Summary
Este protocolo descreve a coleta, sutura e monitorização de retalhos fasciocutâneos em ratos que permitem boa visualização e manipulação do fluxo sanguíneo através dos vasos epigástricos superficiais inferiores por meio de pinçamento e ligadura dos vasos femorais. Isso é fundamental para estudos envolvendo pré-condicionamento isquêmico.
Abstract
Os retalhos fasciocutâneos (FCF) tornaram-se o padrão-ouro para reconstrução de defeitos complexos em cirurgia plástica e reconstrutiva. Esta técnica poupadora de músculo permite transferir tecidos vascularizados para cobrir qualquer grande defeito. FCF pode ser usado como retalhos pediculados ou como retalhos livres; no entanto, na literatura, as taxas de falha para FCF pediculado e FCF livre são superiores a 5%, deixando espaço para aprimoramento dessas técnicas e maior expansão do conhecimento nessa área. O pré-condicionamento isquêmico (PI) tem sido amplamente estudado, mas os mecanismos e a otimização do regime de PI ainda precisam ser determinados. Esse fenômeno é, de fato, pouco explorado na cirurgia plástica e reconstrutiva. Neste estudo, é apresentado um modelo cirúrgico para estudar o regime de PI em um modelo de retalho fáscio-cutâneo axial de ratos, descrevendo como avaliar de forma segura e confiável os efeitos da PI na sobrevida do retalho. Este artigo descreve o procedimento cirúrgico completo, incluindo sugestões para melhorar a confiabilidade desse modelo. O objetivo é fornecer aos pesquisadores um modelo reprodutível e confiável para testar vários regimes de pré-condicionamento isquêmico e avaliar seus efeitos na sobrevida do retalho.
Introduction
A cirurgia plástica e reconstrutiva está em constante evolução. O desenvolvimento dos retalhos muscular, fasciocutâneo e perfurante tem possibilitado reconstruções de melhor qualidade e redução da morbidade. Combinando esse conhecimento anatômico aprimorado com habilidades técnicas aprimoradas, os cirurgiões reconstrutivos podem realizar transferências de retalhos livres quando os defeitos não estão próximos de nenhuma solução local. Entretanto, embora a cirurgia de retalho perfurante seja atualmente a técnica mais avançada em cirurgia reconstrutiva, a literatura relata uma taxa de falha de 5% nas transferências de retalhos livres 1,2,3 e de até 20% para a reconstrução de retalho pediculado 4,5,6. A falha parcial a total do retalho ocorre quando o pedículo do retalho está comprometido, portanto, é essencial a busca contínua de melhorias nas técnicas atuais. Um dos métodos para melhorar a sobrevida do retalho é promover sua neovascularização no leito da ferida, permitindo a perfusão por outra fonte que não o pedículo. O pré-condicionamento isquêmico (PI) foi inicialmente descrito emum modelo cardíaco7, demonstrando que um órgão exposto à isquemia controlada sobrevive em maior grau após perder seu suprimento sanguíneo primário por ser submetido à neovascularização induzida por isquemia. Vários autores têm estudado esse princípio fundamental para otimizar a sobrevida do retalho em modelos pré-clínicos e clínicos 8,9,10.
A vantagem desta técnica sobre outros métodos para melhorar a sobrevida do retalho é a sua facilidade de execução, consistindo em testes de pinça/declamp da fonte sanguínea. No modelo de ratos, autores anteriores utilizaram o retalho da artéria epigástrica superficial inferior (SIEA) para estudar a I.P. por meio do pinçamento do pedículo principal11,12,13. No entanto, vários problemas técnicos podem ser encontrados com esse modelo, e a literatura carece de protocolos bem descritos.
Portanto, este trabalho tem como objetivo fornecer aos pesquisadores uma descrição detalhada de uma técnica de captação de retalhos SIEA de ratos com dissecção ampliada dos vasos femorais para permitir estudos intravenosos em um modelo de retalho fáscio-cutâneo axial. Esse modelo mantém a integridade dos vasos epigástricos e manipula os vasos femorais, que são mais resistentes. Compartilhamos nossa experiência e ferramentas para aprimorar o estudo desse fenômeno e aumentar a replicabilidade desse procedimento.
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Protocol
O Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Hospital Geral de Massachusetts aprovou o protocolo experimental (IACUC- protocolo #2022N000099). Os autores seguiram a lista de verificação de diretrizes ARRIVE (Animal Research: Reporting In Vivo Experiments) para este trabalho. Todos os animais receberam cuidados humanizados seguindo o Guia do Instituto Nacional de Saúde para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. Um total de 12 ratos Lewis machos (250-350 g, 8-10 semanas de idade) foram usados para todos os experimentos.
1. Preparo dos animais
NOTA: Os ratos têm uma alta taxa metabólica e reservas de gordura limitadas; Portanto, não os faça jejum antes da cirurgia e nunca restrinja água antes da cirurgia.
- Para todos os procedimentos, sedar o animal usando isoflurano a 3%-5% na câmara do vaporizador de precisão de isoflurano (ver Tabela de Materiais). Quando o animal estiver bem sedado, reduza a dose de isoflurano para 1%-3% através de um cone nasal.
NOTA: Um segundo pesquisador deve monitorar continuamente a frequência respiratória e adaptar a dose de isoflurano. - Aos 2 dias antes da cirurgia inicial, colocar um colar eletrônico de plástico (tamanho para um rato; ver Tabela de Materiais) no animal e usar uma sutura de náilon 3-0 para fixar o colar eletrônico nas laterais dorsal e ventral do pescoço do animal. Aguarde 2 dias para aclimatação a este e-collar; Deve caber confortavelmente, mas não obstruir as vias aéreas do animal.
2. Cuidados pré-operatórios
- No dia da cirurgia inicial, raspar a face anterior inferior do abdome, limpando a área da parte lateral do animal para passar ligeiramente além da linha média.
- Em seguida, use um produto depilatório (creme depilatório; ver Tabela de Materiais) para remover todos os pelos restantes nesta área (a face anterior inferior do abdômen, conforme descrito na etapa anterior).
- Lave e seque bem a área com esfoliação cirúrgica e solução de betadina (iodopovidona a 10%).
- Administrar 0,05 mg/kg de buprenorfina por via subcutânea.
3. Monitorização intraoperatória
- Certifique-se de que o animal permaneça com isoflurano a 1%-3% através de um vaporizador de precisão e cone nasal durante toda a cirurgia. Monitore a frequência respiratória, a respiração e o nível de saturação de oxigênio do animal por observação visual e um oxímetro de pulso de roedor feito para um rato.
OBS: A frequência respiratória típica é de 80-90 ciclos por minuto14,15. Qualquer reação que indique consciência observada durante a cirurgia requer o aumento da taxa de isoflurano. - Coloque o animal em uma almofada de aquecimento durante toda a cirurgia, pois a temperatura corporal dos roedores esfria rapidamente sob anestesia.
4. Retirada do retalho epigástrico
- Coloque o animal em decúbito dorsal. Faça a barba do abdome abaixo da prega inguinal até acima do nível do processo xifoide.
- Usando uma caneta de pele estéril e régua, marque primeiro a linha média do abdômen do animal e, em seguida, a prega inguinal. Uma incisão ao longo da linha da prega inguinal expõe o ramo inferior dos vasos epigástricos dos vasos femorais.
- Antes da incisão, desenhar o futuro retalho em forma oval ou retangular até 6 cm na vertical e 3 cm na horizontal, estendendo-se cranialmente a partir da prega inguinal.
- Desenhar cinco ou seis marcas equidistantes perpendiculares aos limites do retalho. Estes servem como guias para melhor realinhamento da pele após o retalho ter sido levantado e ser suturado novamente no local (Figura 1).
- Usando tesoura de Ragnell (ver Tabela de Materiais), faça uma incisão longitudinal de 3-4 cm na prega inguinal.
NOTA: Os pesquisadores devem ter cuidado e puxar a pele para cima para evitar danificar os vasos. - Expor e identificar os vasos femorais e epigástricos usando pinças microcirúrgicas #4 joalheiros (ver Tabela de Materiais), abrindo e fechando a pinça para separar a fáscia e ter acesso aos vasos que estão abaixo do coxim gorduroso inguinal.
- Utilizar a incisão inguinal para iniciar a incisão do retalho com tesoura de Ragnell. Preste atenção para minar a espessura total da pele e do tecido conjuntivo sobre o músculo abdominal.
- Para facilitar a colheita do retalho, certifique-se de que a tesoura siga o plano de dissecção correto, empurrando em direção ao músculo e espalhando as lâminas da tesoura. Execute esse descolamento do retalho movendo-se em uma direção coordenada ao redor do desenho do retalho.
NOTA: Para determinar o plano adequado, nenhum microvaso deve permanecer presente abaixo do plano de dissecção.
- Para facilitar a colheita do retalho, certifique-se de que a tesoura siga o plano de dissecção correto, empurrando em direção ao músculo e espalhando as lâminas da tesoura. Execute esse descolamento do retalho movendo-se em uma direção coordenada ao redor do desenho do retalho.
- À medida que a ponta inicial do retalho é liberada da pele circundante, continuar a captação do retalho descolando da parte distal para a proximal, usando as pontas tesoura de Ragnell para separar o retalho do músculo enquanto cauteriza os vasos perfurantes e os vasos do plexo dérmico ao redor do retalho. Isso garante que todo o sangue flua para o retalho através dos vasos epigástricos.
NOTA: Deve-se ter atenção para não danificar a vasculatura do retalho puxando com muita força ou torcendo a pele enquanto o retalho está sendo retirado. Sugere-se colocar a porção livre do retalho cuidadosamente sobre o polegar da mão do cirurgião enquanto se trabalha a parte proximal do retalho. - Uma vez retirado o retalho, os ramos dos vasos epigástricos superficiais inferiores são visíveis na face profunda da pele. Procure encapsular a totalidade de ambos os ramos do SIEA com o retalho, levantando suavemente o retalho para cima para visualizar os vasos.
- Uma vez colhido o retalho, separar os coxins gordurosos da face inferior, tanto na face medial quanto na lateral do retalho. Utilizar o cautério bipolar (ver Tabela de Materiais) para cauterizar os coxins gordurosos próximos à borda da incisão, atentando-se para não lesar o pedículo epigástrico superficial inferior (Figura 2).
Figura 1: Desenho do retalho no abdome do animal. A linha média é utilizada como marcador para localizar a localização do retalho epigástrico. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: Retalho totalmente elevado. O coxim gorduroso é preservado na parte proximal do retalho para preservar a vascularização proveniente do pedículo epigástrico superficial inferior. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
5. Preparo do vaso e indução de isquemia
OBS: O retalho é totalmente colhido nesta fase, mas os vasos ainda não estão preparados para o pré-condicionamento isquêmico.
- Antes da preparação dos vasos femorais, injetar uma dose única de 17,5 UI de heparina sódica através da veia peniana.
NOTA: Esta injeção é feita expondo a glande, segurando o pênis externamente usando pinça de Adson atraumática, identificando a veia peniana e injetando superficialmente e ao longo da veia peniana usando uma seringa 27G. - Para criar uma melhor exposição, coloque o animal dentro de um afastador auto-retentor Lone Star (consulte a Tabela de Materiais).
OBS: As estadas elásticas Lone Star afastam a pele do local cirúrgico, permitindo uma melhor visualização dos vasos. O pesquisador agora deve trabalhar sob microscópio cirúrgico (aumento de 40x). - Para exposição dos vasos, utilizar duas pinças microcirúrgicas #4 para dissecar os vasos femorais proximal e distalmente à emergência dos vasos epigástricos superficiais. Não segure os vasos diretamente, mas use a pinça para separar suavemente o tecido conjuntivo camada por camada, abrindo e fechando a pinça verticalmente para os vasos.
- Nos vasos femorais distais, limpe a fáscia e libere suavemente o nervo da artéria e da veia. Usando um 8-0 sutura com náilon (ver Tabela de Materiais), ligadura dos vasos femorais distais contornando o porta-agulha microcirúrgico sob a artéria e veia, apertando a sutura e amarrando esses vasos (Figura 3). O nervo não deve ser lesado nem amarrado para minimizar a morbidade pós-operatória.
NOTA: Os cirurgiões podem usar uma das pinças para puxar suavemente a fáscia lateral ao nervo com uma mão e usar outro par para separar totalmente o nervo dos vasos. - Usando um 8-0 suturar, ligadura dos vasos distais logo após a emergência dos vasos epigástricos, deixando uma distância de 1 mm após a origem do pedículo. Isso garante que nenhum fluxo reverso venha através do SIEA dos ramos profundos durante as fases isquêmicas.
OBS: A Figura 3 mostra a ligadura dos vasos femorais distais após a emergência do pedículo da SIEA. - Nos vasos femorais proximais, repetir o mesmo processo de limpeza do tecido conjuntivo. No entanto, separe a artéria e a veia uma da outra para permitir um pinçamento eficiente. Isso pode ser conseguido colocando-se suavemente pinças fechadas entre a artéria e a veia e abrindo lentamente as pinças na direção de corrida dos vasos.
- Para induzir isquemia intermitente, colocar pinças microcirúrgicas separadamente em cada artéria e veia femoral proximal (Figura 4).
- Ao término das lesões isquêmicas, sutura do retalho à sua posição original, alinhando-se as marcações conforme traçado no pré-operatório (passo 4.2.2). Sutura do retalho com fio de náilon 3-0 (ver Tabela de Materiais), iniciando-se na prega inguinal medialmente, ao redor do retalho, e terminando na prega inguinal lateralmente.
OBS: Ao longo da prega inguinal, pode-se utilizar a mesma sutura para colocação de pontos interrompidos. Isso permite que os pesquisadores abram essa área sem afetar o fechamento do retalho. - Para verificar o suprimento sanguíneo para o retalho, injetar 0,25 mL de fluoresceína sódica estéril (10%, ver Tabela de Materiais) na veia peniana usando a mesma técnica e ferramentas descritas para a injeção de solução salina de heparina (passo 5.1). Após 3 min, ilumine uma lâmpada UV-366 nm de onda longa (luz de excitação fluoresceína) para revelar as áreas fluorescentes correspondentes às áreas perfundidas.
- Após o fechamento e verificação, espalhe metronidazol triturado (ver Tabela de Materiais) ao longo das suturas para evitar automutilação e borrife atadura líquida na mesma área.
- Antes da recuperação do animal da anestesia, administrar Carprofeno (2-5 mg/kg) por via subcutânea.
- Os pesquisadores agora podem acessar os vasos femorais, a única fonte de alimentação para o retalho, para testar regimes experimentais de pré-condicionamento isquêmico por vários dias seguidos. Em cada dia de cirurgia, fornecer uma dose de 2-5 mg/kg de Carprofeno por via subcutânea.
- Ao final do período de pré-condicionamento isquêmico, para retirar o retalho do suprimento sanguíneo epigástrico, cauterizar inferior ao coxim gorduroso ao longo da borda inferior do retalho.
Figura 3: Visão microscópica dos vasos femorais. Os vasos femorais distais estão amarrados. O nervo foi preservado. O lado da dissecção é a prega inguinal direita (R). Ampliação: 40x. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: Pinçamento dos vasos femorais proximais com duas pinças microcirúrgicas separadas. Isso permite um melhor controle do clampeamento, garantindo a ausência de fluxo arterial e venoso retrógrado. (A) mostra ambos os vasos femorais esquerdos (L) pinçados. Os vasos epigástricos superficiais inferiores são visíveis (SIEA/SIEV). (B) mostra artéria femoral pinçada e veia femoral antes do pinçamento, na prega inguinal direita do animal (R). Ampliação: 40x. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
6. Cuidados pós-operatórios
- Administrar Carprofeno (2-5 mg/kg) por via subcutânea uma vez ao dia por 4 dias de pós-operatório e uma vez após qualquer sedação suplementar.
- Durante as primeiras 24 h, observe o animal duas vezes. Em seguida, avaliar o animal e o retalho pelo menos uma vez ao dia até o final do estudo.
NOTA: O animal deve estar brilhante, alerta e reativo. Se houver sinais de infecções oportunistas sistêmicas (isto é, letargia ou perda de peso), o animal deve ser sacrificado seguindo protocolos aprovados pela instituição. - Monitorar o retalho quanto à necrose precoce (antes da ligadura no 5º dia de pós-operatório [DPO5]), deiscência do sítio cirúrgico, infecção, hematoma, isquemia e/ou autofagia do retalho.
- Se houver deiscência do sítio cirúrgico, desbridar as margens da cicatriz, limpar o local com iodopovidona a 10% antes de enxaguar abundantemente com água estéril ou soro fisiológico estéril e fechar a ferida com pontos de náilon 3-0 interrompidos.
- Ao final do estudo, sacrificar o animal com uma injeção IV de 0,1-0,2 mL de solução de fenobarbital sódico a 31% ou com o protocolo recomendado pela IACUC local. Confirmar a morte pela ausência de batimentos cardíacos e movimentos respiratórios.
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Representative Results
Todos os retalhos foram viáveis no POD5, mostrando boa vascularização pelo SIEA isoladamente. A Figura 5 mostra o retalho antes e após a injeção IV de fluoresceína, mostrando vascularização completa.
Figura 5: Angiofluoresceinografia intravenosa imediata (DPO0). Essa avaliação mostra a vascularização do retalho apenas pelo SIEA. A fluorescência verde mostra tecido bem perfundido, incluindo toda a pá do retalho. Ampliação: 40x. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Um software de pixel-análise (ver Tabela de Materiais) foi utilizado para trazer uma avaliação objetiva da sobrevivência do retalho. A fluorescência fluoresceína está localizada no comprimento de onda verde (uma janela de 115 a 255 nm foi usada). Ao selecionar a circunferência do retalho, o software fornece uma porcentagem de pixels incluídos no comprimento de onda específico. Isso permite a medida precisa da sobrevivência do retalho, uma vez que os pixels incluídos nas áreas necróticas não estão dentro da janela de comprimento de onda de fluorescência.
Os resultados de dois modelos de controle são apresentados: um grupo controle negativo para confirmar a viabilidade deste modelo de retalho fáscio-cutâneo axial sem IP e um grupo controle positivo para verificar sua não sobrevivência em caso de ligadura no DPO 5 sem IP prévia com a literaturaatual16. A Figura 6 mostra o planejamento experimental para ambos os modelos de controle.
Figura 6: Linha do tempo dos modelos de grupo de controle. Todos os grupos foram submetidos à elevação do retalho no POD0. O grupo controle negativo consistiu na observação do retalho sem intervenção cirúrgica nos vasos do retalho. O grupo controle positivo consistiu de ligadura no POD5 sem pré-condicionamento isquêmico. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Como pode ser observado na Figura 7, o grupo controle negativo apresentou toda a viabilidade da pá do retalho. Nesse grupo, a sobrevida de 99,50% ± 0,76% foi experimentada no POD10, onde não foi realizada ligadura nos vasos alimentadores. Todos os animais permaneceram saudáveis durante esse período de observação.
Figura 7: Angiografia do controle negativo no (A) DPO5 e (B) DPO10. Essa avaliação demonstra sobrevida total do retalho sem intervenção no pedículo. A fluorescência verde mostra tecido bem perfundido, incluindo toda a pá do retalho. Nota: biópsias de controle foram realizadas nesta réplica. Ampliação: 40x. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
O grupo controle positivo foi submetido à mesma cirurgia de retirada inicial do retalho. Posteriormente, no DPO5, os vasos foram cauterizados, cortando diretamente o fluxo sanguíneo para o retalho. Nenhuma IP foi realizada antes da ligadura. Ao longo do DPO5-10, observou-se necrose progressiva do retalho à medida que o retalho tornava-se escuro e endurecido. Como pode ser observado na Figura 8A, a ligadura pós-retalho não mostrou fluorescência após a injeção IV de fluoresceína além da ponta, enquanto a pele ao redor foi perfundida. No POD10, o retalho foi viável em 11,25% ± 1,58% de sua superfície para todas as repetições (Figura 8B), mostrando pobre autonomização de seu pedículo principal no POD5. Curiosamente, a ponta distal foi a única que foi autonomizada e sobreviveu ao POD10.
Figura 8: Angiografia do controle positivo no (A) DPO5 e (B) DPO10 pós-ligadura. A ausência da fluorescência verde imediatamente após a ligadura (A) mostra ausência de perfusão do retalho, comprovando a ausência de neovascularização. Isso é confirmado no POD10 (B), com necrose de 85% do remo da pele (preto/roxo). Curiosamente, a ponta distal é viável e neovascularizada (parte verde fluorescente do retalho). Ampliação: 40x. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Um grupo (n = 3) utilizando ciclos curtos de I.P. também foi testado para demonstrar o valor desse modelo. Os animais foram submetidos a três ciclos de 15 min de isquemia, seguidos de 15 min de reperfusão por pinçamento e despinçamento da artéria e veia dos vasos femorais proximais, acessados pela prega inguinal nas DPO0, 1, 2 e 3, antes da ligadura na DPO516.
Visualmente, os pesquisadores confirmaram a funcionalidade do período de clampeamento observando uma descoloração pálida/azul do retalho e escurecimento do sangue nos vasos epigástricos durante os períodos de isquemia. Além disso, os pesquisadores injetaram fluoresceína no POD5 após a ligadura e observaram sobrevida comparável do retalho com o grupo controle positivo (13,67% ± 5,03% de sobrevida do retalho), mostrando que esse protocolo de PI é ineficiente nesse modelo (Figura 9).
Figura 9: Análise estatística da viabilidade superficial do retalho no DPO10. Os testes U de Mann-Whitney foram realizados para comparar os grupos. Os valores de p bicaudais são mostrados sobre as linhas em zigue-zague U. O grupo controle negativo (n = 4) apresentou 99,5% de sobrevida. O grupo controle positivo (n = 5) apresentou 11,25% de sobrevivência. O grupo experimental, por exemplo, apresentou 13,67% de sobrevivência, apresentando melhora não significativa em relação ao controle positivo (p = 0,86). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Este artigo descreve um modelo de retalho fasciocutâneo reprodutível colhido em ratos, permitindo a avaliação da I.P. Este protocolo cirúrgico passo a passo fornece aos grupos de pesquisa um modelo confiável para testar diferentes regimes de IP. Ao impedir qualquer vascularização que não seja o pedículo, esse modelo permite estudar a neovascularização do retalho a partir do leito e margem da ferida. Este estudo realizou a ligadura no DPO5, pois estudos prévios observaram a autonomização deste retalho em ratos no DPO5-711,13,16. Esse modelo visa auxiliar em estudos de lesão de isquemia-reperfusão (IRI) que otimizem e encurtam o intervalo necessário para a autonomização completa. Assim, para ver os resultados mais significativos com o pré-condicionamento isquêmico, nosso objetivo foi a ligadura dos vasos nutridores após a autonomização, mas antes da neovascularização completa do retalho (descrita no DPO716).
O sucesso do modelo está em garantir que não ocorram danos aos vasos femorais ou SIE durante a obtenção do retalho cutâneo, o que exigiria que o cirurgião mantivesse a visualização dos vasos durante todo o procedimento do retalho. Além disso, os vasos femorais distais devem ser adequadamente ligados para induzir isquemia com precisão através dos vasos proximais, sem refluxo proveniente de outros vasos. Essas etapas são fundamentais para observar os resultados experimentais.
O benefício desse modelo é que ele preserva a integridade dos vasos epigástricos manipulando os vasos femorais, após cuidadoso preparo do vaso, garantindo que os vasos femorais proximais sejam a única fonte de sangue para o pedículo da SIEA. A vantagem é que o tamanho dos vasos femorais pinçados permite uma boa recuperação de sua luz. Em contraste, uma pinça microcirúrgica venosa pode lesar permanentemente os vasos epigástricos, exigindo o término do experimento. Além disso, a dissecção do vaso femoral na prega inguinal é mais acessível do que no coxim gorduroso epigástrico após a cirurgia inicial devido à fibrose pós-operatória. Esse modelo permite acesso mais seguro para cirurgias repetidas que envolvem pinçamento de vasos; Hsu et al.17 descreveram modelo semelhante para um estudo de IRI, mas não descreveram o procedimento.
Outra inovação desse modelo são as injeções IV de fluoresceína para confirmar a vascularização e viabilidade do retalho. Outros autores descreveram injeções IV de verde de indocianina (GCI) em retalho de ratomodelo 18,19, semelhante ao seu uso em clínicas20,21. No entanto, o custo do ICG e do hardware específico necessário é uma limitação e não parece ser uma técnica eficiente22. Descrevemos uma técnica simples que pode ser utilizada em qualquer laboratório com uma lâmpada de madeira simples, permitindo boa visualização da viabilidade e vascularização do retalho.
Uma limitação desse modelo é a impossibilidade de avaliar adequadamente dois retalhos no mesmo animal. Não é possível avaliar simultaneamente um retalho tratado e um controle biológico, devido aos potenciais efeitos da PI remota provocada pelo pinçamento do pedículo do retalho contralateral23.
As aplicações clínicas da I.P. podem melhorar a sobrevida do retalho fasciocutâneo ao fornecer protocolos confiáveis de sequências de pinça/despinçamento na mesa por cirurgiões plásticos. Alguns autores descreveram o uso do PI para permitir a divisão mais precoce do pedículo nos retalhos de testa e virilha24,25. No entanto, os protocolos de IP devem ser otimizados para fornecer aos cirurgiões uma ferramenta confiável para permitir seu uso mais comumente. Tanto a I.P., possibilitada localmente com o modelo que descrevemos, quanto a IP remota mostram resultados promissores na melhora da sobrevivência do retalho fasciocutâneo26. Finalmente, esse modelo é adequado para estudar as lesões de isquemia-reperfusão e a resposta sistêmica a esses tipos de estresse, área de interesse depesquisa23.
Em conclusão, esta descrição precisa de um modelo confiável e reprodutível oferece uma ferramenta valiosa para estudos de IP e lesão de isquemia-reperfusão em um modelo de retalho fáscio-cutâneo de ratos, fornecendo aos pesquisadores vasos maiores para manipulação e acesso em comparação com modelos anteriores.
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Disclosures
Todos os autores não têm interesse financeiro em declarar.
Acknowledgments
Este trabalho foi financiado pelo Massachusetts General Hospital (W.G.A) e Shriners Children's Boston (B.U, K.U, C.L.C). Y.B e I.F.v.R são financiados pelo Shriners Hospitals for Children (ID da proposta: #970280 e #857829 respectivamente).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 mL Syringe Luer-Lok Tip | BD | 309628 | |
| 3-0 Ethilon 18” Black Monofilament Nylon suture | Ethicon | ETH-663H | |
| 8-0 Ethilon 12” Black Monofilament Nylon suture | Ethicon | 1716G | |
| Adson Atraumatic Forceps | Aesculap Surgical Instruments | BD51R | |
| Akorn Fluorescein Injection USP 10% Single Dose Vial 5 mL | Akorn | 17478025310 | |
| Betadine Solution 5% Povidone-Iodine Antiseptic Microbicide | PBS Animal Health | 11205 | |
| Bipolar Cords | ASSI | ASSI.ATK26426 | |
| Buprenorphine Hydrochloride Injection | PAR Pharmaceutical | 3003406C | This concentration needs to be diluted for rodents. |
| Depilatory product – Nair Hair remover lotion | Nair | NC0132811 | |
| Ear tag applier | World Precision Instruments | NC0038715 | |
| Gauze Sponges | Curity | 6939 | |
| Isoflurane Auto-Flow Anesthesia Machine | E-Z Systems | EZ-190F | |
| Isoflurane, USP | Patterson Veterinary | 1403-704-06 | |
| Jewelers Bipolar Forceps Non-Stick 11 cm, straight pointed tip, 0.25 mm tip diameter | ASSI | ASSI.BPNS11223 | |
| Lone Star elastic stays | Cooper Surgical | 3311-1G | |
| Lone star Self-retaining retractor | Cooper Surgical | 3304G | |
| Metronidazole tablets USP | Teva | 500111-333-06 | |
| Micro spring handle scissors | AROSurgical | 11.603.14 | |
| Microscope (surgical) | Leica | M525 F40 | |
| Microsurgical clamp applying forceps | Ambler Surgical | 31-906 | |
| Microsurgical clamps (x2) | Millennium Surgical | 18-B1V | |
| Microsurgical Dumont #4 forceps | Dumont Swiss made | 1708-4TM-PO | |
| Microsurgical needle holder | ASSI | B-14-8 | |
| Needle holder | World Precision Instruments | 501246 | |
| Nosecone for Anesthesia | World Precision Instruments | EZ-112 | |
| Pixel analysis software | GNU Image Manipulation Program v2.10 | GIMP | GNU Open licence |
| PrecisionGlide Needle 27 G | BD | 305109 | |
| Ragnell Scissors | Roboz Surgical | RS-6015 | |
| Rimadyl (carprofen) | Zoetis | 10000319 | This concentration needs to be diluted for rodents |
| Scientific Elizabethan collar (e-collar) for Rats | Braintree Scientific | NC9263311 | |
| Small animal ear tag | National Band & Tag Company | Style 1005-1 | |
| Small Animal Heated Operating Table (Adjustable) | Peco Services Ltd | 69023 | |
| Sterile towel drape | Dynarex Corporation | 4410 | |
| Sterile water for injection and irrigation | Hospira | 0409488724-1 | |
| Surgical scrub – BD ChloraPrep Hi-Lite Orange 3 mL applicator with Sterile Solution | BD | 930415 | |
| UV lamp | UVP | UVL-56 | |
| Webcol Alcohol prep pads | Simply Medical | 5110 |
References
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