Neste trabalho, propomos um protocolo para a administração intratraqueal de lipopolissacarídeo (LPS) via intubação endotraqueal orofaríngea não invasiva. Este método minimiza o trauma do procedimento cirúrgico para o animal e entrega com precisão LPS para a traqueia e, em seguida, para os pulmões.
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Artigo de método
Instilação não invasiva de lipopolissacarídeo intratraqueal em camundongos
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O modelo de lesão pulmonar aguda (LPA) em camundongos induzida por lipopolissacarídeo (LPS) ou endotoxina ainda está entre os modelos mais comumente utilizados em estudos animais de lesão pulmonar aguda ou inflamação aguda. Os métodos atualmente mais utilizados em modelos de lesão pulmonar aguda em camundongos são a injeção intraperitoneal de LPS e a traqueostomia para a infusão traqueal de LPS. No entanto, o primeiro método não tem como alvo o pulmão e danifica outros órgãos, e o segundo método induz trauma operatório, risco de infecção e baixa taxa de sobrevida. Aqui, recomendamos um método não invasivo de intubação orofaríngea endotraqueal para instilação de LPS em camundongos. Nesse método, o LPS é introduzido de forma não invasiva na traqueia através da cavidade orofaríngea para ser instilado no pulmão com o auxílio de um aparelho para intubação endotraqueal. Este método não só garante a segmentação pulmonar, mas também evita danos e o risco de morte nos animais. Esperamos que essa abordagem se torne amplamente utilizada no campo da lesão pulmonar aguda.
Introdução
A lesão pulmonar aguda (LPA) é uma síndrome clínica comum. Sob uma variedade de fatores patogênicos, a ruptura da barreira fisiológica das células epiteliais pulmonares e das células endoteliais vasculares leva ao aumento da permeabilidade alveolar, causando diminuição da complacência pulmonar, edema pulmonar e hipoxemia grave1. A síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA) é a forma mais grave de LPA. A inflamação não controlada e os danos causados pelo estresse oxidativo são considerados as principais causas de LPA e de SDRA mais grave2. Quando as células epiteliais alveolares são diretamente lesadas devido ao tr....
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Protocolo
O protocolo de experimentação animal foi revisado e aprovado pelo Comitê de Gestão da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (Registro No. 2021-11). Camundongos C57/BL machos (20-25 g, 6-8 semanas de idade) foram utilizados para o presente estudo. Os camundongos foram mantidos em uma câmara de animais e foram livres para beber e comer durante o experimento.
1. Preparo
- Certifique-se de que a plataforma de intubação seja composta por uma base, um riser, um clipe de papel, dois elásticos e algumas cordas. Pegue uma corda, passe a corda através dos dois orifícios no topo do riser e amarre as duas extr....
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Resultados
O método proposto para instilação de LPS em camundongos foi verificado avaliando-se a expressão da citocina inflamatória TNF-α e a relação peso seco-úmido pulmonar 12 h após a instilação de LPS. Foram quatro grupos no experimento: controle em branco (sem tratamento), intubação cirúrgica16, intranasal17,18 e intubação orofaríngea não invasiva (n = 6). Em comparação com o grupo controle branco, os níveis séri.......
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Discussão
Inicialmente, foi realizada uma busca no interior da cavidade oral para encontrar a localização datraqueia19. No entanto, durante esse processo, descobrimos que a traqueia de camundongos C57/BL é estreita, o que dificulta encontrar a localização correta por esse método sem o auxílio de equipamentos como um endoscópio20. Após uma exploração mais aprofundada, verificou-se que a luz da lâmpada do intubador poderia penetrar na superfície do corpo, permitindo ao operador determi.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (No.: 81903902), pela China Postdoctoral Science Foundation (No.: 2019M663457), pelo Programa de Ciência e Tecnologia de Sichuan (No.: 2020YJ0172) e pelo Xinglin Scholar Research Premotion Project da Universidade de Chengdu da TCM (No.: QJRC2022053).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| de Lipopolysaccharide | MERK | L4130 | LPS |
| GAOGE INDUSTRY AND TRADE CO., LTD | Para entregar LPS | ||
| Cânula de rato | RWD Life Science | 803-03008-00 | Cânula de rato |
| Kit de intubação de rato | RWD Life Science | 903-03027-00 | Incluindo uma base, um montante, um intubador, um fórceps cirúrgico e alguns pipeta de Pasteur de cordas |
| Biosharp ciências da vida | BS-XG-03 | Para verificar o sucesso da intubação | |
| Pentobarbital sódico | Beijing Chemical Co., China | 20220918 | Para anestesiar camundongos |
Referências
- Xia, Y., et al. Protective effect of human amnion epithelial cells through endotracheal instillation against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice. Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 33 (1), 7-11 (2017).
- Butt, Y., Kurdowska, A., Allen, T. C.
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Reimpressões e permissões
