A biologia molecular sustenta muitas das principais tecnologias que impulsionaram os avanços científicos feitos nos últimos 40 anos de pesquisa genética. Os mosquitos e os patógenos que eles transmitem têm sido estudados em detalhes há mais de 100 anos, mais tipicamente através das lentes da ecologia, imunologia, vacinologia e biologia de vetores. A biologia molecular continua sendo uma disciplina subutilizada no que diz respeito a informar e desenvolver abordagens novas e específicas para prevenir a propagação de doenças transmitidas por mosquitos. Esta coleção de métodos, intitulada "Biologia molecular no intestino médio e nas glândulas salivares do mosquito", destaca os principais métodos aplicados aos problemas de biologia do vetor do mosquito que abrangem muitas facetas da biologia molecular e vários pontos de tempo de desenvolvimento. O crescimento dos esforços de pesquisa na pesquisa de biologia molecular de mosquitos é essencial e deve facilitar o progresso em direção à conclusão de tarefas complexas, como avaliação da plasticidade do genoma, aplicações de gene drive, análise multiômica e investigação de todo o genoma da função gênica dentro de contextos in vivo e específicos do tecido. À medida que os esforços de biologia molecular em mosquitos se expandem, a relevância médica dos interesses de pesquisa de mosquitos para pacientes com doenças transmitidas por mosquitos aumentará devido aos avanços translacionais resultantes da aquisição de informações adicionais de pesquisa básica específicas do contexto.
Chiu et al. fornecem uma explicação clara e detalhada de como dissecar e conduzir imunocoloração em glândulas salivares (SGs) de larvas de mosquitos1. Historicamente, os SGs têm sido considerados um tecido difícil de dissecar em massa, limitando assim o escopo da análise. Após vários refinamentos em estudos de SG de mosquitos adultos 2,3,4, este grupo de pesquisa desenvolveu um meio poderoso de visualizar o precursor larval do tecido adulto1 e confirmou ainda que o método pode ser aplicado em várias espécies de Anopheles. Os usos futuros dessa técnica incluem a avaliação de estratégias moleculares, genéticas e medicamentosas destinadas a desativar o desenvolvimento ou a função do SG do mosquito.
Kojin et al. fornecem um método sucinto para detecção de indel por análise de derretimento de alta resolução após a edição gênica de mosquitos Aedes aegypti 5. É importante ressaltar que o ensaio não requer o sacrifício do mosquito5. Isso facilita a ampla aplicação da técnica à geração de qualquer cepa de mosquito mutante, pois os mesmos indivíduos permanecem disponíveis para cruzamentos genéticos subsequentes e/ou ensaios fenotípicos.
Kumpitak et al. 2021 oferecem uma estratégia inteligente para a detecção de esporozoítos de Plasmodium em mosquitos Anopheles usando um ELISA6. Este método tem vantagens distintas quando comparado à microscopia e pode ser aplicado amplamente em todos os subtipos de parasitas. Este método tem sido usado para estudar a dinamicidade da infecção por mosquitos ao longo das estações e entre as espécies de vetores da malária.
Taracena et al. documentam avanços altamente impactantes na alimentação de bactérias produtoras de dsRNA para mosquitos Anopheles para um robusto knockdown de genes, mesmo em um tecido com baixos níveis de atividade endógena de RNAi - as glândulas salivares7. Essa técnica foi consistentemente eficaz em todos os genes-alvo candidatos testados, os resultados foram válidos em várias leituras de ensaio e o método exigiu pouca experiência e esforço mínimo. Com este poderoso método agora disponível, uma série de pesquisadores deve estar totalmente equipada para iniciar estudos de genética reversa da função do gene do mosquito.
Erlank et al. descrevem cuidadosamente a aplicação de um ensaio padrão de alimentação por membrana a mosquitos Anopheles para a detecção e triagem de oocistos do intestino médio de Plasmodium falciparum após tratamento com moléculas pequenas e coloração com mercurocromo8. Em seu estudo, muita atenção é dada às considerações necessárias para o sucesso, às limitações de uma baixa taxa de alimentação, bem como à ampla aplicabilidade desse ensaio8.
Esta coleção de métodos mostra as muitas oportunidades disponíveis para aplicar abordagens de biologia molecular de maneiras de ponta e medicamente relevantes para apoiar o desenvolvimento da próxima geração de medidas de controle de vetores. Os artigos são mais relevantes para pesquisadores iniciantes e aqueles que ingressaram recentemente no campo da biologia vetorial de outras áreas. A autora espera é que esses artigos facilitem o planejamento de novos experimentos e abordagens voltados para uma melhor compreensão da biologia vetorial e prevenção da transmissão de doenças transmitidas por mosquitos. Há um grande potencial para a expansão das abordagens de biologia molecular de mosquitos e seus usos, portanto, esta coleção também pode servir como um farol para chamar a atenção e o interesse do campo para essa área. Com artigos discutindo tópicos como a validação da edição de genes de mosquitos e abordagens eficazes para RNAi, esses estudos permanecerão altamente relevantes no futuro.