Neste estudo, um modelo de indução de periodontite em ratos é apresentado através de uma combinação de ligadura retentiva e injeções repetitivas de lipopolissacarídeo derivado de Porphyromonas gingivalis, durante 14 dias ao redor dos primeiros molares superiores. As técnicas de ligadura e injeção de LPS foram eficazes na indução de peridontite, resultando em perda óssea alveolar e inflamação.
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Artigo de método
Indução de periodontite através de uma combinação de ligadura e injeção de lipopolissacarídeo em um modelo de rato
Neste artigo
Resumo
Resumo
A periodontite (DP) é uma doença imuno-inflamatória crônica de alta prevalência do periodonto, que resulta em perda de tecido mole gengival, ligamento periodontal, cemento e osso alveolar. Neste estudo, um método simples de indução de DP em ratos é descrito. Fornecemos instruções detalhadas para a colocação do modelo de ligadura ao redor dos primeiros molares superiores (M1) e uma combinação de injeções de lipopolissacarídeo (LPS), derivado de Porphyromonas gingivalis na face mesio-palatal do M1. A indução da periodontite foi mantida por 14 dias, promovendo o acúmulo de biofilme bacteriano e inflamação. Para validar o modelo animal, a IL-1β, um mediador inflamatório chave, foi determinada por imunoensaio no fluido crevicular gengival (GCF), e a perda óssea alveolar foi calculada por meio da tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC). Esta técnica mostrou-se eficaz em promover recessão gengival, perda óssea alveolar e aumento dos níveis de IL-1β no GCF ao final do procedimento experimental após 14 dias. Esse método mostrou-se eficaz na indução da DP, podendo ser utilizado em estudos sobre mecanismos de progressão da doença e futuros possíveis tratamentos.
Introdução
A periodontite (DP) é a sexta condição de saúde pública mais prevalente no mundo, afetando aproximadamente 11% da população total, sendo uma forma avançada, irreversível e destrutiva da doença periodontal 1,2. A DP é um processo inflamatório que afeta os tecidos gengival e periodontal, resultando em recessão gengival, migração apical do epitélio juncional com desenvolvimento de bolsa e perda de osso alveolar3. Além disso, a DP está associada a várias doenças sistêmicas, incluindo doenças cardiovasculares, obesidade, diabetes e artrite reumatoide, para as quais fatores ambientais e espec....
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Protocolo
OBS: O protocolo experimental do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal do Instituto de Pesquisa em Saúde das Ilhas Baleares (CEEA-UIB; número de referência 163/03/21).
1. Anestesia animal e preparo do procedimento
- Esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos (mordaças bucais de alumínio, explorador dentário, lança de diamante, tesoura cirúrgica, alicate microcirúrgico, um suporte de microagulha, um entalhador hollenback, um elevador microcirúrgico periosteal e uma tesoura microcirúrgica) (5 min a 135 °C) antes da cirurgia.
- Preparar todas as soluções necessárias para o procedim....
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Resultados
Uma linha do tempo das etapas experimentais é apresentada na Figura 1. A Figura 2A mostra uma imagem da mandíbula após a intervenção cirúrgica, com colocação de ligadura ao redor do sulco de M1 no tempo 0 do experimento. A Figura 2B mostra como, após 14 dias do procedimento, a ligadura ao redor do M1 entra no sulco gengival, causando inflamação da gengiva e acúmulo infiltrativo.
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Discussão
Este método descreve a indução de DP em ratos após uma técnica combinada de injeções de Pg-LPS e colocação de ligadura ao redor do M1, revelando que alterações significativas nos tecidos periodontais e no osso alveolar poderiam ser induzidas em 14 dias após esse método.
Durante este procedimento, deve-se prestar atenção às diferentes etapas críticas. Durante a anestesia do animal e o preparo do procedimento, avaliar a anestesia adequada durante o processo cirúrgico é fundamental para .......
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Divulgações
Os autores declaram a inexistência de conflitos de interesse.
Agradecimentos
Este trabalho contou com o apoio da Fundació Universitat-Empresa de les Illes Balears (Prova de conceito 2020), do Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Economía y Competividad, cofinanciado pelo FSE Fundo Social Europeu e pelo Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional do FEDER (contrato com M.M.B; FI18/00104) e pela Direcció General d'Investigació, Conselleria d'Investigació, Govern Balear (contrato com a M.M.F.C; FPI/040/2020). Os autores agradecem à Dra. Anna Tomás e Maria Tortosa pela ajuda na cirurgia experimental e plataforma do IdISBa. Finalmente, obrigado à Faculdade de Odontologia da ADEMA pelo acesso ao scanner CBCT.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Ponto de papel adsorvente nº 30 | Proclinc | 8187 | |
| Aprotinin | Sigma-Aldrich | A1153 | |
| Atipamezole | Dechra | 573751.5 | Revanzol 5 mg/mL |
| Ligadura de seda trançada (5/0) | Laboratorio Arago Sl | 613112 | |
| Buprenorfina | Scanner de | 578816.6 | Bupaq 0.3 mg/mL |
| MyRay | hyperion X9 | Modelo Hyperion X9 | |
| CTAm software | SkyScan | Versão 1.13.4.0 | |
| Explorador dental | Proclinc | 99743 | |
| Broca em forma de lança de diamante | Dentaltix | IT21517 | |
| Dieta de manutenção de alimentos | Sodispain research | ROD14 | |
| Plataforma cirúrgica aquecida | PetSavers | ||
| Hollenback carver | Hu-FRIEDY | ||
| Agulha hipodérmica | BD | 300600 | 25G X 5/8" - 0,5 X 16 MM |
| Isoflurano | Karizoo | Isoflutek 1000mg/g | |
| Cetamina | Dechra | 581140.6 | Anesketin 100 mg/mL |
| Lipopolissacarídeo derivado de P.Gingivalis | InvivoGen | TLRL-PGLPS | |
| Metanol | Fisher Scientific | M/4000/PB08 | |
| Micro agulha holter | Fehling Instrumentos Cirúrgicos | KOT-6 | |
| Alicate microcirúrgico | KLS Martin | 12-384-06-07 | |
| tesoura microcirúrgica | S& T instrumentos microcirúrgicos | SDC-15 RV | |
| Monitor iMEC 8 Vet | Mindray | ||
| Imunoensaio multiplex | Procartaplex, Thermo fisher Scientific | PPX-05 | |
| Paraformaldeído (PFA) | Sigma-Aldrich | ||
| Dentaltix | CU19112468 | ||
| fenilmetilsulfonilfluoreto (PMSF) | Solução | Roche 10837091001 | |
| (PBS) | Capricorn Scientific | PBS-1A | |
| PhosSTOP | Comprimido Roche | 4906845001 | Commercial para inibidor de fosfatase |
| Frasco de plástico | SPL Lifesciencies | 60015 | 1.5mL |
| Saline | Cinfa | 204024.3 | |
| Microscópio Estéreo | Lupas cirúrgicas Zeiss | Model SteREO Discovery.V12 | |
| com luz led | Tesoura cirúrgica Zeiss | ||
| Seringa Zepf Surgical | 08-1701-17 | ||
| BD plastipak | 303172 | 1mL | |
| Micromotor odontológico veterinário | Eickemeyer | 174028 | |
| Xylazine | Calier | 20102-003 | Xilagesic 20 mg/mL |
Referências
- Carvalho, J. D. S., et al. Impact of citrus flavonoid supplementation on inflammation in lipopolysaccharide-induced periodontal disease in mice. Food and Function. 12 (11), 5007-5017 (2021).
- Nazir, M. A.
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Reimpressões e permissões
