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Artigo de método

Chip de detecção modificado com grafeno de alto desempenho para detecção de SARS-CoV-2

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DOI:

10.3791/64730

5 de maio de 2023

Neste artigo

Resumo

O presente protocolo descreve a fabricação de protótipos de biossensores de baixo custo baseados em nanossistemas úteis para detectar com precisão proteínas virais (no nível Fg). Uma plataforma de sensor tão pequena permite aplicativos de ponto de atendimento que podem ser integrados à Internet das Coisas Médicas (IoMT) para atender aos objetivos de telemedicina.

Resumo

Este modelo de protótipo de detecção envolve o desenvolvimento de um chip de detecção capacitivo interdigital duplo (DIDC) reutilizável e envidraçado com óxido de grafeno duplo (GrO) para detectar o vírus coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) de forma específica e rápida. O DIDC fabricado compreende um substrato de vidro contendo Ti/Pt envidraçado com óxido de grafeno (GrO), que é posteriormente modificado quimicamente com EDC-NHS para imobilizar anticorpos (Abs) hostis ao SARS-CoV-2 com base na proteína spike (S1) do vírus. Os resultados de investigações perspicazes mostraram que o GrO forneceu uma superfície projetada ideal para a imobilização de Ab e aumentou a capacitância para permitir maior sensibilidade e baixos limites de detecção. Esses elementos sintonizáveis ajudaram a atingir uma ampla faixa de detecção (1,0 mg / mL a 1,0 fg / mL), um limite mínimo de detecção de 1 fg / mL, alta capacidade de resposta e boa linearidade de 18,56 nF / g e um tempo de reação rápido de 3 s. Além disso, em termos de desenvolvimento de estruturas de teste de ponto de atendimento (POC) financeiramente viáveis, a reutilização do biochip GrO-DIDC neste estudo é boa. Significativamente, o biochip é específico contra antígenos transmitidos pelo sangue e é estável por até 10 dias a 5 °C. Devido à sua compactação, este biossensor reduzido tem potencial para diagnósticos POC de infecção por COVID-19. Este sistema também pode detectar outras doenças virais graves, embora uma etapa de aprovação utilizando outros exemplos de vírus esteja em desenvolvimento.

Introdução

Uma pandemia viral causada por um novo beta coronavírus1 (ou seja, 2019-nCoV), que mais tarde foi denominado coronavírus da síndrome respiratória aguda grave 2 (SARS-CoV-2)2 (doravante predominantemente referido como vírus), envolvendo um cluster pneumônico e desconforto respiratório agudo grave, surgiu na cidade de Wuhan, China, no final de 20193. Devido à sua rápida transmissão mundial de humano para humano, alta taxa de infecção, alta taxa de mortalidade e efeitos adversos graves com risco de vida4, durante a pandemia, a pesquisa em viro....

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Protocolo

1. Limpeza do chip de detecção DIDC

  1. No início do experimento, limpar a superfície do chip DIDC26 com solução de piranha (H2SO4:H2O2na proporção de 3:1) e colocá-la na placa de aquecimento a 80 °C por 15 min. Em seguida, enxágue a superfície do sensor com água destilada gota a gota usando uma pipeta para remover completamente os reagentes de limpeza. Para garantir a remoção completa do reagente, enxágue a superfície com quatro a cinco gotas de álcool etílico.
    NOTA: O chip DIDC foi fabricado após um relatório publicado anteriormente

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Resultados

Aqui, é apresentado um protocolo para detectar a proteína S1 do vírus SARS-CoV-2 usando um chip de detecção capacitivo duplo interdigitado (DIDC) envidraçado com óxido de grafeno. A Figura 1 mostra uma representação esquemática (fabricação com o layout do circuito) do chip de detecção capacitivo duplo interdigitado modificado com óxido de grafeno (DIDC) extremamente sensível e reciclável. O processo de fabricação passo a passo detalhado é mostrado na Figura 2. <.......

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Discussão

Para criar um biossensor produtivo baseado em chip DIDC, a distribuição de carga, a condutividade e a constante dielétrica do DIDC são extremamente importantes. Significativamente, as melhorias nesses limites de detecção estão relacionadas à reatância capacitiva do DIDC 18,26,27. Neste estudo, foi fabricado um imunossensor de capacitância hostil ao vírus Abs e funcionalizado pelo acoplamento EDC.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado até certo ponto pelo Programa de Pesquisa em Ciências Básicas por meio da Fundação Nacional de Pesquisa da Coreia (NRF) patrocinado pelo Ministério da Educação sob a Concessão 2018R1D1A1A09083353 e Concessão 2018R1A6A1A03025242, um pouco pela GCS Group Association Ltd., e pela Escola de Pós-Graduação do Ministério do Meio Ambiente da Coreia (MOE) investiu enorme energia no Projeto Integrado de Prevenção e Controle da Poluição e uma Bolsa de Pesquisa da Universidade de Kwangwoon em 2022.

E.M. gostaria de agradecer o apoio do Instituto Nacional de Imagens Biomédicas e Bioengenharia (....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Amilóide β 1-42 ProteínaMerck (Sigma-Aldrich)107761-42-2
anti-SARS-CoV-2 Spike (S1) anticorpo monoclonal IgG SinoBiological40150-R007
EDC [N- (3-dimetilaminopropil) -N′-cloridrato de etilcarbodiimida]Thermo Fisher ScientificA35391
Álcool etílico (C2H5OH)Peróxido de hidrogênio Sigma-Aldrich
(H2O2)
Fitapoliimida
NHS (NHydroxysuccinimida, 98+%; C4H5NO3)Thermo Fisher ScientificA39269
PBS Antígeno
específico da próstata Sigma-AldrichP3338-25UG
SARS-CoV-2 Spike S1-His proteína recombinanteSinoBiological40591-V08H
Óxido de Grafeno de camada única GrapheneSupermarket
Spin Coater Revestidorde alta precisão (Sistema de Revestimento de Spin)ACE-200:
Ácido sulfúrico (H2SO4)
de de fita Kapton

Referências

  1. Boldog, P. Risk assessment of novel coronavirus COVID-19 outbreaks outside China. Journal of Clinical Medicine. 9 (2), 571-583 (2020).
  2. Seo, G., et al. Rapid detection of COVID-19 cau....

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Chip de Óxido de GrafenoBiossensor CapacitivoImobilização de AnticorposTeste Point-of-CareCapacitor Interdigitado DuploQuímica EDC-NHSAnticorpo contra a Proteína SpikeDetecção de Doenças ViraisReutilizabilidade de Biochip

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