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Na última década, tem havido intensa pesquisa sobre o papel das vesículas extracelulares (EV) como biomarcadores diagnósticos e prognósticos, alvos terapêuticos, como vetores de liberação de fármacos ou mesmo como candidatos à medicina reparadora ou regenerativa em uma infinidade de doenças. Os EV são um composto de partículas heterogêneas envoltas em bicamadas fosfolipídicas com diâmetro entre 30 e 5000nm, ou seja, exossomos, microvesículas e corpos apoptóticos, que conformam um aglomerado singular de mediadores da comunicação célula a célula, graças ao seu empacotamento seletivo de moléculas bioativas (como lipídios, proteínas, RNA e metabólitos). Como quase todas as células (procarióticas e eucarióticas) liberam EV, elas podem estar envolvidas na fisiopatologia de praticamente todas as doenças. De fato, a carga molecular de EV liberada após um estímulo específico, determina seu mecanismo de ação e reflete o estado de sua célula parental.
Apesar de todos os esforços científicos e avanços técnicos, a pesquisa sobre as propriedades, estrutura, composição, atividade fisiopatológica e metabolismo/depuração do EV ainda é tecnicamente desafiada pela metodologia de extração e purificação do EV. Neste contexto, esta coleção de métodos visa relatar métodos de isolamento e purificação de EV, para futuras aplicações a jusante.
Nesta edição, El Itawi e colegas1, descrevem o isolamento de EV derivado de esplenócitos em um modelo murino de infecção por Porphyromonas gingivalis. Os autores isolam o EV por centrifugação diferencial de uma suspensão de esplenócitos e, em seguida, colhem o EV para estudar seus efeitos in vivo . No entanto, os autores afirmam que seu método deve ser adaptado para células aderentes.
Jones e co-autores2, isolam EV originado por oligodendrócitos cultivados combinando cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) e ultrafiltração de 3-KDa, garantindo assim uma pureza EV adequada com contaminação mínima de proteínas em seus extratos. Este método semiautomatizado pode ser usado para praticamente todas as aplicações a jusante, como ensaios funcionais, caracterização molecular de EV ou imagens EV.
A SEC também é proposta por Ryan et al. 3, isolar EV de Mycobacterium tuberculosis, a fim de entender a fisiologia bacteriana, a interação com o hospedeiro e a carga molecular de EV. Neste manuscrito metodológico, os autores comparam o desempenho da ultracentrifugação com gradiente de densidade e SEC e concluem que a recuperação e a pureza do EV são melhoradas ao realizar o SEC. Os autores também sugerem que a metodologia descrita pode ser aplicada a outros EV derivados de micobactérias.
Valle-Tamayo et al. 4, descrever um método fácil de duas etapas para obter EV derivado de astrócitos por precipitação e imunocaptura à base de polímero com anticorpo antígeno-1 de superfície celular de astrócitos (ACSA-1) conjugado a microesferas magnéticas. Os autores sugerem que a imunocaptura pode ser combinada com SEC em vez de precipitação polimérica, e que microesferas magnéticas podem ser conjugadas a outros anticorpos para isolar EV de outros tipos de células. A lembrança desses EV do plasma humano ou de outros biofluidos pode ser de alto valor no campo de doenças neurológicas ou distúrbios relacionados.
No último manuscrito da edição, Koh e colegas5 propõem um método de ultrafiltração para isolar pequenas EV (sEV) de células-tronco mesenquimais humanas cultivadas. Os autores afirmam que os extratos EV isolados por ultrafiltração podem ser usados para aplicações terapêuticas e outras análises a jusante. Embora este seja um método simples e rápido que pode ser aplicado a outros biofluidos e diferentes tipos de células de origem, os autores reconhecem que pode não ser adequado em larga escala para aplicações industriais.
No geral, esta edição especial fornece diferentes métodos laboratoriais relativamente simples e fáceis para isolar EV de diferentes tamanhos e de uma variedade de espécimes, como bactérias, órgãos de animais e células humanas. O rendimento e a pureza da extração diferem entre os métodos e devem ser considerados para selecionar o método mais econômico e de tempo de acordo com o uso final do EV isolado.
Por fim, gostaria de terminar agradecendo a todos os autores e revisores por suas contribuições e à equipe editorial da revista Visualized Experiments por sua inestimável ajuda nesse processo. Espero sinceramente que esta edição especial seja útil para os investigadores de EV em suas pesquisas futuras.