Vários tipos de modelos animais de tireoidite de Hashimoto foram estabelecidos, assim como a tireoidite autoimune espontânea no camundongo NOD. Camundongos H-2h4 são um modelo simples e confiável para indução de HT. Este artigo descreve essa abordagem e avalia o processo patológico para uma melhor compreensão do modelo murino de TAA.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Geração de um modelo de tireoidite autoimune espontânea em camundongos
Neste artigo
Aviso de errata
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Resumo
Resumo
Nos últimos anos, a tireoidite (TH) de Hashimoto tornou-se a doença autoimune da tireoide mais comum. Caracteriza-se pela infiltração linfocitária e detecção de autoanticorpos séricos específicos. Embora o mecanismo potencial ainda não esteja claro, o risco de tireoidite de Hashimoto está relacionado a fatores genéticos e ambientais. Atualmente, existem vários tipos de modelos de tireoidite autoimune, incluindo tireoidite autoimune experimental (TAE) e tireoidite autoimune espontânea (TAS).
O EAT em camundongos é um modelo comum de TH, que é imunizado com lipopolissacarídeo (LPS) combinado com tireoglobulina (Tg) ou suplementado com adjuvante de Freund completo (CFA). O modelo de camundongo EAT é amplamente estabelecido em muitos tipos de camundongos. No entanto, a progressão da doença está mais provavelmente associada à resposta do anticorpo Tg, que pode variar em diferentes experimentos.
O TSA também é amplamente utilizado no estudo da TH no NOD. Rato H-2h4. O ACENO. O camundongo H2h4 é uma nova cepa obtida do cruzamento do camundongo diabético não obeso (NOD) com o B10. A(4R), que é significativamente induzida para HT com ou sem iodo alimentar. Durante a indução, o NOD. Camundongos H-2h4 apresentam alto nível de TgAb acompanhado de infiltração linfocitária no tecido folicular tireoidiano. No entanto, para este tipo de modelo de camundongo, existem poucos estudos para avaliar de forma abrangente o processo patológico durante a indução de iodo.
Um modelo de camundongo SAT para pesquisa de TH é estabelecido neste estudo, e o processo de mudança patológica é avaliado após um longo período de indução de iodo. Através deste modelo, os pesquisadores podem compreender melhor o desenvolvimento patológico da TH e selecionar novos métodos de tratamento para a TH.
Introdução
A tireoidite de Hashimoto (TH), também conhecida como tireoidite linfocítica crônica ou tireoidite autoimune, foi relatada pela primeira vez em 19121. A TH é caracterizada por infiltração linfocitária e dano ao tecido folicular tireoidiano. Os exames laboratoriais se manifestam principalmente como aumento de anticorpos específicos da tireoide, incluindo anticorpo antitireoglobulina (TgAb) e anticorpo antitireoperoxidase (TPOAb)2. A incidência de TH está na faixa de 0,4%-1,5%, correspondendo a 20%-25% de todas as doenças tireoidianas, e esse valor tem aumentado nos últimosanos3. Além disso, um gran....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
O protocolo descrito abaixo foi aprovado pelas diretrizes de cuidados e uso estabelecidas pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Sichuan.
1. Preparo
- Alojar todos os camundongos em condições específicas livres de patógenos sob ciclos claro-escuro de 12 h (começando às 07:00 e 19:00, respectivamente). Manter a temperatura ambiente a 22 °C. Troque os materiais de cama toda semana. Fornecer quantidades adequadas de ração padrão para roedores e água.
- Ao preparar a solução-mãe de NaI em água, pesar 2,5 g do composto e dissolvê-lo em 50 mL de água pura estéril sob vórtice par....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
As alterações histológicas foram marcadamente diferentes em mulheres e homens, a duração da ingestão de iodo e a solução de NaI. Como mostrado na Figura 1, ~10% de NOD. Camundongos H-2h4 desenvolveram TSA mesmo sem indução de iodo com 24 semanas de idade, e todos os camundongos eventualmente desenvolveram tireoidite. Quando administrado água regular, não houve diferença significativa nas alterações histológicas entre machos e fêmeas. A adição de NaI à água potável acelerou o desenvolvimento .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
A TH ocorre devido a uma desordem do sistema autoimune causada por linfócitos infiltrando a glândula tireoide, prejudicando ainda mais a função tireoidiana, enquanto produz anticorpos específicos da tireoide. Os níveis séricos de TSH, TgAb e TPOAb em pacientes com TH estão significativamente elevados27. Atualmente, dois tipos principais de modelos murinos são amplamente utilizados para estudar a etiologia da tireoidite autoimune: EAT e SAT29. Os camundongos EAT são principa.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Todos os autores declaram não ter interesses concorrentes.
Agradecimentos
Anticorpos monoclonais de camundongo contra TPO humano (usados como controles positivos) foram fornecidos pelo Dr. P. Carayon e Dr. J. Ruf (Marselha, França). Os autores agradecem a todos os participantes deste estudo e aos membros de nossa equipe de pesquisa. Este trabalho foi parcialmente apoiado por subsídios do Fundo de Sustentação de Pós-doutorado do Hospital da China Ocidental, Universidade de Sichuan, China (2020HXBH057) e do Programa de Apoio à Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan (Projeto No. 2021YFS0166)
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tartarato de butorfanol | Supelco | L-044 | |
| Cloridrato de dexmedetomidina | Sigma-Aldrich | 145108-58-3 | |
| Ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) bem | Sigma-Aldrich | M9410-1CS | |
| Etanol | macklin | 64-17-5 | |
| Freund' s Adjuvante, Completo | Sigma-Aldrich | F5881 | |
| Freund' s Adjuvante, Incompleto | Sigma-Aldrich | F5506 | |
| IgG anti-rato para cabras | invitrogen | SA5-10275; | |
| Solução de midazolam | Supelco | M-908 | |
| Tiroxina de camundongo/rato (T4) ELISA | Calbiotech | DKO045 | |
| Paraformaldeído | macklin | 30525-89-4 | |
| Iodeto de propídio | Sigma-Aldrich | P4864 | |
| Iodo de sódio | Sigma-Aldrich | 7681-82-5 | |
| Tireoglobulina | Sigma-Aldrich | T1126 | |
| Tireoglobulina Kit ELISA | Thermo Scientific | EHTGX5 | |
| TSH ELISA | Calbiotech | DKO200 | |
| Xileno | macklin | 1330-20-7 |
Referências
- Ralli, M., et al. Hashimoto's thyroiditis: An update on pathogenic mechanisms, diagnostic protocols, therapeutic strategies, and potential malignant transformation. Autoimmunity Reviews. 19 (10), 102649(2020).
- Zhang, Q. Y., et al.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
Errata
Formal Correction: Erratum: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model
Posted by JoVE Editors on 6/05/2023. Citeable Link.
An erratum was issued for: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model. The Protocol section was updated.
Step 3.1.1 of the Protocol was updated from:
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
to
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
NOTE: The specific concentrations of each component in the anesthesia mixture are: midazolam 13.33µg/100µL, medetomidine 2.5µg/100µL, and butorphanol 16.7µg/100µL. For specific dosages used in mice, the doses are: midazolam 4µg/g, medetomidine 0.75µg/g, and butorphanol 1.67µg/g. Anesthesia depth was confirmed when the mouse's limb muscles relaxed, the whiskers had no touch response, and there was loss of pedal reflex.
Step 3.1.2 of the Protocol was updated from:
After the mice are anesthetized, cut off their whiskers with ophthalmic scissors to prevent blood from flowing down the whiskers and causing hemolysis. Fix the mouse with one hand and press the skin of the eye to make the eyeball protrude. Quickly remove the eyeball and draw 1 mL of blood into the microcentrifuge tube via a capillary tube.
to
After the mice are anesthetized, prepare the peripheral blood samples, by fixing the mouse with one hand and pressing the eye skin to protrude the eyeball. Then, insert the capillary tube into the inner corner of the eye and penetrate at a 30-45 degree angle to the plane of the nostril. Apply pressure while gently rotating the capillary tube. Blood will flow into the tube via capillary action.
Step 3.2.1 of the Protocol was updated from:
Dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
to
Humanely euthanize the animal according to the institutional policies. Then, dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
