Os ensaios laboratoriais podem alavancar o valor prognóstico da imagem multimodal baseada em tomografia de coerência óptica longitudinal (OCT) da degeneração macular relacionada à idade (DMRI). Olhos de doadores humanos com e sem DMRI são fotografados usando OCT, oftalmoscopia a laser de varredura por reflectância no infravermelho próximo e autofluorescência em dois comprimentos de onda de excitação antes da secção do tecido.
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Artigo de método
Ex Vivo Imagem Multimodal Baseada em OCT de Olhos de Doadores Humanos para Pesquisa em Degeneração Macular Relacionada à Idade
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Uma sequência de progressão para degeneração macular relacionada à idade (DMRI) aprendida com imagens clínicas multimodais (MMI) baseadas em tomografia de coerência óptica (OCT) poderia adicionar valor prognóstico aos achados laboratoriais. Neste trabalho, OCT e IHM ex vivo foram aplicados em olhos de doadores humanos antes da secção do tecido da retina. Os olhos foram recuperados de doadores brancos não diabéticos com idade ≥80 anos, com tempo de morte até a preservação (DPP) de ≤6 h. Os globos foram recuperados no local, marcados com trefina de 18 mm para facilitar a remoção da córnea e imersos em paraformaldeído tamponada a 4%. As imagens de fundo de olho coloridas foram adquiridas após a remoção do segmento anterior com um telescópio dissecante e uma câmera SLR usando iluminação trans, epi e flash em três aumentos. Os globos foram colocados em um tampão dentro de uma câmara personalizada com uma lente de 60 dioptrias. Eles foram imageados com OCT de domínio espectral (cubo de mácula de 30°, espaçamento de 30 μm, média = 25), reflectância no infravermelho próximo, autofluorescência de 488 nm e autofluorescência de 787 nm. Os olhos com DMRI apresentavam alteração do epitélio pigmentado da retina (EPR), com depósitos drusenoides drusenoides (DDS) drusenóides (DRS) drusenos ou sub-retinianos, com ou sem neovascularização, e sem evidência de outras causas. Entre junho de 2016 e setembro de 2017, foram recuperados 94 olhos direitos e 90 esquerdos (DtoP: 3,9 ± 1,0 h). Dos 184 olhos, 40,2% tinham DMRI, incluindo DMRI intermediária precoce (22,8%), atrófica (7,6%) e neovascular (9,8%), e 39,7% tinham máculas normais. Drusen, SDDs, focos hiper-reflexivos, atrofia e cicatrizes fibrovasculares foram identificados usando OCT. Os artefatos incluíram opacificação tecidual, descolamentos (bacilar, retiniano, EPR, coroidal), alteração cística foveal, EPR ondulante e dano mecânico. Para guiar a criossecção, volumes de OCT foram usados para encontrar os pontos de referência da fóvea e da cabeça do nervo óptico e patologias específicas. Os volumes ex vivo foram registrados com os volumes in vivo , selecionando-se a função de referência para rastreamento ocular. A visibilidade ex vivo da patologia observada in vivo depende da qualidade da preservação. Dentro de 16 meses, 75 olhos de doadores rápidos DtoP em todos os estágios da DMRI foram recuperados e estadiados usando métodos clínicos de MMI.
Introdução
Quinze anos de manejo da degeneração macular relacionada à idade neovascular (DMRI) com terapia anti-VEGF sob a orientação da tomografia de coerência óptica (OCT) ofereceram novos insights sobre a sequência de progressão e a microarquitetura dessa causa prevalente de perda de visão. Um reconhecimento importante é que a DMRI é uma doença tridimensional que envolve a retina neurossensorial, o epitélio pigmentado da retina (EPR) e a coroide. Como resultado das imagens de OCT de pacientes do estudo e dos olhos de pacientes clínicos tratados, as características da patologia além daquelas vistas pela fotografia de fundo de olho colorido, um padrão clínico por décadas, são a....
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Protocolo
O comitê de revisão institucional da Universidade do Alabama em Birmingham aprovou os estudos laboratoriais, que aderiram às Boas Práticas de Laboratório e Nível de Biossegurança 2/2+. Todos os bancos de olhos dos EUA estão em conformidade com o Uniform Anatomical Gifts Act de 2006 e a Food and Drug Administration dos EUA. A maioria dos bancos de olhos dos EUA, incluindo a Advancing Sight Network, está em conformidade com os padrões médicos da Eye Bank Association of America.
A Tabela de Materiais lista os suprimentos e equipamentos. O Material Suplementar 1 fornece uma visão geral da dissecção, fotografia ....
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Resultados
A Tabela 1 mostra que, durante 2016-2017, foram recuperados 184 olhos de 94 doadores brancos não diabéticos >80 anos de idade. O tempo médio de morte até a preservação foi de 3,9 h (variação: 2,0-6,4 h). Dos 184 olhos revisados, 75 (40,2%) apresentavam DMRI alguma. Foram identificadas as seguintes categorias: Pouco notável (39,7%), Questionável (11,4%), DMRI Intermediário Precoce (22,8%), Atrófica (7,6%), Neovascular (9,8%), Outros (8,7%) e Ignorado/Não Registrado/Não Graduável (<1%).
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Discussão
Usando uma abordagem de triagem de base populacional durante um período de 16 meses na era pré-COVID, foi possível obter 75 olhos de doadores com DMRI. Todos foram recuperados com uma DtoP curta e estadiados usando MMI ancorado em OCT. O critério de idade (>80 anos) está fora da faixa etária típica para recuperações teciduais destinadas a córneas transplantáveis. Apesar da idade avançada, nossos critérios resultaram em olhos em todos os estágios da DMRI. Muitos fenótipos de EPR são comuns a todos os estágios da DMRI, e a.......
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Divulgações
C.A.C. recebe apoio de pesquisa da Heidelberg Engineering e presta consultoria para Apellis, Astellas, Boehringer Ingelheim, Character Bioscience e Osanni. T.A. recebe apoio de pesquisa da Novartis e presta consultoria para Roche, Novartis, Bayer, Nidek e Apellis. K.B.F. é consultor da Genentech, Zeiss, Heidelberg Engineering, Allergan, Bayer e Novartis.
Agradecimentos
Agradecemos à Heidelberg Engineering pela instrumentação e pelo design do suporte de olho original, Richard F. Spaide MD pela introdução à imagem multimodal baseada em OCT, Christopher Girkin MD por facilitar o acesso a dispositivos de imagem clínica e David Fisher pela Figura 1. A recuperação dos olhos de doadores humanos para pesquisa foi apoiada por bolsas do National Institutes of Health (NIH) R01EY06019 (C.A.C.), P30 EY003039 (Pittler), R01EY015520 (Smith), R01EY027948 (C.A.C., T.A.) R01EY030192 (Li), R01EY031209 (Stambolian) e U54EY032442 (Spraggins), IZKF Würzburg (N-304, T.A.), a EyeSight Foundation of Alabama, a International....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Beequeres, 250 mL | Garrafas Fisher | # 02-540K | |
| , 1 L, Pyrex | Fisher | # 10-462-719 | armazenamento para conservante |
| Bico de Bunsen ou fonte de calor | Eisco | # 17-12-818 | Para derreter cera |
| Câmera, digital | Nikon D7200 | D7200 | |
| Computador e armazenamento | Apple | iMac Pro; disco rígido externo de 14 TB | de armazenamento de imagem |
| , isolado | Fisher | # 02-591-45 | Para gelo úmido |
| Recipientes, 2 por doador, 40 mL | Fisher | Sameco Bio-Tite 40 mL # 13-711-86 | Para conservante |
| Cadinho, quartzo 30 mL | Fisher | # 08-072D | Globo de retenção para fotografia |
| Cilindro, graduado, 250 mL | Fisher | # 08-549G | |
| Desinfetante suprimentos de limpeza | https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html | ||
| Suporte para os olhos com lente e suporte de montagem | contato J. Messinger | jeffreymessinger@uabmc.edu | modificação personalizada do design original da Heidelberg Engineering |
| Máscaras de Proteção Facial | Fisher | # 19-910-667 | |
| Harmon Fix | Roboz | # Pinça RS-8247 | |
| , Micro Adson | Roboz | # RS-5232 | |
| Fórceps, Tissue | Roboz | # RS-5172 | |
| Placa de Petri de vidro, Kimax | Fisher | # 23064 | |
| Luvas Diamond Grip | Fisher | # MF-300 | |
| Batas GenPro | Fisher | # 19-166-116 | |
| Software de edição de imagem | Adobe | Photoshop 2021, Creative Suite | |
| KimWipes | Fisher | # 06-666 | |
| Lâmpadas, 3 goosenecks | Schott Imaging | # A20800 | |
| Microscópio, estéreo | Nikon | SMZ 1000 | para dissecação |
| Microscópio, estéreo | Olympus | Fotografia de fundo de olho colorida | SZX9 |
| Paraformaldeído, 20% | EMS | # 15713-S | para conservante; diluído para armazenamento |
| Medidor de pH | Fisher | # 01-913-806 | |
| Tampão fosfato, Sorenson' s, 0,2 M pH 7,2 | EMS | # 11600-10 | |
| Anel flash | B & H Foto Vídeo | Sigma EM-140 DG | |
| Conta de rubi, 1 mm de diâmetro | Meller Optics | # MRB10MD | |
| Óculos de segurança 3M | Fisher | # 19-070-940 | |
| Oftalmoscópio a laser de varredura | Heidelberg Engineering | HRA2 | |
| Tesoura, mola curva | Roboz | # RS-5681 | |
| Recipiente para objetos cortantes | Fisher | # 1482763 | |
| Cordão do obturador, dispositivo remoto | Nikon | MC-DC2 | |
| Spectral Domain OCT | Heidelberg Engineering | Spectralis HRA& OCT | https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf |
| Rolamento de esferas de aço inoxidável, 25,4 mm de diâmetro | McMaster-Carr | # 9529K31 | |
| Corante de marcação de tecido, preto | Cancer Diagnostics Inc | # 0727-1 | |
| Lâminas de corte de tecido | Thomas Scientific | # 6767C18 | |
| Trephine, | Stratis Healthcare | # 6718L | |
| (HDMI) e cabo para câmera digital | B& H Photo Video | BH # COHD18G6PROB | para visualização ao vivo e exibição remota de câmera apresenta |
| Cera, rosa dental | EMS | # 72670 | |
| Aplicadores de madeira | Puritano | # 807-12 |
Referências
- Spaide, R. F., et al. Consensus nomenclature for reporting neovascular age-related macular degeneration data: Consensus on neovascular age-related macular degeneration nomenclature study group. Ophthalmology. 127 (5), 616-636 (2020).
- Spaide, R. F., Ooto, S., Curcio, C. A.
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Reimpressões e permissões
