O presente estudo demonstra um modelo animal altamente reprodutível de lesão aguda de isquemia e reperfusão miocárdica regional em coelhos, utilizando uma minitoracotomia esquerda para casos de sobrevida ou uma esternotomia mediana para casos de não sobrevida.
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Artigo de método
Modelo de Lesão de Isquemia e Reperfusão em Coelhos
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O protocolo aqui fornece uma metodologia simples e altamente replicável para induzir isquemia miocárdica regional aguda in situ em coelhos para experimentos de não sobrevida e sobrevida. O coelho adulto branco da Nova Zelândia é sedado com atropina, acepromazina, butorfanol e isoflurano. O animal é intubado e colocado em ventilação mecânica. Um cateter intravenoso é inserido na veia marginal da orelha para a infusão de medicamentos. O animal é pré-medicado com heparina, lidocaína e solução de Ringer com lactato. Um corte carotídeo é realizado para obter acesso à linha arterial para monitorização da pressão arterial. Parâmetros fisiológicos e mecânicos selecionados são monitorados e registrados por análise contínua em tempo real.
Com o animal sedado e totalmente anestesiado, realiza-se uma quarta toracotomia no espaço intercostal, pequena toracotomia esquerda (sobrevida) ou esternotomia mediana (não sobrevida). O pericárdio é aberto e a artéria descendente anterior (DAE) é localizada.
Uma sutura de polipropileno é passada ao redor do segundo ou terceiro ramo diagonal da artéria DAD, e o filamento de polipropileno é rosqueado através de um pequeno tubo de vinil, formando uma alça. O animal é submetido a 30 min de isquemia regional, conseguida pela oclusão da DA pelo aperto da alça. A isquemia miocárdica é confirmada visualmente pela cianose regional do epicárdio. Após a isquemia regional, a ligadura é solta e o coração é reperfundido.
Tanto para experimentos de sobrevida quanto para não sobrevida, a função miocárdica pode ser avaliada por meio de uma medida ecocardiográfica (ECO) da fração de encurtamento. Para estudos de não sobrevida, os dados da ultrassonometria coletada com três sondas ultrassônicas piezelétricas digitais implantadas na área isquêmica e a pressão desenvolvida do ventrículo esquerdo (PDVE) com cateter de inserção apicamente no ventrículo esquerdo (VE) podem ser continuamente adquiridos para avaliação da função miocárdica regional e global, respectivamente.
Para estudos de sobrevida, a incisão é fechada, uma toracocentese com agulha esquerda é realizada para evacuação com ar pleural e o controle da dor pós-operatória é alcançado.
Introdução
As doenças cardiovasculares são a principal causa de morte no mundo e contribuem para mais de 18 milhões de mortes a cada ano 1,2,3. O infarto agudo do miocárdio (IM) é uma emergência médica comum que se desenvolve quando um coágulo sanguíneo ou um pedaço de placa ateromatosa bloqueia o fluxo sanguíneo de uma artéria coronária. Isso causa isquemia miocárdica regional no território que a artéria perfunde.
O presente estudo descreve um protocolo que utiliza uma metodologia simples e confiável para criar isquemia miocárdica regional aguda in situ<....
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Protocolo
Esta investigação foi conduzida de acordo com as diretrizes do National Institutes of Health sobre cuidados e uso de animais e foi aprovada pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais do Boston Children's Hospital (Protocolo 20-08-4247R). Todos os animais receberam cuidados humanizados de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.
1. Espécie animal, agentes anestésicos e analgésicos
- Espécie animal: Use coelhos brancos da Nova Zelândia (cepa selvagem; sexo feminino; sexualmente maduro 15-20 semanas de idade; 3-4 kg de peso corporal) para estudos experimentais.
- Anestésicos e analgésicos....
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Resultados
Seguindo o protocolo (Figura 1), a isquemia miocárdica foi confirmada imediatamente pela visualização direta da cianose do epicárdio.
ECGs padrão (três derivações de membros: I, II e III, e três derivações aumentadas computadorizadas: aVL, aVR e aVF) foram registrados continuamente pré-isquemia, durante isquemia e na reperfusão (Figura 2). Os ECGs demonstram taquicardia, arritmias (fibrilação ventricular), defeitos do sistema de condu.......
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Discussão
Nosso protocolo demonstra uma metodologia confiável para a realização de isquemia miocárdica regional aguda no coelho. A abordagem da minitoracotomia esquerda é ideal para casos de sobrevida, para os quais a incisão e a dor associada devem ser minimizadas. É importante ressaltar que a terapia diurética não foi necessária antes da extubação, e não houve mortalidade intraoperatória no grupo sem sobrevida ou com 4 semanas de pós-operatório no grupo sobrevida. Quando o desenho do protocolo requer um caso de não sobrevida, ou.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse, financeiros ou não, declarados pelos autores.
Agradecimentos
O estudo original no qual este protocolo foi utilizado foi apoiado pelo National Heart, Lung, and Blood Institute Grants HL-103642 e HL-088206
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| # 10 lâmina | Bard Parker | 371210 | |
| # 11 lâmina | Fisher Scientific | B3L | |
| 22 G PIV agulha | BD Insyte | 381423 | |
| Acepromazina | VETONE | NDC 13985-587-50 | 0,5 mg / kg IM e IV |
| Aline saco de pressão | Infu-Stat | 2139 | |
| Angiocath | Becton Dickinson | 382512 | |
| Cateter Arterial | Teleflex | MC-004912 | |
| Atropina | Hikma Pharmaceuticals | NDC 0641-6006-01 | 0,01 mg/kg IM |
| Betadine e álcool isopropílico 70% | McKesson | NDC 68599-2302-6 | |
| Máquina de gases sanguíneos | Siemens | MRK0025 | |
| Bovie | Valleylab | E6008 | |
| Bulldog clamps | World Precision Instruments | 14119 | |
| Bupivacaína | Auromedics | NDC 55150-249-50 | 3 mg/kg IM |
| Butorfanol | Roxane | NDC 2054-3090-36 | 0,5 mg/kg IM |
| Folha de acetato transparente | Oxford Instruments | ID 51-1625-0213 | |
| Clipers | Andis | AGC2 | |
| DeBakey fórceps | Integra | P6280 | |
| Máquina de ecocardiografia | Philips | IE33 F1 | |
| Máquina de eletrocardiografia | Meditech | MD908B | |
| Medline | #922774 | ||
| Fentanil | West-Ward | NDC 0641-6030-01 | 1– 4 µ g/kg de adesivo transdérmico |
| Solução de formaldeído 10% | Epredia | 94001 | |
| Placas de vidro | United Scientific | B01MUHX6MR | |
| Heparina Sódio | Sagent | NDC 69-0058-02 | 1000U em 1 mL 3 mg/kg |
| Manta de água quente | 3M | 55577 | |
| Isoflurano | Penn Veterinary Supply, INC | NDC 50989-606-15 | 1%– 3% |
| Cetamina | Dechra | NDC 42023-138-10 | 10 mg/kg IV |
| Gráfico de Laboratório 7 Software | de Aquisição Adinstruments | ||
| Solução de Ringer com Lactato | ICUmedical | NDC 0990-7953-09 | 10 mL/kg/h |
| Laringoscópio | Welch Allyn | 68044 | |
| Cateter de lúmen do ventrículo esquerdo 3Fr | McKesson | 385764-EA | |
| Lidocaína (1%) | Pfizer | 4276-01 | 1– 1,5 mL / kg IV |
| Transdutor LVDP | Edward | PDP-ED | |
| Caneta de marcação | Viscot | 1451SR-100 Tesoura Mayo não estéril | |
| Mayo | S7-1098 | ||
| Medetomidina | Inteiramente Animais de estimação Farmácia | NDC 015914-005-01 | 0,25 mg / kg IM |
| Tesoura Metzenbaum | Cole-Parmer | UX-10821-05 | |
| Monastra. Pigmento azul 98% | Chemsavers | MBTR1100G | |
| Monocryl 5-0 | Ethicon | Y463G | |
| Braçadeira de mosquito | Shioda | 802N | |
| PDS 3-0 | Ethicon | 42312201 | |
| Cristais de sonomicrometria piezoelétricos | Sonometrics | Pequeno 2mm redondo | |
| Plegets | DeRoyal | 32-363 | |
| Povuine Iodine Prep Solutions | Medline | MDS093940 | |
| Máscara facial de sistema vaporizado de precisão | Yuwell | B07PNH69BF | |
| Prolene 3-0 | Ethicon | 8665G | |
| Proline 5-0 | Ethicon | 8661G | |
| Sonda de oximetria de pulso | Masimo | 9216-U | |
| Espalhador de costelas | Medline | MDS5621025 | |
| Sonda do Setor Pediátrico S12 | Phillips | 21380A | |
| Sonsonômetro Sonometria | BZ10123724 | ||
| Gaze estéril | Medline | 3.00802E+13 | |
| Toalhas estéreis | McKesson | MON 277860EA | |
| Afastador esternal | Medline | MDS5610321 | |
| Suturas para fechamento | J& J Dental | 8698G | |
| Monitor de telemetria | Meditech | MD908B | |
| Sonda de temperatura | Omega | KHSS-116G-RSC-12 | |
| Cloreto de trifenil tetrazólio (1%) | Ventilador MFCD00011963 | ||
| MedGroup | MSLGA 11 | ||
| Vicryl 2-0 | Ethicon | V635H | |
| Vinil tubulação | ABE | DISW 3001 |
Referências
- Selvin, E., Erlinger, T. P. Prevalence of and risk factors for peripheral arterial disease in the United States: Results from the National Health and Nutrition Examination Survey, 1999-2000. Circulation. 110 (6), 738-743 (2004).
- Bolli, R., et al.
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Reimpressões e permissões
