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Artigo de método

Medindo Cepas de Tecido Local em Tendões via Correlação de Imagem Digital de Código Aberto

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DOI:

10.3791/64921

27 de janeiro de 2023

Neste artigo

Resumo

Este artigo descreve um algoritmo de correlação de imagem digital de código aberto para medir cepas de tecido 2D locais dentro de explantes de tendões. A precisão da técnica foi validada usando várias técnicas e está disponível para uso público.

Resumo

Há um interesse científico considerável em entender as cepas que as células tendinosas experimentam in situ e como essas cepas influenciam a remodelação tecidual. Com base nesse interesse, várias técnicas analíticas foram desenvolvidas para medir cepas teciduais locais dentro de explantes tendinosos durante a carga. No entanto, em vários casos, a precisão e a sensibilidade dessas técnicas não foram relatadas, e nenhum dos algoritmos está disponível publicamente. Isso dificultou a medição mais difundida de cepas teciduais locais em explantes tendinos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi criar uma ferramenta de análise validada para medir cepas teciduais locais em explantes tendinosos que esteja prontamente disponível e seja fácil de usar. Especificamente, um algoritmo de correlação de imagem digital de Lagrangian aumentada (ALDIC) disponível publicamente foi adaptado para medir cepas 2D, rastreando os deslocamentos dos núcleos celulares dentro dos tendões de Aquiles de camundongos sob tensão uniaxial. Além disso, a acurácia das deformações calculadas foi validada pela análise de imagens transformadas digitalmente, bem como pela comparação das deformações com valores determinados a partir de uma técnica independente (ou seja, linhas fotobranqueadas). Finalmente, uma técnica foi incorporada ao algoritmo para reconstruir a imagem de referência usando o campo de deslocamento calculado, que pode ser usado para avaliar a precisão do algoritmo na ausência de valores de deformação conhecidos ou uma técnica de medição secundária. O algoritmo é capaz de medir deformações de até 0,1 com uma precisão de 0,00015. A técnica de comparação de uma imagem de referência reconstruída com a imagem de referência real identificou com sucesso amostras que apresentavam dados errôneos e indicou que, em amostras com bons dados, aproximadamente 85% do campo de deslocamento era preciso. Finalmente, as cepas medidas nos tendões de Aquiles de camundongos foram consistentes com a literatura anterior. Portanto, este algoritmo é uma ferramenta altamente útil e adaptável para medir com precisão as cepas de tecido locais nos tendões.

Introdução

Os tendões são tecidos mecanossensíveis que se adaptam e degeneram em resposta à carga mecânica 1,2,3,4. Devido ao papel que os estímulos mecânicos desempenham na biologia celular do tendão, há um grande interesse em entender as cepas que as células tendinosas experimentam no ambiente do tecido nativo durante a carga. Várias técnicas experimentais e analíticas foram desenvolvidas para medir cepas teciduais locais em tendões. Estes incluem análises de correlação digital de imagem (CIVD) 2D/3D de deformações superficiais usando padrões de manc....

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Protocolo

Este estudo foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Estadual da Pensilvânia.

1. Preparação de tecidos

  1. Para este protocolo, colher os tendões de Aquiles de camundongos machos C57BL/6 de 2-4 meses de idade.
    NOTA: Diferentes tendões ou ligamentos de camundongos ou outros pequenos animais também podem ser usados.
    1. Faça uma incisão na pele superficial ao tendão de Aquiles para expor o tendão plantar e o tecido conjuntivo circundante. Em seguida, remova-os usando uma lâmina cirúrgica.
    2. Separe os músculos sóleo e gastrocnêmio expostos do membro posterior e ra....

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Resultados

Antes de analisar os campos de deformação em amostras de tecido reais, o protocolo ALDIC foi validado pela primeira vez usando imagens digitalmente tensas / transformadas de núcleos dentro dos tendões de Aquiles de camundongos. Especificamente, as imagens foram transformadas para produzir digitalmente cepas uniformes na direção x de 2%, 4%, 6%, 8% e 10% de deformação com uma razão de Poisson simulada de 115,16. A acurácia do algoritmo ALDIC foi então avaliada com.......

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Discussão

O objetivo deste trabalho foi fornecer um método validado de código aberto para medir os campos de deformação 2D em tendões sob carga de tração. A fundação do software foi baseada em um algoritmo ALDIC disponível publicamente12. Esse algoritmo foi incorporado em um código MATLAB maior com a funcionalidade adicional de análise de deformação incremental (versus cumulativa). Este algoritmo adaptado foi então aplicado ao teste de tração de tendões, e sua precisão foi avaliada por duas técnicas diferen.......

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Divulgações

Todos os autores não têm conflitos de interesse para divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho foi financiado pelos Institutos Nacionais de Saúde (R21 AR079095) e pela National Science Foundation (2142627).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
5-DTAF (5- (4,6-Diclorotriazinil) Aminofluoresceína), isômero únicoThermoFisherD16
CalipersMitutoyo500-196-30
Microscópio ConfocalNikonA1R HD
Corning LSE VortexMixer Coning6775
DRAQ5 Solução de Sonda Fluorescente (5 mM)ThermoFisher62554
MATLABMathWorksR2022b
Dispositivo de carregamento de traçãoN/AN/ADispositivo de carregamento de tração descrito em Peterson et al, 2020. (ref 13) 
Rotador de revólver de tuboThermoFisher88881001

Referências

  1. Devkota, A. C. Distributing a fixed amount of cyclic loading to tendon explants over longer periods induces greater cellular and mechanical responses. Journal of Orthopaedic Research. 11 (4), 1609-1612 (2007).
  2. Sun, H. B., et al.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Medição de Deformação TecidualExplantes de TendãoTendão de AquilesAlgoritmo Lagrangiano AumentadoRastreamento NuclearMicroscopia ConfocalLinhas FotodesbotadasCarregamento de Tração