Avaliando as Propriedades Anticriptocócicas Putativas de Extratos Brutos e Clarificados de Moluscos

Davier Gutierrez-Gongora; Fouad Raouf-Alkadhimi; Ryan S. Prosser; Jennifer Geddes-McAlister

doi:10.3791/64540

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Avaliando as Propriedades Anticriptocócicas Putativas de Extratos Brutos e Clarificados de Moluscos

1.3K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/64540

⸱

2 de dezembro de 2022

Davier Gutierrez-Gongora¹ , Fouad Raouf-Alkadhimi¹ , Ryan S. Prosser² , Jennifer Geddes-McAlister¹

¹Molecular and Cellular Biology Department, University of Guelph, ²School of Environmental Sciences, University of Guelph

Neste artigo

Resumo

O patógeno fúngico humano Cryptococcus neoformans produz uma variedade de fatores de virulência (por exemplo, peptidases) para promover sua sobrevivência dentro do hospedeiro. Os nichos ambientais representam uma fonte promissora de novos inibidores naturais da peptidase. Este protocolo descreve a preparação de extratos de moluscos e a avaliação do seu efeito na produção do fator de virulência fúngica.

Resumo

Cryptococcus neoformans é um patógeno fúngico humano encapsulado com uma distribuição global que infecta principalmente indivíduos imunocomprometidos. O uso generalizado de antifúngicos em ambientes clínicos, seu uso na agricultura e hibridização de cepas levaram ao aumento da evolução da resistência. Esta crescente taxa de resistência contra antifúngicos é uma preocupação crescente entre clínicos e cientistas em todo o mundo, e há uma maior urgência em desenvolver novas terapias antifúngicas. Por exemplo, C. neoformans produz vários fatores de virulência, incluindo enzimas intra e extracelulares (por exemplo, peptidases) com papéis na degradação tecidual, regulação celular e aquisição de nutrientes. A interrupção da atividade dessa peptidase por inibidores perturba o crescimento e a proliferação de fungos, sugerindo que esta pode ser uma estratégia importante para o combate ao patógeno. É importante ressaltar que invertebrados, como moluscos, produzem inibidores da peptidase com aplicações biomédicas e atividade antimicrobiana, mas são pouco explorados em termos de seu uso contra patógenos fúngicos. Neste protocolo, uma extração global de moluscos foi realizada para isolar potenciais inibidores da peptidase em extratos brutos e clarificados, e seus efeitos contra fatores clássicos de virulência criptocócica foram avaliados. Este método suporta a priorização de moluscos com propriedades antifúngicas e oferece oportunidades para a descoberta de agentes antivirulência, aproveitando os inibidores naturais encontrados em moluscos.

Introdução

Cryptococcus neoformans é um patógeno fúngico humano que produz doença grave em hospedeiros imunocomprometidos, como indivíduos vivendo com HIV/AIDS¹, e leva a aproximadamente 19% das mortes relacionadas à AIDS². O fungo é suscetível a várias classes de antifúngicos, incluindo azóis, polienos e flucitosina, que exercem atividade fungicida e fungistática utilizando mecanismos distintos ^3,4. No entanto, o uso extensivo de antifúngicos em ambientes clínicos e agrícolas, combinado com a hibridização de cepas, amplificou a evolução da re....