Aqui, descrevemos um método simples para implantar um monitor de glicose contínuo comercial projetado para pacientes em camundongos e fornecemos os scripts para analisar os resultados.
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Artigo de método
Monitoramento Contínuo Simples de Glicose em Camundongos em Movimento Livre
Neste artigo
Resumo
Resumo
Camundongos são um organismo modelo comum usado para estudar doenças metabólicas, como diabetes mellitus. Os níveis de glicose são tipicamente medidos por sangramento de cauda, que requer o manuseio dos camundongos, causa estresse e não fornece dados sobre camundongos que se comportam livremente durante o ciclo escuro. A medição contínua de glicose de última geração em camundongos requer a inserção de uma sonda no arco aórtico do camundongo, bem como um sistema de telemetria especializado. Esse método desafiador e caro não tem sido adotado pela maioria dos laboratórios. Aqui, apresentamos um protocolo simples envolvendo a utilização de monitores contínuos de glicose disponíveis comercialmente usados por milhões de pacientes para medir a glicose continuamente em camundongos como parte da pesquisa básica. A sonda de detecção de glicose é inserida no espaço subcutâneo na parte de trás do mouse através de uma pequena incisão na pele e é mantida firmemente no lugar usando um par de suturas. O dispositivo é suturado à pele do rato para garantir que permanece no lugar. O dispositivo pode medir os níveis de glicose por até 2 semanas e envia os dados para um receptor próximo sem qualquer necessidade de lidar com os ratos. São fornecidos roteiros para a análise dos dados básicos dos níveis glicêmicos registrados. Este método, desde a cirurgia até a análise computacional, é custo-efetivo e potencialmente muito útil na pesquisa metabólica.
Introdução
O diabetes mellitus (DM) é uma doença devastadora caracterizada por níveis elevados de glicose no sangue. O DM tipo 1 pode ser resultado de um ataque autoimune às células beta produtoras de insulina no pâncreas. Já o DM tipo 2 e o DM gestacional são caracterizados pela falha das células beta em secretar insulina suficiente em resposta ao aumento dos níveis glicêmicos1. O camundongo é um organismo modelo comum usado para estudar o DM, uma vez que tem fisiologia semelhante, e seus níveis normais de glicose são próximos aos dos seres humanos. Além disso, linhagens específicas de camundongos podem desenvolver DM devido a mutaç....
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Protocolo
Os experimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade Hebraica.
NOTA: Todas as ferramentas devem ser esterilizadas, e o manuseio da cânula deve ser realizado usando uma técnica estéril. O protocolo abaixo é ajustado para uma CGM específica. O protocolo pode ser adaptado para outras CGMs.
1. Administração de analgésicos antes do procedimento
- Administrar dextrose a 5% e solução salina a 0,45% com meloxicam na dose de 5 mg/kg de peso corporal por via subcutânea.
2. Administração da anestesia
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Resultados
Resultado cirúrgico
Resultados de oito camundongos HSD:ICR (com 8 semanas de idade) alimentados com uma dieta rica em gordura e sacarose (HFHS) por 18 semanas e cinco camundongos HSD:ICR magros (com idade de 12 semanas) são mostrados. O dispositivo que usamos armazena dados por até 8 h. O acesso ao biotério local foi restrito das 07:00 às 19:00, proibindo a coleta de dados durante o horário tardio da noite, quando os camundongos estão ativos. Os camundongos foram, portanto, colocados em uma sala com i.......
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Discussão
Este protocolo oferece um método simples e barato para monitorar os níveis de glicose em camundongos que não requer microcirurgia desafiadora e não envolve sangramento ou manuseio dos camundongos. O método é fácil de implementar em todas as instalações e não causa mortalidade, dor ou desconforto excessivo aos camundongos. A etapa mais crítica do protocolo é inserir a cânula do sensor de glicose sob a pele do camundongo. A adição de algumas suturas permite que a cânula permaneça no local por mais tempo. Os sensores são pe.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.
Agradecimentos
Agradecemos a Dvir Mintz DVM e ao pessoal veterinário e de criação do biotério, bem como aos membros do nosso grupo, pelas discussões frutíferas. Este estudo foi apoiado por uma bolsa 1541/21 da Israel Science Foundation concedida a D.B.Z. D.B.Z. é uma faculdade de STEM Zuckerman.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 2% Gluconato de clorexidina e 70% Álcool Isopropílico | 3M | ID | |
| Injeção de Dextrose a 5% e Cloreto de Sódio a 0,45%, Porta-agulhas USP | Braun | L6120 | |
| Castroviejo | FST | 12061-02 | |
| Tesoura Bonn Extra Fina | FST | 14084-08 | |
| FreeStyle Libre 1 leitor | Abbott | ART27543 | |
| Sensor FreeStyle Libre | Abbott | ART36687 | |
| Aplicador de sensor FreeStyle Libre | Abbott | ART36787 | |
| Compressas de gaze | Sion medical | PC912017 | |
| Graefe Fórceps | FST | 11052-10 | |
| Creme Depilatório | Veet | 3116523 | |
| Dieta rica em gordura e rica em sacarose | Envigo Teklad dietas | TD.08811 | |
| Isoflurano, USP Terrell | Piramal | 26675-46-7 | |
| Meloxicam 5 mg / mL | Chanelle Pharma | 08749/5024 | |
| MiniARCO Clipper kit | Moser | CL8787-KIT | |
| PROLENE Polipropileno Sutura 5-0 | Ethicon | 8725H | |
| Puralube Pomada Oftálmica | Perrigo | 574402511 | |
| Cotonetes | Sistema | BHW 271676 | |
| SomnoSuite | Kent Scientific | SOMNO |
Referências
- Polonsky, K. S. The past 200 years in diabetes. New England Journal of Medicine. 367 (14), 1332-1340 (2012).
- Rees, D. A., Alcolado, J. C. Animal models of diabetes mellitus. Diabetic Medicine. 22 (4), 359-370 (2005).
- Pearson, J. A., Wong, F. S., Wen, L.
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Reimpressões e permissões
