Summary
El presente protocolo describe un modelo de prueba de ejercicio con animales grandes para evaluar la capacidad funcional del sistema cardiovascular para evaluar la eficiencia de nuevas terapias en el entorno preclínico. Es comparable a una prueba de ejercicio clínico.
Abstract
A pesar del progreso en los tratamientos, las enfermedades cardiovasculares siguen siendo una de las principales causas de mortalidad y morbilidad en todo el mundo. La angiogénesis terapéutica basada en la terapia génica es un enfoque prometedor para tratar a los pacientes con síntomas significativos, a pesar de la terapia farmacológica óptima y los procedimientos invasivos. Sin embargo, muchas técnicas prometedoras de terapia génica cardiovascular no han logrado cumplir con las expectativas en los ensayos clínicos. Una explicación es un desajuste entre los criterios de valoración preclínicos y clínicos utilizados para medir la eficacia. En modelos animales, el énfasis generalmente se ha puesto en puntos finales fácilmente cuantificables, como el número y el área de los vasos capilares calculados a partir de secciones histológicas. Además de la mortalidad y la morbilidad, los criterios de valoración en los ensayos clínicos son subjetivos, como la tolerancia al ejercicio y la calidad de vida. Sin embargo, los criterios de valoración preclínicos y clínicos probablemente miden diferentes aspectos de la terapia aplicada. Sin embargo, ambos tipos de criterios de valoración son necesarios para desarrollar enfoques terapéuticos exitosos. En las clínicas, el objetivo principal es siempre aliviar los síntomas de los pacientes y mejorar su pronóstico y calidad de vida. Para lograr mejores datos predictivos de estudios preclínicos, las mediciones de punto final deben coincidir mejor con las de los estudios clínicos. Aquí, presentamos un protocolo para una prueba de ejercicio en cinta rodante clínicamente relevante en cerdos. Este estudio tiene como objetivo: (1) proporcionar una prueba de esfuerzo confiable en cerdos que se pueda usar para evaluar la seguridad y la eficacia funcional de la terapia génica y otras terapias novedosas, y (2) hacer coincidir mejor los puntos finales entre los estudios preclínicos y clínicos.
Introduction
Las enfermedades cardiovasculares crónicas son causas importantes de mortalidad y morbilidad en todo el mundo 1,2. Aunque los tratamientos actuales son efectivos para la mayoría de los pacientes, muchos todavía no pueden beneficiarse de las terapias actuales debido, por ejemplo, a enfermedades crónicas difusas o comorbilidades. Además, en algunos pacientes, los síntomas cardíacos no son aliviados por los tratamientos disponibles, y su enfermedad cardiovascular progresa a pesar de la terapia médica óptima3. Por lo tanto, existe una clara necesidad de desarrollar nuevas opciones de tratamiento para las enfermedades cardiovasculares graves.
Durante los últimos años, se han descubierto nuevas vías moleculares y formas de manipular estos objetivos, lo que hace que la terapia génica, la terapia celular y otras terapias novedosas sean una opción realista para tratar enfermedades cardiovasculares graves4. Sin embargo, después de resultados preclínicos prometedores, muchas aplicaciones cardiovasculares no han cumplido con las expectativas en los ensayos clínicos. A pesar de la escasa eficacia en los ensayos clínicos, varios ensayos han establecido buenos perfiles de seguridad de nuevas terapias 5,6,7,8,9. Por lo tanto, llevar nuevas terapias cardiovasculares a los pacientes requerirá mejores enfoques y mejores modelos preclínicos, entornos de estudio y criterios de valoración en estudios preclínicos que puedan predecir la eficacia clínica.
En modelos animales, el énfasis generalmente se ha centrado en criterios de valoración fácilmente cuantificables, como el número y el área de los vasos capilares calculados a partir de secciones histológicas o parámetros de imágenes del ventrículo izquierdo en reposo y bajo estrés farmacológico. En los ensayos clínicos, muchos criterios de valoración han sido más subjetivos, como la tolerancia al ejercicio o el alivio de los síntomas4. Por lo tanto, es probable que los criterios de valoración en estudios preclínicos y ensayos clínicos midan diferentes aspectos de la terapia aplicada. Por ejemplo, un aumento en la cantidad de vasos sanguíneos no siempre se correlaciona con una mejor perfusión, función cardíaca o tolerancia al ejercicio. Sin embargo, ambos tipos de criterios de valoración son necesarios para desarrollar abordajes terapéuticos exitosos10. Aún así, el objetivo principal es siempre aliviar los síntomas y mejorar el pronóstico y la calidad de vida del paciente. Para lograr esto, las mediciones del punto final deben ajustarse mejor entre los estudios preclínicos y clínicos4.
La aptitud cardiorrespiratoria refleja la capacidad de los sistemas circulatorio y respiratorio para proporcionar oxígeno durante la actividad física sostenida y, por lo tanto, cuantifica la capacidad funcional de un individuo. La capacidad funcional es un marcador pronóstico clave, ya que es un fuerte predictor independiente para el riesgo de mortalidad cardiovascular y por todas las causas11. Las mejoras en la aptitud cardiorrespiratoria se asocian con un menor riesgo de mortalidad12. Las pruebas de esfuerzo son adecuadas para evaluar el rendimiento aeróbico y las respuestas al tratamiento en enfermedades cardiovasculares. Dependiendo de la disponibilidad, las pruebas se realizan en un ergómetro de bicicleta o una cinta de correr. Por lo general, se utiliza un aumento gradual de la carga de trabajo por minuto y se evitan aumentos bruscos; Esto conduce a una respuesta fisiológica lineal. Las variables más importantes en las pruebas de ejercicio incluyen el tiempo total de ejercicio, los equivalentes metabólicos (MET) alcanzados, la frecuencia cardíaca y los cambios en una línea de electrocardiograma (ECG) entre el complejo QRS (ondas Q, R y S) y la onda T (segmento ST). Las pruebas de esfuerzo clínico tienen bajos costos y son fácilmente accesibles13. Por estas razones, las pruebas de esfuerzo, como la prueba de caminata de 6 minutos, se han utilizado ampliamente en las clínicas y también deben usarse en la evaluación preclínica de nuevas terapias.
Hasta donde sabemos, no existen modelos animales grandes bien descritos para evaluar la eficacia funcional de la terapia génica u otras terapias novedosas. Por lo tanto, la prueba de esfuerzo clínicamente relevante proporciona una excelente perspectiva para evaluar la eficiencia de estas nuevas terapias en el entorno preclínico.
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Protocol
Todos los experimentos son aprobados por la Junta de Experimentos con Animales de la Universidad de Finlandia Oriental. Este protocolo describe una prueba de ejercicio en cinta rodante clínicamente relevante para cerdos para evaluar la seguridad y eficacia de nuevas terapias para enfermedades cardíacas. Para el presente estudio se utilizaron cerdos domésticos hembras que pesaban entre 25 y 80 kg. Los animales fueron obtenidos de una fuente comercial (ver Tabla de Materiales).
1. Configuración de la pista de atletismo
- Configure la pista de atletismo para que los animales solo puedan moverse en una dirección. Use puertas y escotillas para evitar que los animales retrocedan. El plano de planta de la pista de atletismo se muestra en la Figura 1, y un ejemplo de una pista de atletismo se muestra en la Figura 2.
- Asegúrese de que la cinta de correr (consulte la Tabla de materiales) tenga suficiente espacio para permitir cambios de inclinación.
- Asegúrese de que la cinta de correr tenga un ancho ajustable para evitar que el animal gire durante la carrera.
- Use plástico transparente para hacer la pared frontal de la cinta de correr. Esto evita que el animal huya de la cinta de correr, pero aún permite que el animal vea a través de la pared.
NOTA: Es esencial que los animales puedan ver a través de la pared frontal, ya que nuestra experiencia sugiere que los cerdos están más motivados para correr si ven a sus compañeros cerdos al otro lado de la pared. - Coloque un monitor de ECG y un desfibrilador (consulte la Tabla de materiales) junto a la cinta de correr.
NOTA: Las arritmias fatales pueden ocurrir durante la prueba de esfuerzo, especialmente si el cerdo tiene isquemia miocárdica14,15,16. - Asegúrese de que la pista de atletismo incluya un punto de agua donde los animales puedan beber y refrescarse después de la carrera.
2. Período de aclimatación de los cerdos antes del ensayo
- Aloje a los animales durante 2 semanas antes de comenzar los experimentos.
- Durante la 1ª semana de aclimatación, asegúrese de que los animales se acostumbren a sus manejadores y al nuevo entorno de alojamiento, excluyendo la pista de atletismo.
- Durante la 2ª semana del período de aclimatación, asegúrese de que los animales se acostumbren a la pista de atletismo.
- Empieza a acostumbrarte para que los animales se familiaricen con la pista de atletismo. Primero, mantenga todas las puertas abiertas, para que los animales puedan caminar libremente por la pista y explorar el entorno.
- Cuando los animales estén más familiarizados con la pista, encienda la cinta de correr y deje que el animal corra por períodos cortos a la vez, como 7 minutos. La duración de los tiempos de ejecución debe extenderse diariamente.
NOTA: Recuerde recompensar a los animales durante el período de aclimatación. Por ejemplo, los cerdos fueron recompensados con palomitas de maíz sin sal en el presente estudio.
3. La prueba de esfuerzo
NOTA: Los cerdos deben ayunar al menos 2 horas antes de la prueba de esfuerzo o recibir solo una pequeña porción de comida antes de la carrera.
- Encienda la cinta de correr y ajuste la inclinación al 5% -10%.
- Tan pronto como el animal esté en la cinta de correr, encienda la cinta con una velocidad inicial de 2 km / h.
- Aumentar la velocidad en 0,5 km/h cada 60 s hasta alcanzar los 5 km/h. El tiempo total de ejecución es de 15 min.
- En caso de que el animal no pueda correr todo el tiempo a la velocidad máxima, realice los pasos a continuación.
- Si el cerdo no está corriendo tan rápido como la velocidad seleccionada, empújelo suavemente desde atrás, ya que esto puede darle al animal la sensación de que necesita correr más rápido sin disminuir la velocidad.
- Intente empujar suavemente al animal un máximo de tres veces; Después de eso, reduzca la velocidad en 0.5 km / h a la vez hasta que el cerdo pueda manejar la velocidad. No reduzca la velocidad por debajo de 2 km/h.
- Si el animal se niega a correr incluso a una velocidad lenta, apague la cinta y detenga la prueba.
4. Monitorización del ECG durante la prueba de esfuerzo
- Coloque los electrodos de ECG (consulte la Tabla de materiales) en lugares anatómicos que tengan un movimiento mínimo durante la carrera, como las escápulas o el tórax.
NOTA: Utilice electrodos de ECG diseñados para pruebas de esfuerzo para lograr una mejor adhesión a la piel. Recuerde afeitarse el cabello del área donde se colocarán los electrodos de ECG. - Registra los cambios en la frecuencia cardíaca durante la carrera.
NOTA: Nuestra experiencia sugiere que los análisis del segmento ST a menudo son complicados debido al movimiento y otros artefactos. El monitoreo del ritmo también se puede hacer usando un registrador de bucle implantable o un marcapasos.
5. Recopilación de datos
- Registre la distancia de carrera, el tiempo total y la velocidad cada vez que se cambie la velocidad.
NOTA: Las cintas de correr modernas pueden recopilar muchos otros datos, por lo que es esencial familiarizarse con el manual de la cinta de correr para utilizar todo el potencial del equipo. - Tenga en cuenta los posibles cambios en el comportamiento animal, como cojera.
NOTA: Si es necesario, póngase en contacto con un veterinario y asegúrese de que el animal reciba la analgesia necesaria. Retire al animal de futuros ejercicios hasta que se recupere por completo.
6. Atención post-procedimiento
- Asegúrese de que el animal tenga acceso al punto de agua.
- Recompense al animal, por ejemplo, con golosinas o juguetes.
- Controle al animal durante 30 minutos después de la carrera para detectar posibles efectos adversos.
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Representative Results
Uno debe tener experiencia trabajando con animales grandes para tener éxito con este protocolo. Los investigadores deben ser capaces de evaluar si un animal deja de correr debido a la fatiga o la falta de motivación. Registrar la velocidad y la distancia puede ayudar a evaluar esto, ya que por lo general, los animales que carecen de motivación dejan de correr totalmente, mientras que los animales fatigados siguen corriendo después de reducir la velocidad (Figura 3). Si es necesario, el protocolo se puede repetir al día siguiente si los resultados parecen poco fiables.
En la figura 4 se muestra una cronología representativa de los animales tratados con virus adenoasociados (AAV). La línea de tiempo puede variar dependiendo del entorno del estudio, especialmente con respecto al punto de tiempo de sacrificio. Tenga en cuenta el período de aclimatación al planificar los experimentos.
Los resultados se pueden comparar con otras mediciones de estructura y función de órganos, como el eco cardíaco, para ver cómo la tolerancia al ejercicio se relaciona con estas otras mediciones. Por ejemplo, el cambio en la distancia de carrera se correlaciona con el cambio en la fracción de eyección. Con una fracción de eyección baja, un animal no puede correr a toda velocidad durante toda la prueba de esfuerzo (Figura 5). Las variables analizadas pueden diferir según los entornos del estudio. Este protocolo permite la comparación de la distancia total de carrera, la variación de velocidad, los MET, la variación de la frecuencia cardíaca y las arritmias.
El ECG se registra durante la prueba de esfuerzo (Figura 6). El análisis del segmento ST es difícil debido a los artefactos. Los cambios en los intervalos de frecuencia cardíaca se pueden medir a partir del ECG a lo largo de la prueba de esfuerzo.
Figura 1: Plano de la pista de atletismo. El lugar para los animales que no corren está marcado con (A). Un animal a la vez es guiado a la cinta [zona (C)] a través de un pasillo (B). La puerta entre las zonas (A) y (B) está cerrada para garantizar que solo un animal a la vez vaya a la pista de atletismo y los otros animales permanezcan en la zona (A). Es esencial que otros animales permanezcan en la zona (A), ya que el animal en la cinta de correr puede ver a los otros animales en la zona (A), lo que los motiva a correr. La compuerta entre la cinta de correr y la zona (B) está cerrada para garantizar que el animal no pueda retroceder de la cinta de correr. La cinta de correr se opera desde la zona (D), y el animal se devuelve a la zona (A) a través de la zona (D) después de la carrera. En el presente caso, se instala en la zona (A) un punto de agua donde los animales pueden beber y refrescarse después de la carrera. Símbolos: las flechas negras indican la dirección de rotación, y los cuartos de círculo indican puertas. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Imágenes representativas de la pista de atletismo . (A) La importancia de una sola ruta disponible para los animales. (B) La cinta de correr, que debe tener un ancho ajustable para evitar que los animales giren durante la carrera. (C) Un espacio cerrado destinado a otro animal además del animal que corre. Los animales están más motivados para correr cuando ven a un miembro de su especie. (D) Un ejemplo de un punto de agua para los animales donde los animales pueden refrescarse y beber después de la prueba de esfuerzo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: Distancia y velocidad de carrera. (A) Datos representativos de las distancias totales de carrera de cuatro cerdos sanos. La distancia media total de carrera para los animales de ensayo fue de 970 m, y la desviación estándar de las distancias totales fue de 80 m. (B) Datos sobre la variación de velocidad entre cerdos. La velocidad se reduce en intervalos de 0,5 km / h hasta que el cerdo puede manejar la velocidad. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: Cronograma representativo. Tenga en cuenta que los puntos temporales pueden variar entre los estudios. Sin embargo, es notable que los animales deben llegar al centro de animales de laboratorio 3 semanas antes de comenzar el experimento debido al período de aclimatación. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5: Correlación de la distancia de carrera con el cambio en la fracción de eyección. Correlación del cambio en la distancia de carrera con el cambio en la fracción de eyección. La fracción de eyección en reposo se midió por el método Biplano Simpon. El cambio en la fracción de eyección desde la línea de base se correlaciona con el cambio en la distancia de carrera de los cerdos con insuficiencia cardíaca inducida por marcapasos, con r = 0,2831, p = 0,0284 y R2 = 0,0801. A pesar de los bajos r y R2, el cambio en el porcentaje de fracción de eyección del ventrículo izquierdo (FEVI) tiende a afectar las distancias de carrera. Es importante tener en cuenta que varios factores influyen en las variables medidas, afectando los resultados. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 6: Cintas de ECG representativas de un cerdo sano. El panel superior de ECG muestra un ECG 3 minutos después del comienzo de la prueba de ejercicio. La tira inferior de ECG muestra un ECG después de correr durante 10 minutos. El ECG se puede utilizar para evaluar las diferencias en la frecuencia cardíaca de los animales de prueba. La frecuencia cardíaca del panel de ECG superior es de 176 latidos por minuto, y en la tira de ECG inferior es de 250 latidos por minuto. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
Esta prueba de ejercicio con animales grandes imita la prueba utilizada en las clínicas, reduciendo la brecha en los puntos finales entre los estudios preclínicos y los ensayos clínicos. Se puede aplicar para evaluar la eficacia de nuevos tratamientos para enfermedades cardiovasculares graves, como la arteriosclerosis obliterante, la insuficiencia cardíaca y las enfermedades isquémicas del corazón. Los puntos de tiempo aplicados en este protocolo pueden variar dependiendo del tratamiento probado. Este protocolo se ha estandarizado en base a una larga experiencia de trabajo con animales grandes y se puede utilizar para evaluar la seguridad y eficacia de la terapia génica cardiovascular y otros enfoques terapéuticos novedosos.
El corazón y el sistema cardiovascular del cerdo son similares a la fisiología, anatomía y función humanas. Por lo tanto, los cerdos a menudo se han utilizado para modelar los mecanismos de las enfermedades cardiovasculares y los procedimientos terapéuticos17. El tiempo de seguimiento en nuestros estudios porcinos ha sido de hasta 12 meses18; Sin embargo, el manejo de los animales se vuelve cada vez más difícil a medida que crecen durante los largos períodos de seguimiento.
Este método consta de varios pasos críticos, que son esenciales para el éxito de la prueba e imposibles de corregir después. En primer lugar, los cerdos tienen diferencias individuales en su motivación para correr. Motivar a los animales para correr y mantener la motivación suficiente durante toda la prueba es esencial. Esto asegura que todos los puntos de tiempo sean comparables. Mantener la motivación de los cerdos para correr requiere un conocimiento específico de sus características de comportamiento individuales. Los animales deben aclimatarse a la cinta de correr y al entorno de prueba antes de la prueba de esfuerzo. A los cerdos se les enseña a ir a la cinta de correr, y sus actuaciones exitosas son recompensadas. Otra forma de aumentar su motivación para correr es mantener a otros animales de prueba en el campo de visión del corredor.
Es importante evitar los defectos anatómicos típicos, como diferentes problemas en las piernas. Los defectos anatómicos más comunes son enfermedades de las pezuñas, deformidades congénitas de las extremidades y problemas causados por accidentes, como laceraciones, lesiones escapulares, fracturas y heridas. Estos se deben principalmente a hábitats, accidentes, factores hereditarios y aberraciones en la alimentación19. Una debilidad en las piernas conduce a una marcha descoordinada, lo que hace imposible asistir a las pruebas de ejercicio. Además, si aparece debilidad en las patas durante el estudio, el animal debe ser excluido de la prueba. Los problemas en las patas se pueden evitar eligiendo cerdos con estructuras de patas intactas. Durante la investigación, las lesiones en las piernas se pueden prevenir teniendo buenas condiciones en la pocilga. Se deben evitar las superficies duras y corrosivas, y se debe mantener la higiene general. Los cerdos deben ser alimentados moderadamente para que no aumenten de peso demasiado rápido, ya que esto tensa sus patas. Además, los cerdos deben colocarse en sus corrales con cuidado para evitar accidentes, y deben tener suficientes estímulos, como juguetes, para que su masticación no se dirija a otros cerdos.
Durante la prueba de esfuerzo, el ECG se registró con un ECG de 3 derivaciones o un registrador de bucle implantable. No es tan preciso como un ECG de 12 derivaciones, pero aún puede evaluar múltiples variables, como arritmias y frecuencia cardíaca. Varios tipos de errores y alteraciones pueden falsificar los ECG. Por ejemplo, los electrodos conectados incorrectamente, el contacto deficiente entre la piel y los electrodos y las contracciones del músculo esquelético pueden causar errores. Los electrodos deben permanecer firmemente en su lugar durante toda la prueba. Esto es un desafío ya que la piel se calienta y suda durante la carrera. El contacto entre la piel y los electrodos se puede mejorar afeitando el cabello, desinfectando y eliminando las células muertas de la piel. Además, el movimiento de los músculos causa artefactos que afectan los ECG13. Esto puede desafiar la interpretación de los segmentos ST. Además, las derivaciones de ECG pueden interferir con la carrera. Sin embargo, estos problemas se pueden reducir golpeando firmemente los cables del ECG en la piel. Los ECG también se pueden registrar con un registrador de bucle implantable o un marcapasos. El uso de un registrador de bucle implantable resuelve muchos problemas que tiene el uso de ECG de 3 derivaciones. Sin embargo, la instalación del registrador de bucle implantable es una operación invasiva con riesgos, como infecciones.
Los investigadores deben observar el comportamiento de los animales durante toda la prueba para garantizar la seguridad general del procedimiento. Por ejemplo, el agotamiento, la fatiga severa, las náuseas, la pérdida del conocimiento, la disnea severa o la piel cianótica son razones para terminar la prueba de esfuerzo. Además, los investigadores deben observar cambios en el ECG, como arritmias. Sin embargo, con personal bien capacitado y suficiente experiencia trabajando con animales grandes, el protocolo de ejercicio actual se puede utilizar rutinariamente en estudios preclínicos para producir datos clínicamente relevantes que deberían hacer que la transición clínica de nuevos enfoques terapéuticos sea más exitosa con respecto a los beneficios clínicos para los pacientes.
Poole et al.20 han publicado guías para el ejercicio animal y protocolos de entrenamiento para estudios cardiovasculares. En estos protocolos, los cerdos hacen ejercicio en una cinta de correr durante aproximadamente 30 minutos después del calentamiento. Durante estos 30 minutos, la zona de frecuencia cardíaca objetivo para los animales de prueba es del 65% -75% de la frecuencia cardíaca máxima. La frecuencia cardíaca se modifica cambiando la velocidad o la inclinación de la cinta de correr. El protocolo de Poole et al. y la prueba de ejercicio de 15 minutos presentada en este manuscrito tienen múltiples similitudes, como el período de aclimatación, los requisitos de la cinta rodante, el peso de los animales de prueba seleccionados y el refuerzo positivo al recompensar al animal después del ejercicio. En ambos protocolos, los animales de prueba pueden superar la capacidad de la cinta de correr, lo que limita el tiempo de seguimiento.
La principal diferencia entre el protocolo descrito por Poole et al. y la prueba de esfuerzo presentada en este manuscrito es el propósito de la prueba. El protocolo descrito por Poole et al. está diseñado para provocar adaptaciones clásicas de entrenamiento observadas en humanos. Por lo tanto, se centra en el ejercicio de intensidad moderada, mientras que el método de prueba de ejercicio de 15 minutos tiene como objetivo hacer un esfuerzo casi máximo para evaluar mejor la aptitud cardiorrespiratoria. Esto se logra cuando el nivel subjetivo de esfuerzo es aproximadamente el 90% de la frecuencia cardíaca máxima13. Una prueba de ejercicio de 15 minutos imita la prueba utilizada en las clínicas al aumentar gradualmente el nivel de esfuerzo hasta que esté cerca del máximo. Debido a la diferencia en los objetivos de los protocolos, la frecuencia de ejercicio de los animales de prueba difiere. Poole et al. describen que los cerdos pueden correr hasta cuatro veces por semana para lograr mejores adaptaciones cardiovasculares causadas por el ejercicio. La prueba de ejercicio de 15 minutos evalúa la eficacia funcional de la terapia génica y otras terapias novedosas, por lo que la frecuencia requerida es significativamente menor y depende de los requisitos del tratamiento. Un ejemplo de estos requisitos se ha descrito en la Figura 4.
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Disclosures
Los autores declaran no tener conflictos de intereses.
Acknowledgments
El autor desea agradecer a Minna Törrönen, Riikka Venäläinen, Heikki Karhunen e Inkeri Niemi del Centro Nacional de Animales de Laboratorio por su ayuda en el trabajo con animales. Este estudio cuenta con el apoyo de la Academia Finlandesa, ERC y la subvención CardioReGenix EU Horizon.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Defibrillator | Zoll M series | TO9K116790 | All portable defribrillators will work |
| Defibrillator pads | Philips | M3713A | All pads work, as long as the pads are compatible with the defibrillator |
| ECG electrodes | Several providers | Prefer ECG electrodes designed for exercise tests | |
| Loop recorder | Abbott Oy | DM3500 | Optional for rhythm monitoring |
| Patient monitor | Schiller Argus LCM Plus | 7,80,05,935 | All portable ecg monitors will work |
| Pigs | Emolandia Oy | ||
| Treadmill | NordicTrack | All treadmills with adjustable incline and speed are suitable for the exercise test. The treadmill should be as long and wide as possible. | |
| Ultrasound system | Philips EPIQ 7 ultrasound | ||
| Various building materials | Several providers | For building fences, ramps and gates according to the Figure 1 and Figure 2 | |
| Various treats for the animals |
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