Cirurgia e Testes Comportamentais no Modelo de Transposição do Neuroma Tibial em Ratos

Resumo

Este protocolo descreve o modelo de transposição do neuroma tibial, que envolve uma lesão do nervo tibial com subsequente transposição da extremidade proximal do nervo para uma posição subcutânea pré-tibial ou lateral. O teste comportamental da dor do neuroma e da hiperalgesia plantar é quantificado usando monofilamentos de Von Frey.

Resumo

A transposição do neuroma tibial (TNT) é um modelo de rato no qual a alodínia no sítio do neuroma (nervo tibial) pode ser avaliada independentemente da alodínia na superfície plantar da pata traseira inervada pelo nervo sural intacto. Esse modelo de TNT é adequado para testar terapias para a dor do neuroma, como a potencial superioridade de certas terapias cirúrgicas já utilizadas na clínica, ou para avaliar novos fármacos e seu efeito nas duas modalidades de dor no mesmo animal. Nesse modelo, uma lesão distal (neurotmese) é feita no nervo tibial, e a extremidade proximal do nervo é transposta e fixada subcutânea e pré-tibialmente para permitir a avaliação do sítio do neuroma com um monofilamento de Von Frey de 15 g. Para avaliar a alodínia sobre o nervo sural, os monofilamentos de Von Frey podem ser usados pelo método ascendente-descendente na região lateral plantar da pata traseira. Após o corte do nervo tibial, a hipersensibilidade mecânica se desenvolve no local do neuroma dentro de 1 semana após a cirurgia e persiste pelo menos até 12 semanas após a cirurgia. A alodínia na superfície plantar inervada sural desenvolve-se dentro de 3 semanas após a cirurgia em comparação com o membro contralateral. Com 12 semanas, um neuroma se forma na extremidade proximal do nervo tibial seccionado, indicado por dispersão e turbilhonamento de axônios. Para a cirurgia modelo TNT, múltiplos passos críticos (micro)cirúrgicos precisam ser seguidos, e alguma prática cirúrgica sob anestesia terminal é aconselhada. Em comparação com outros modelos de dor neuropática, como o modelo de lesão nervosa poupada, a alodínia sobre o sítio do neuroma pode ser testada independentemente da hipersensibilidade do nervo sural no modelo TNT. No entanto, o sítio do neuroma pode ser testado apenas em ratos, não em camundongos. As dicas e orientações fornecidas neste protocolo podem ajudar grupos de pesquisa que trabalham com dor a implementar com sucesso o modelo de TNT em seu serviço.

Introdução

Cada ferida, variando de simples lacerações a amputação de membros inteiros, é acompanhada por graus variados de lesão nervosa periférica. Tal lesão nervosa pode resultar na formação de um neuroma, um emaranhamento desorganizado de fibras nervosas brotantes. Os neuromas tornam-se dolorosos em 8%-30% dos pacientes, afetando severamente sua qualidade de vida 1,2,3,4,5. Após a amputação do membro, a dor do neuroma desenvolve-se em 50% dos pacientes ^6,7,8

Protocolo

Esta pesquisa foi realizada de acordo com o IVD (Instantie voor Dierenwelzijn Utrecht) e as diretrizes para pesquisa animal, projeto número AVD1150020198824.

1. Medições basais de Von Frey

1. Antes da cirurgia, realizar as medidas basais de acordo com o procedimento de teste de Von Frey, descrito abaixo nas seções 5 e 6.

2. Anestesia e preparo

NOTA: Este estudo foi realizado em 15 ratos machos Sprague Dawley com 12 semanas de idade.

1. Anestesiar os animais por indução com isoflurano a 5% e manter a anestesia com isoflurano a 2%-3%.....

Resultados

A avaliação no sítio do neuroma mostrou aumento da sensibilidade à aplicação do monofilamento de von Frey 15 g. No início do estudo, os ratos tipicamente responderam a 10%-15% (± 13%) das 25 aplicações de um monofilamento de 15 g. A taxa de resposta aumentou para 45%-50% (± 24%) 1 semana após a cirurgia de TNT. No lado contralateral, o número de respostas após a cirurgia foi semelhante ao basal (Figura 2A). Cerca de 20% dos ratos não desenvolveram neuroma doloroso; a taxa de resposta não aum.......

Discussão

Etapas críticas do protocolo
O modelo TNT envolve cortar o nervo tibial e transpô-lo lateral e subcutaneamente para um local pré-tibial para permitir o teste de sensibilidade do neuroma, além de hiperalgesia plantar sobre o nervo sural. No modelo TNT, é fundamental que o local do neuroma seja visível para os pesquisadores. Portanto, uma cepa de rato albino é preferida porque as suturas subcutâneas são facilmente visíveis através da pele e a cor da sutura deve ser preferencialmente azul escuro ou preto.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Aesthesio	Linton Instrumentação	514007 até 514015	0,6 g até 15 g monofilamentos
Carprofeno	Farmácia Veterinária Local	n/a	A farmácia veterinária local faz diluição de caprofeno
Cotonetes	Nobamed	974255
Eletrocautério	Ferramentas de Ciências Finas	18010-00
Etanol 70%	Interchema BV
Ethilon 4.0	Johnson & Johnson	1854G	IMPORTANTE: a cor deve ser azul ou preta
Ethilon 8.0	Johnson & Johnson	BV130-5
Isoflo, isoflurano Zoetis	Dechra Produtos Veterinários	B506
Gaiolas de fundo de malha	StoeltingCo	57816 e 57824
Micro fórceps	Ferramentas de Ciência Fina	11251-35
Porta-agulhas micro	Ferramentas de Ciência Fina	12076-12
Micro tesoura	Ferramentas de Ciência Fina	15019-10
Micro pinças	Ferramentas de Ciência Fina	11254-20
NaCl 0.9%	Trademed	H7 1000-FRE
Porta-agulhas	Ferramentas de Ciência Fina	12004-16
Pomada oftálmica	Farmácia veterinária local	n/a	A farmácia veterinária local fabrica a pomada oftálmica
Bisturi	Fine Science Tools	10003-12
Tesoura	Fine Science Tools	14001-12
Microscópio cirúrgico estéreo	Leica	A60 F
Folha estéril com orifício	Evercare OneMed	1555-01
Lâmina cirúrgica nr.15	Ferramentas de Belas Ciências	10015-00
Pinças	Ferramentas de Belas Artes	11617-12