Artigo de método

HPLC Juntamente com Impressão Digital Química para Reconhecimento de Multi-Padrões para Identificar a Autenticidade de Clematidis Armandii Caulis

DOI:

10.3791/64690

⸱

11 de novembro de 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, The Second Class Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutics, National Administration of Traditional Chinese Medicine, Chengdu Medical College, 2Pengzhou Second People's Hospital

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), juntamente com o reconhecimento químico de multi-padrão de impressão digital, que fornece uma nova estratégia para identificar efetivamente as variedades genuínas de Clematidis Armandii Caulis e seus adulterantes.

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Um método para identificar materiais medicinais chineses e seus adulterantes relacionados foi construído tomando Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, uma medicina tradicional chinesa universalmente usada) como exemplo. Dez lotes de variedades genuínas de Chuanmutong e cinco lotes de adulterantes relacionados foram analisados e comparados com base nas impressões digitais de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) combinadas com quimiometria, incluindo análise de cluster (CA), análise de componentes principais (PCA) e análise ortogonal parcial de discriminação de mínimos quadrados (OPLS-DA). Além disso, o teor de β-sitosterol foi determinado. A impressão digital química de controle de Chuanmutong foi estabelecida, e 12 picos comuns foram identificados. A semelhança entre a impressão digital de 10 lotes de variedades Chuanmutong genuínas e a impressão digital de controle foi de 0,910-0,989, enquanto a similaridade de cinco lotes de adulterantes foi de apenas 0,133-0,720. Com base nos picos comuns no cromatograma, 15 lotes de amostras foram classificados em três níveis de conteúdo por PCA, e foram agregados em quatro categorias por CA, alcançando uma clara distinção entre Chuanmutong autêntico e adulterantes de Chuanmutong. Além disso, sete componentes diferenciais que podem efetivamente identificar Chuanmutong autênticos e adulterantes de Chuanmutong foram encontrados através do OPLS-DA. O teor de β-sitosterol de 10 lotes de variedades genuínas de Chuanmutong foi de 97,53-161,56 μg/g, enquanto o teor de β-sitosterol dos cinco lotes de adulterantes variou muito, entre os quais o teor de β-sitosterol de Clematis peterae Hand.-Mazz. e Clematis gouriana Roxb. Fintii Rehd. et Wils. foi significativamente menor do que a das variedades autênticas de Chuanmutong. O conteúdo do componente do índice HPLC e o método de reconhecimento multipadrão de impressão digital química estabelecido neste estudo fornecem uma nova estratégia para identificar efetivamente materiais medicinais chineses autênticos e adulterantes relacionados.

Introdução

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chuanmutong, Caulis seco de Clematis armandii Franch. ou Clematis montana Buch.-Ham., é uma medicina tradicional chinesa comumente utilizada em clínicas 1,2,3. É utilizado para o tratamento de problemas urinários, edema, feridas na língua e na boca, diminuição da secreção de leite, rigidez articular e dores musculares causadas pelo calor úmido4. Chuanmutong sempre foi obtido a partir de variedades silvestres, distribuídas principalmente no sudoeste da China, especialmente em Sichuan, onde a melhor qualidade pode ser encontrada

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Métodos de detecção química de impressões digitais

  1. Condições cromatográficas
    1. Preparar a fase móvel acetonitrila (A)/água (B). Defina um programa de gradiente da seguinte forma no software HPLC: 0-20 min, 3%A-10%A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.
    2. Manter a vazão da fase móvel em 1,0 mL/min.
    3. Efectuar a separação cromatográfica numa coluna C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) mantida a 30 °C.
    4. Ajuste o volume de injeção para 10 μL.
    5. Detectar as amostras a um comprimento de onda de 205 nm.
      NOTA: Para as configurações específica....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Impressão digital cromatográfica de Chuanmutong e análise de similaridade (SA)
Os valores de RSD do tempo relativo de retenção de precisão, repetibilidade e estabilidade foram inferiores a 0,46%, 1,65% e 0,53%, respectivamente; os valores de DSR da área de pico relativa foram inferiores a 4,23%, 3,56% e 3,96%, respectivamente. Como mostrado nas Figuras 1A,B, havia 12 picos comuns distintos (do pico 1 ao pico 12) nas impressões digitais de HPLC nas 10 amostras autênticas d.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A coleta de amostras para pesquisa é o primeiro passo fundamental para a construção do reconhecimento de vários padrões na identificação da autenticidade dos materiais medicinais chineses. Através de pesquisas de mercado, descobrimos que Sichuan Ya'an, Liangshan e Leshan são as principais áreas de produção de recursos selvagens de Chuanmutong. As variedades relacionadas do mesmo gênero também têm a mesma distribuição geográfica 6,20; CC, DC, DE, XS e SMT são freq.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabalho foi apoiado pelo Projeto de Administração de Medicina Tradicional Chinesa de Sichuan (n.º 2020JC0088, n.º 2021MS203).

....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Ácido acéticoZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China2017381038
AcetonitrilaSigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Xangai, ChinaWXBD5243V
- SitosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China20210201
  C18 colunaYuexu Material Technology Co., Ltd., Xangai, ChinaWelch Ultimate LP
ChuanmutongGuoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China 19020103CMT-1
ChuanmutongHongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 200701CMT-2
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 200701CMT-3
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 200901CMT-4
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 210701CMT-5
ChuanmutongHaobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 210401CMT-6
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 200901CMT-7
ChuanmutongWusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China 201201CMT-8
ChuanmutongLimin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China 201001CMT-9
ChuanmutongYuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China210501CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. WangMadzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China -CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China -DC
Clematis peterae Mão.-Mazz.Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China -DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et WilsMixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China -XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot.Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China -Balança eletrônica SMT
Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Xangai,  China FA1204
ErgosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China20210201
EtanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China2021112602
Acetato de etilaZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China2017042043
Ácido fórmicoKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China2016062901
Cromatografia líquida de alta eficiênciaAgilent, EUA.1260
IBM SPSS Statistics versão 26.0International Business Machines Corporation, USA-Methanol
Sigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Xangai, ChinaWXBD6409V
MetanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China202010302
álcool n-butílicoZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China2020071047
Éter de petróleoZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China2020090125
Ácido fosfóricoComeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China20200110
SESCF-TCM versão 2012Comissão Nacional da Farmacopeia,China-http://114.247.108.158:8888/login
StigmasterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China20210201
TriclorometanoSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Xangai, China20200214
versão Umetrics SIMCA 14.1.0.2047Umetrics, Suécia-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-downloadde
água ultrapuraYoupu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, ChinaUPH-II-10T
Limpador ultrassônicoKunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, ChinaKH3200E
Máquina

Referências

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
  2. Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of ....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Solicitar permissão para reutilizar o texto ou as figuras deste artigo JoVE

Solicitar permissão

Etiquetas

Impress o Digital por HPLCAutentica o de ChuanmutongAn lise de ClusterAn lise de Componentes PrincipaisOPLS DATeor de Beta sitosterolMateriais Medicinais Chineses

Artigos relacionados