$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Todos os procedimentos experimentais foram revisados e aprovados pelo Comitê de Revisão Institucional do Seoul National University Bundang Hospital. Para os experimentos deste estudo, 34 participantes com AVC foram recrutados. Consentimento livre e esclarecido foi obtido de todos os participantes. Um termo de consentimento livre e esclarecido foi obtido de um representante legal se um participante atendesse aos critérios, mas não pudesse assinar o termo de consentimento devido à deficiência.
1. Montagem experimental
- Recrutamento de pacientes
- Realizar o processo de triagem utilizando os seguintes critérios de inclusão:
Idade entre 18 e 85 anos com presença de comprometimento das funções dos membros superiores;
Primeiro acidente vascular cerebral isquêmico ou hemorrágico confirmado por tomografia computadorizada do cérebro ou ressonância magnética;
Capacidade do participante de seguir as instruções para avaliação clínica e o estudo de EEG;
Ausência de história de outras doenças psiquiátricas ou neurológicas, exceto acidente vascular cerebral.
- Excluir pacientes com base no seguinte:
Doença prévia envolvendo o sistema nervoso central (por exemplo, traumatismo cranioencefálico, tumor cerebral, doença de Parkinson);
Incapacidade de usar a touca de EEG; e
Incapacidade de seguir as instruções para a avaliação clínica e o estudo de EEG.
OBS: Os critérios de inclusão e exclusão foram escolhidos para selecionar os participantes capazes de participar do experimento e regular os fatores demográficos que poderiam influenciar os resultados.
- Fornecer a todos os participantes recrutados informações sobre os detalhes do procedimento experimental.
- Sistema experimental: EEG
- Use um sistema de EEG composto por 32 eletrodos de couro cabeludo Ag/AgCl, uma tampa de EEG têxtil e um software de registro de EEG para registro de dados.
- Use um computador pessoal (PC) com software de gravação de EEG instalado e conecte o PC ao dispositivo de EEG via Bluetooth.
- Use outro PC com um aplicativo de software de análise numérica e programação para engenharia (consulte Tabela de Materiais).
- Para apresentação dos estímulos, conecte o CP a uma caixa de gatilho dedicada (Figura 1).
NOTA: As especificações detalhadas dos dois PCs são fornecidas na Tabela de Materiais.
- Paradigma experimental baseado em software de programação
OBS: Os participantes realizaram uma tarefa de extensão de mão usando as mãos afetadas e não afetadas, durante a qual os dados de EEG foram medidos. A Figura 2 mostra o paradigma experimental deste estudo.- Apresentar dois estímulos visuais, CLOSE e OPEN, por 30 s cada, no centro de um monitor para medir os dados basais do EEG em repouso, durante o qual o participante fecha e abre os olhos.
NOTA: Como os dados de EEG em repouso são relativamente menos contaminados por artefatos fisiológicos indesejados, eles são úteis para verificar a qualidade dos dados de EEG e identificar características individuais de EEG com relação ao estado de repouso.
- Apresentar uma imagem de movimento da mão por 3s para instruir o participante a fazer um movimento de extensão da mão, seguido de uma marca de fixação por 5s para repouso.
OBS: Este procedimento foi considerado como um ensaio e repetido 10 vezes em uma única sessão. Cada participante foi submetido a 4 sessões para cada mão. O participante fazia uma pausa sempre que quisesse após a realização de cada sessão para evitar o cansaço excessivo.

Figura 1: Esquema de montagem do equipamento. Um CP (CP1) apresentando estímulos experimentais foi conectado a uma caixa de disparo e outro CP (CP2) foi conectado a um amplificador de EEG. Os eventos de estimulação gerados no CP1 foram entregues ao amplificador de EEG através da caixa de disparo conectada ao CP1. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 2: Paradigma experimental utilizado neste estudo. Uma única tentativa consistiu de um movimento de extensão da mão de 3 s seguido de um relaxamento de 5 s. Esse padrão foi repetido 10 vezes em uma única sessão. Foram realizadas oito sessões; Quatro sessões envolveram movimentos afetados da mão, enquanto as outras quatro envolveram movimentos não afetados da mão. Esta figura foi adaptada de Shim et al.17 com permissão de Mary Ann Liebert, Inc .
2. Registro de dados de EEG relacionados ao movimento
- Configuração do EEG
- Assente o participante em uma poltrona confortável em frente a um monitor.
OBS: A distância entre o participante e o monitor deve ser de no mínimo 60 cm para evitar fadiga ocular. No entanto, uma distância excessiva deve ser evitada (por exemplo, >150 cm), pois poderia distrair a concentração do participante.
- Para usar com precisão a tampa para medição do EEG, defina a localização de Cz com base no sistema internacional 10-20 usando a intersecção da linha longitudinal que conecta o násio e o ínion e a linha transversal que conecta a parte superior de ambas as aurículas.
NOTA: Uma tampa de EEG pode não ser necessária, dependendo do equipamento de medição de EEG. Nesse caso, os eletrodos de EEG são fixados diretamente ao couro cabeludo de acordo com o sistema internacional 10-2015.
- Para uma medida precisa do EEG, use uma tampa de EEG de tamanho adequado de acordo com o tamanho da cabeça do participante e coloque-a de modo que a posição do eletrodo Cz seja colocada no local Cz individual.
- Fixar a alça do queixo com estanqueidade adequada; Isso evitará que o participante fique desconfortável durante a deglutição e o piscar no experimento. Em seguida, confirme se as posições dos eletrodos T9 e T10 da tampa do EEG estão na região temporal acima de ambas as aurículas, e a posição do eletrodo Fpz da tampa do EEG está localizada no meio da testa.
NOTA: Se esses eletrodos estiverem fora do local designado, considere mudar a tampa. Três tamanhos de touca de EEG foram utilizados em nosso estudo (54 cm: pequeno, 56 cm: médio, 58 cm: grande).
- Após a colocação correta da tampa do EEG, fixar eletrodos de 32 Ag/AgCl no couro cabeludo de acordo com o sistema internacional estendido 10-10, com os eletrodos terra e de referência em Fpz e FCz, respectivamente16.
NOTA: A localização do eletrodo de referência (FCz) é relativamente menos influenciada por vários artefatos fisiológicos, como os da eletro-oculografia, eletromiografia e eletrocardiografia, por estar localizado ao redor da área central (Cz) do couro cabeludo.
- Ajustar o nível de impedância entre os eletrodos de EEG e o couro cabeludo usando gel condutor e fixar os cabelos com o gel para evitar qualquer obstrução entre os eletrodos de EEG e o couro cabeludo.
NOTA: É importante confirmar se alguma ponte entre os eletrodos de EEG adjacentes é criada devido ao vazamento de gel.
- Use o software para gravação de EEG.
- Ligue o sistema de EEG e execute Configuração > Selecionar amplificador. Escolha Liveamp > > amplificador > conectar. Procure a função Liveamp para a conexão sem fio (Figura 3).
- Execute a função de verificação de impedância para monitorar o nível de impedância de cada eletrodo.
NOTA: Recomenda-se a realização do experimento com nível de impedância de <20 KΩ (Figura 4).
- Execute a função de monitoração para confirmar se os EEGs de todos os eletrodos têm níveis de amplitude semelhantes através da monitoração do sinal de EEG em tempo real (Figura 5).
NOTA: A amplitude do sinal do EEG está geralmente entre 10 μV e 100 μV, e a potência alfa (8-12 Hz) aumenta ao redor da área occipital quando os olhos estão fechados. Portanto, a qualidade dos dados do EEG pode ser confirmada qualitativamente monitorando-se o nível de amplitude e as oscilações alfa nos canais ao redor da área occipital enquanto os olhos estão fechados.
- Configuração de paradigmas
- Para a aquisição estável de dados de EEG, use dois CPs separados para apresentar estímulos externos e registrar dados de EEG (ver Figura 1).
- Para apresentar estímulos experimentais aos participantes, crie um programa de estimulação baseado no paradigma experimental utilizando software de programação (introduzido na etapa 1.3).
NOTA: Um programa de estimulação baseado em software foi criado neste estudo, mas outros softwares podem ser usados dependendo de sua compatibilidade com o equipamento de EEG usado para o experimento, bem como da conveniência do usuário. O script de estímulo baseado em software de programação é fornecido no Arquivo Suplementar 1 (Experimental_stimulus.m). As informações do evento, indicando o ponto de início dos estímulos, são geradas pelo software de programação interno, transmitidas ao amplificador de EEG através da caixa de disparo e, finalmente, ao software de registro de EEG (Figura 1).
- Executar o programa apresentando os estímulos experimentais no modo de monitoramento (vide subetapa 2.1.10). Em seguida, confirme se as informações do evento estão corretamente marcadas em tempo hábil na parte inferior do software de registro do EEG cada vez que um estímulo é apresentado, como mostra a Figura 6.
NOTA: As informações sobre o ponto de tempo são registradas sempre que um novo estímulo é apresentado e posteriormente são usadas para segmentação dos dados. Portanto, é importante obter os momentos exatos dos eventos experimentais tanto quanto possível para evitar segmentação imprecisa dos dados, o que levaria a resultados não confiáveis na análise.
- Iniciar o software de registro do EEG e, em seguida, executar independentemente o programa de apresentação do estímulo desenvolvido com base no paradigma experimental usando software de programação para evitar a omissão de dados.
NOTA: Para conveniência da análise de dados, é recomendável criar nomes de arquivo com uma regra consistente para armazenamento de dados (por exemplo, Sub1_Session1).
- Registro de EEG
- Medir o EEG a uma taxa de amostragem de 1.000 Hz seguindo o paradigma experimental introduzido na etapa 1.3.
NOTA: A taxa de amostragem pode ser alterada dependendo da faixa de frequências de EEG que o pesquisador deseja investigar. Recomenda-se geralmente o uso de uma taxa de amostragem de >200 Hz, onde a informação do EEG pode ser investigada a ≤100 Hz com base no teorema de Nyquist. Isso ocorre porque a maioria das informações de EEG existe abaixo de 100 Hz.
- Manter os mesmos ambientes experimentais (por exemplo, local de experimentação, equipamento, temperatura ambiente, etc.) tanto quanto possível entre os participantes e instruí-los a minimizar movimentos desnecessários durante a medição do EEG.

Figura 3: Procedimento de conexão sem fio entre um amplificador de EEG e o PC com o software de gravação de EEG. Siga os passos em ordem: (A) selecione amplificador, (B) conecte amplificador, (C) procure o amplificador conectado para conexão sem fio, (D) conexão concluída. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 4: Procedimento de verificação de impedância para cada canal. Todos os canais devem ser ajustados para a cor verde para a medição estável do EEG. Recomenda-se conduzir o experimento com impedância inferior a 20 KΩ. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 5: Procedimento de monitoramento de dados em tempo real para cada canal. Os sinais de todos os canais que estão sendo medidos podem ser monitorados em tempo real e podem ser ampliados usando a opção (caixa vermelha) na barra superior. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 6: Captura de tela para monitorar informações de eventos. As barras vermelhas indicam os criadores de eventos que são apresentados cada vez que um estímulo é fornecido pelo PC1. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
3. Análise dos dados do EEG
NOTA: Este estudo fornece diretrizes precisas para replicar o conceito de pesquisa. Portanto, fornece um breve esboço do processo de análise e resultados representativos. Os processos detalhados e os resultados associados podem ser encontrados em estudo anterior17. Isso serve como uma indicação de que a Mary Ann Liebert, Inc., concedeu permissão para o uso de material protegido por direitos autorais.
- Pré-processamento
- Remover artefatos oculares dos dados brutos de EEG usando procedimentos matemáticos baseados na análise de componentes principais implementados no software de pré-processamento de dados de EEG18,19 (ver Tabela de Materiais).
NOTA: Se alguma época apresentou artefatos proeminentes (± 100 μV), mesmo após pré-processamento em qualquer um dos eletrodos, ela foi excluída da análise posterior. O número médio de épocas rejeitadas, incluindo seu desvio padrão, foi de 3,69 ± 7,15 para a tarefa de movimento de mão afetada e 1,62 ± 3,95 para a tarefa de movimento de mão não afetada.
- Aplique um filtro passa-banda entre 0,1 Hz e 55 Hz. Segmente os dados de EEG pré-processados de -1 s a 3,5 s para cada ensaio com base no início da tarefa para conter o período basal usado para perturbações espectrais relacionadas a eventos (ERSP) e análises de redes funcionais.
- Análise da ERSP
NOTA: Os dados de EEG medidos foram validados via análise ERSP para uma banda de frequência beta baixa (12-20 Hz) associada a movimentos voluntários.- Realizar uma transformada de Fourier de curto prazo para cada tentativa para calcular as potências espectrais do EEG, para a qual a função newtimef da caixa de ferramentas EEGLAB no software de programação foi usada 20 (uma janela de Hanning não sobreposta, tamanho de janela de250 ms).
- Normalizar o espectro de potência de cada tentativa subtraindo a potência média do período basal (-1 a 0 s) para investigar as mudanças nas potências espectrais entre a tarefa de movimento da mão e o período basal.
- Estimar mapas ERSP normalizados basais para cada paciente por meio da média dos espectros de potência normalizados ao longo dos ensaios.
- Análise de rede funcional
NOTA: Uma análise de rede funcional foi conduzida para investigar alterações no EEG a partir de uma perspectiva de rede cerebral. Para calcular índices ponderados de redes cerebrais inteiras com base na teoria dos grafos, a conectividade cerebral entre diferentes regiões foi calculada primeiro usando o valor de bloqueio de fase (PLV). Uma matriz de conectividade funcional foi então calculada usando os resultados da análise de conectividade baseada em PLV, que foi posteriormente usada para calcular índices de redes cerebraisinteiras 17. Todas as análises funcionais da rede foram realizadas utilizando o software de programação.- Calcular o valor de bloqueio de fase (PLV) baseado em transformada de Hilbert para uma banda de frequência beta baixa (12-20 Hz) usando uma função interna21,22. A função interna para calcular o PLV baseado na Transformação de Hilbert é fornecida no Arquivo Suplementar 2 (myPLV.m).
- Avaliar os VLPs entre todos os pares possíveis dos 32 eletrodos de EEG em cada ponto de tempo durante os períodos de tarefa (0-3,5 s) e criar uma matriz de adjacência simétrica (32 x 32, número de eletrodos = 32) pela média dos VLPs ao longo do período de tarefa. Utilizar a matriz PLV como dados de entrada para análise de redes17,23.
- Avalie quatro índices ponderados de rede de nível global com base na teoria dos grafos usando o Brain Connectivity Toolbox (https://sites.google.com/site/bctnet): (1) força, (2) coeficiente de agrupamento, (3) comprimento do caminho e (4) mundanidade pequena 17,24,25.