertrofia cardíaca patológica responde a condições de estresse hemodinâmico, como hipertensão arterial, doença cardíaca valvar ou mutações genéticas. Inicialmente, o coração passa por um remodelamento caracterizado pelo aumento do tamanho dos cardiomiócitos e espessamento das paredes ventriculares para manter a função cardíaca 1,2. Por outro lado, o remodelamento cardíaco patológico está associado a um risco aumentado de arritmia, morte súbita e alta mortalidade. Finalmente, com o tempo, resul....
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Protocolo
As experiências com animais foram realizadas sob os princípios do comité regional (Ministerium für Energiewende, Landwirtschaft, Umwelt, Natur und Digitalisierung des Landes Schleswig-Holstein, número de permissão: V242-21249/2020 [38-4/20]). Os camundongos utilizados para o presente estudo foram obtidos de uma fonte comercial (ver Tabela de Materiais). Os animais foram mantidos em condições padrão com um ciclo leve de 12 h e 12 h noturno; água e comida eram oferecidas ad libitum.
1. Cuidados com os animais
- Hospede os ratos em gaiolas especializadas com roupas de cama, material de nidific....
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Resultados
Geralmente, a banda aórtica imita a estenose aórtica humana e induz hipertrofia cardíaca em camundongos. Um procedimento bem-sucedido é caracterizado pelo remodelamento do tecido cardíaco refletido pela hipertrofia cardíaca e redução da função cardíaca 5,6.
Diretamente 1 dia após a operação, o efeito da constrição do anel solar da aorta transversa pode ser determinado in vivo por ecocardiografia13. A in.......
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Discussão
A bandagem aórtica baseada em fio/sutura tem sido usada há muitos anos para induzir hipertrofia cardíaca por sobrecarga de pressão em camundongos. É um método estabelecido para investigar os patomecanismos de remodelamento cardíaco e progressão da doença in vivo. As limitações são a variância relativamente alta no grau de estenose e, consequentemente, o remodelamento. A técnica ORAB recentemente introduzida, descrita pela primeira vez por Melleby et al.10 , otimiza o método convencional .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF) para L.L., N.F. e O.J.M. (IVOLADMT-HF; FKZ 01KC2006A).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 1 x fixadores longos, 6 cm | 18200-01 | ||
| 2 x Afastadores Rombos, 5 mm de largura | 18200-11 | ||
| 2 x Fixadores Curtos, 3 cm | 18200-02 | ||
| 2 x ponta fina 45° pinça angular | FST (ferramentas de ciência fina) | 11160-10 | |
| 3 x Retratores Rombos, 2,5 mm de largura | 18200-10 | ||
| 3 x Fios Retratores | 18200-05 | ||
| 4-0 sutura absorvível (Vicryl) | ETHICON | SABBKLT0 | Usado para suturar a pele |
| 6-0 sutura (Prolene), tamanho da agulha:13 mm | ETHICON | JDP879 | Usado para suturar o músculo do peito |
| 8-0 sutura (Prolene), tamanho da agulha: 6.5 mm | ETHICON | RHBECH | Usado para jejuar o Anel |
| Caixa de anestesia | pequeno aparelho Havard | 50-0108 | |
| Camundongos C57BL/6N | Charles River | ||
| Fluosorber Filtro de Carvão Ativado Canister | Aparelho Havard | 34-0415 | Usado para induzir e manter anestesia |
| Laringoscopia artesanal | Intubaçõesajudam | ||
| o aparelho Harvard Vaporizador anestésico | Aparelho Havard | Usado para induzir e manter anestesia | |
| Almofada de aquecimento + sonda retal (LSI Letica Scientific Instruments: Unidade de controle de temperatura HB 101/2 ) | Aparelho Panlab/ Havard | Usado para controlar e manter a temperatura corporal | |
| cânula i.v. azul 22-gauge (Vasofix Braunü le 0.9 x 25 mm) | B/Braunsharing Expertise | 4268091B | intubação |
| isofluran | Baxter | Anesthesia | |
| Kodan (solução betadina) | Schü lke | 20003960-A | Desinfecção |
| auxiliar de ligadura | FST (ferramentas de ciência fina) | 18062-12 | Usado para realizar a ligação com O-ring |
| Iluminação de Microscópio: Conjunto Schott VisiLED MC1500/S80-55 (+ controlador) | Microscópio SCHOTT | Ligth | |
| câmera (Leica IC80 HD) | Leica | Usado para campo operacional de visualização | |
| Sistemas Completos de Anestesia MiniVac para pequenos roedores | Aparelho Havard | 75-0233 | Usado para induzir e manter anestesia |
| Ventilador de Mouse MiniVent Tipo 845 | Aparelho Havard | 73-0044 | Usado para ventilação durante a cirurgia |
| Porta-agulhas | FST (ferramentas de ciência fina) | TE-10804 | |
| O-ring, borracha antiderrapante (0.0018 mm x 0.020 mm) | Produtos de Borracha Apple | Tesoura de Tesoura do Arco Aórtico | |
| FST (ferramentas de ciência fina) | 14040-09 | Usada para cortar a pele e os fios | |
| Sistema de Retração de Pequenos Animais (Kit para Animais até 200 g) | FST (ferramentas de finos componentes) | 18200-20 | |
| Placa de Base Pequena, 20 x 30 cm | 18200-03 | ||
| Mesa integrada com almofada de aquecimento + sonda retal + tripé de ECG e transdutor | Sistema de Imagem | Ecocardiografia | |
| Temgesic (Buprenorfina) | Indivior UK Limited | 997.00.00 | Pré-medicação para dor |
| torneira de parada de três vias (azul) | |||
| Tramal (Tamadol) | Grü Dor | pós-medicação nental | |
| sonda transdutor MS400 (Visual Sonics) | de Imagem FujiFilm Visual Sonics | Ecocardiografia | |
| Sistema de ultrassom com pacote cardioligy | de Imagem FujiFilm Visual Sonics | Ecocardiografia | |
| Tesoura de Mola Vannas - 2.5 mm Cutting Edge | FST (ferramentas de ciência fina) | 15000-08 | Usado para cortar o músculo intercostal do peito |
| pomada veterinária | Bepanten | Usado para evitar que os olhos sequem |
Referências
- Frey, N., Olson, E. N. Cardiac hypertrophy: The good, the bad, and the ugly. Annual Review of Physiology. 65, 45-79 (2003).
- Bui, A. L., Horwich, T. B., Fonarow, G. C. Epidemiology and risk profile of heart failure. Nature Reviews Cardiology. 8 (1), 30-41 ....
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Reimpressões e permissões
