Este protocolo descreve o implante ortotópico de células cancerosas derivadas de pacientes na parede do ceco de camundongos imunodeficientes. O modelo recapitula a doença metastática avançada do câncer colorretal e permite a avaliação de novas drogas terapêuticas em um cenário clinicamente relevante de metástases pulmonares e hepáticas.
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Artigo de método
Implante Ortotópico de Células Cancerosas Derivadas do Paciente em Camundongos Recapitula o Câncer Colorretal Avançado
Neste artigo
Resumo
Resumo
Na última década, modelos mais sofisticados de câncer colorretal (CCR) pré-clínicos foram estabelecidos usando células cancerosas derivadas do paciente e tumoroides 3D. Uma vez que organoides tumorais derivados do paciente podem manter as características do tumor original, esses modelos pré-clínicos confiáveis permitem o rastreamento de drogas para câncer e o estudo de mecanismos de resistência a drogas. No entanto, a morte relacionada ao CCR em pacientes está associada principalmente à presença de doença metastática. Portanto, é essencial avaliar a eficácia de terapias anticâncer em modelos in vivo relevantes que realmente recapitulem as principais características moleculares da metástase de câncer humano. Estabelecemos um modelo ortotópico baseado na injeção de células cancerosas derivadas do paciente com CCR diretamente na parede do ceco de camundongos. Essas células tumorais desenvolvem tumores primários no ceco que metastatizam para o fígado e pulmões, o que é frequentemente observado em pacientes com CCR avançado. Este modelo de CRC em camundongos pode ser usado para avaliar as respostas a drogas monitoradas por tomografia microcomputadorizada (μCT), um método de imagem em pequena escala clinicamente relevante que pode facilmente identificar tumores primários ou metástases em pacientes. Aqui, descrevemos o procedimento cirúrgico e a metodologia necessária para implantar células cancerosas derivadas do paciente na parede do ceco de camundongos imunodeficientes.
Introdução
O câncer colorretal (CCR) é a segunda causa de morte por câncer nomundo1. A capacidade de gerar modelos tumorais in vitro ou in vivo derivados de células tumorais individuais de pacientes tem avançado a medicina de precisão em oncologia. Na última década, organoides derivados de pacientes (DOPs) ou xenoenxertos (PDXs) têm sido utilizados por muitos grupos de pesquisa em todo omundo2. As DOPs são estruturas multicelulares in vitro que se assemelham às características do tecido tumoral original e podem se auto-organizar e se auto-renovar3. Esses promi....
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Protocolo
Consentimento informado foi obtido de todos os pacientes. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital Universitário Vall d'Hebron, Barcelona, Espanha (parecer ID: PR(IR)79/2009 PR(AG)114/2014, PR(AG)18/2018). Amostras de tecido colônico humano consistiram de biópsias de áreas não necróticas de adenocarcinomas primários ou metástases hepáticas, correspondendo a pacientes com câncer de cólon e reto submetidos à ressecção tumoral. Os experimentos foram conduzidos seguindo a diretriz de cuidados com animais da União Europeia (86/609/CEE) e aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal do VHIR - Instituto de Pesquisa Vall d'Hebron (ID: 40/....
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Resultados
Camundongos implantados ortotopicamente com células cancerosas derivadas do paciente foram monitorados semanalmente por μCT. Ao final do experimento, os animais foram eutanasiados. Intestinos, cecos (Figura 1A,B), fígados, pulmões e qualquer outra possível lesão foram coletados, incluídos em um e fixados com formalina a 4% durante a noite. Tecido intestinal de camundongo sem tumor no ceco foi utilizado como controle (Figura 1C). Finalmente, as f.......
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Discussão
Nas últimas décadas, muitas novas terapias antineoplásicas têm sido desenvolvidas e testadas em pacientes com diferentes tipos de tumores, incluindo o câncer colorretal (CCR). Embora resultados promissores em modelos pré-clínicos tenham sido observados em muitos casos, a eficácia terapêutica em pacientes com CCR metastático avançado tem sido frequentemente limitada. Portanto, há uma necessidade urgente de modelos pré-clínicos que permitam testar a eficácia de novas drogas terapêuticas em um cenário metastático clinicamen.......
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Agradecimentos
Agradecemos à Fundação Cellex , à rede CIBERONC e ao Instituto de Salud Carlos III pelo apoio. Além disso, agradecemos também à plataforma de imagem pré-clínica do Vall d'Hebron Research Institute (VHIR), onde os experimentos foram realizados.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| REAGENT | |||
| Apo-Transferrin | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | T1147-500MG | |
| B27 Suplemento | Life Technologies SA (Espanha) | 17504044 | |
| Solução aquosa de clorexidina 2% | DH MATERIAL M & Eacute; DICO, S.L. | ||
| colagenase | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | C0130-500MG | |
| D-(+)-Glicose | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | G6152 | |
| DMEM /F12 | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | 21331-020 | |
| DNase I | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | D4263-5VL | |
| EGF | PEPRO TECH EC LTD. | AF-100-15-500 e micro; g | |
| FGF básico | PEPRO TECH EC LTD. | 100-18B | |
| Fungizone | Life Technologies S.A (Espanha) | 15290026 | |
| Gentamicina | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Sal de Heparina Sódica | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | H4784-250MG | |
| Insulina | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | I9278-5ML | |
| Iopamiro | |||
| Isoflurano | - | - | |
| Canamicina | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| L-Glutamina | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Matriz Matrigel | CULTEK, S.L.U. | 356235/356234/354234 | |
| Metacam, 5 mg/mL | - | ||
| Aminoácidos não essenciais | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Nistatina | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | N4014-50MG | |
| Pen/Strep | Life Technologies S.A. (Espanha) | 15140122 | |
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS), estéril | Labclinics S.A | L0615-500 | |
| Progesterona | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | P0130-25G | |
| Putrescina | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | P5780-5G | |
| RBC Tampão de Lise | Labclinics S.A | 00-4333-57 | |
| Piruvato de Sódio | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Selenito de Sódio | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | S5261-25G | |
| SUPRIMENTOS ESSENCIAIS | |||
| aceno de 8 semanas de idade. Camundongos CB17-Prkdcscid/NcrCrl | - | - | |
| BD Micro-Fine 0,5 ml U 100 agulha 0,33 mm (29G) x 12,7 mm | BECTON DICKINSON, S.A.U. | ||
| 320926 Lâmina #24 | - | - | |
| Filtro de Célula 100 µ m | Cultek, SLU | 45352360 | |
| Fórceps e tesouras cirúrgicas | - | - | |
| Almofada de aquecimento | - | - | |
| Lacrivisco, 3 mg/g, gel oftálmico | - | - | |
| Surfasafe | - | - | |
| Sutura PROLENE 5-0 | JOHNSON& JOHNSON S, A. | 8720H | |
| EQUIPMENT/SOFTWARE | |||
| Quantum FX µ Sistema de imagem para tomografia computadorizada | Perkin Elmer | Perkin Elmer | http://www.perkinelmer.com/es/product/quantum-gx-instrument-120-240-cls140083 |
Referências
- Sung, H., et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: a Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
- Puig, I., et al.
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Reimpressões e permissões
