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Artigo de método

Tomografia de Coerência Óptica Guiada por Imagem para Avaliar Alterações Estruturais em Retinas de Roedores

943 visualizações

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DOI:

10.3791/64783

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10 de fevereiro de 2023

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O protocolo aqui apresentado detalha os procedimentos de coleta e análise de dados para tomografia de coerência óptica (OCT) guiada por imagem e demonstra sua aplicação em múltiplos modelos de roedores de doenças oculares.

Resumo

Doenças oculares, como degeneração macular relacionada à idade, glaucoma, retinite pigmentosa e uveíte, são sempre acompanhadas por alterações estruturais da retina. Essas doenças que afetam o fundo sempre exibem anormalidades típicas em certos tipos de células da retina, incluindo células fotorreceptoras, células ganglionares da retina, células nos vasos sanguíneos da retina e células nas células vasculares da coroide. Técnicas de imagem não invasivas, altamente eficientes e adaptáveis são necessárias tanto para a prática clínica quanto para a pesquisa básica. A tomografia de coerência óptica (OCT) guiada por imagem atende a esses requisitos porque combina fotografia de fundo de olho e OCT de alta resolução, fornecendo um diagnóstico preciso de pequenas lesões, bem como alterações importantes na arquitetura da retina. Este estudo detalha os procedimentos de coleta e análise de dados para OCT guiada por imagem e demonstra sua aplicação em modelos de roedores de neovascularização de coróide (CNV), esmagamento do nervo óptico (ONC), degeneração retiniana induzida por luz e uveíte autoimune experimental (EAU). Essa técnica ajuda os pesquisadores no campo ocular a identificar alterações estruturais da retina de roedores de maneira conveniente, confiável e tratável.

Introdução

As doenças oculares que acometem o fundo de olho sempre apresentam anormalidades típicas em certos tipos de células da retina, como células fotorreceptoras, células ganglionares da retina, células dos vasos sanguíneos da retina e células dos vasos sanguíneos da coroide, que podem influenciar posteriormente a acuidade visual dos pacientes1. Para evitar deficiência visual irreversível, diagnósticos oportunos e tratamentos adequados são necessários1. A tomografia de coerência óptica (OCT) tem sido amplamente utilizada na clínica para avaliar uma série de doenças oculares, incluindo degenera....

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Protocolo

Todos os procedimentos em animais estavam em conformidade com a declaração da Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia sobre o Uso de Animais em Pesquisa Oftálmica e da Visão e foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Médica de Wenzhou (WMU). Os ratos e camundongos tiveram acesso livre a água e comida com uma intensidade de luz ambiental de 18 lux em um ciclo escuro/claro de 12 horas.

1. Preparação dos modelos oculares animais

  1. Modelo de neovascularização coroidal (CNV) induzida por laser de camundongo11,12

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Resultados

A OCT guiada por imagem pode ser usada para monitorar o desenvolvimento do ponto de laser na neovascularização coroidal induzida por laser (CNV) em camundongos. Conforme mostrado na Figura 1, os vasos sanguíneos do recém-nascido passaram pela membrana de Bruch, bem como pela camada do epitélio pigmentar da retina (EPR) e formaram uma cicatriz fibrótica após lesão por laser11,12. Este ponto de lesão pode ser capturado em varredura de .......

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Discussão

Este protocolo fornece instruções para a coleta de imagens e medição de espessura da OCT guiada por imagem. Ao demonstrar os quatro modelos de roedores mais populares de doenças oculares, os pesquisadores descobriram que a OCT guiada por imagem proporcionou excelente desempenho no exame de alterações estruturais drásticas da retina. De fato, com imagens de alta resolução, pequenas lesões também podem ser encontradas facilmente em imagens OCT. Com o auxílio da OCT guiada por imagem, um gr.......

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Divulgações

Nenhum dos autores tem conflitos de interesse a divulgar.

Agradecimentos

Os autores agradecem aos membros do State Key Laboratory of Ophthalmology, Optometry, and Vision Science pelo apoio técnico e comentários úteis sobre o manuscrito. Este trabalho foi apoiado por doações da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82101169, 81800857, 81870690), da Fundação Provincial de Ciências Naturais de Zhejiang da China (LGD22H120001, LTGD23H120001, LTGC23H120001), do Programa do Departamento de Ciência e Tecnologia de Wenzhou da China (Y20211159), do Projeto de Apoio à Ciência e Tecnologia de Guizhou (Qiankehezhicheng [2020] 4Y146) e do Projeto do Laboratório Estadual de Oftalmologia, Optometria e Ciência....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Camundongo BALB/cBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., LtdPreparações de modelo animal
C57BL/6JNifdc mouseBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., LtdPreparações de modelo animal
Carbomer Eye GelFabrik GmbH Subsidiária da Bausch & LombUmedeça a córnea 
Freund completo' s adjuvanteSigma F5881EAU experimento
plataforma experimentalPhoenix Technology GroupPreparações de modelo animal
hIRBP161-180Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Fornecedor:Services Co., Ltd.Experimento EAU Cetamina
Ceva Sante AnimaleAnestesia geral
Caixa de laserHaag-Streit GroupMerilas 532αPreparações para modelos animais
Rato LewisBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., LtdPreparações de modelos animais
Mycobacterium Tuberculosis H37RASigma 344289Experimento EAU
Phoneix Micron IV com OCT guiado por imagem e laser guiado por imagemPhoenix Technology GroupPreparações de modelos animais Pinças
de tecidoSuzhou Mingren Medical Instrument Co., LtdMR-F101A-5Preparações de modelos animais
Colírio de fenilefrina de tropicamidaSANTEN OY, JapãoTesoura
Vannas de dilatação ocularSuzhou Mingren Medical Instrument Co., LtdMR-S121APreparações de modelo animal
XylazineCeva Sante AnimaleAnestesia geral

Referências

  1. Cen, L. -P., et al. Automatic detection of 39 fundus diseases and conditions in retinal photographs using deep neural networks. Nature Communications. 12, 4828(2021).
  2. Kashani, A. H., et al.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Alterações Estruturais RetinianasImagem da Retina de RoedoresFotografia de Fundo de OlhoNeovascularização CoroidianaEsmagamento do Nervo ÓpticoDegeneração RetinianaUveíte AutoimuneCélulas FotorreceptorasCélulas Ganglionares da Retina

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