Este protocolo apresenta um sistema otimizado de bioensaio foliar destacado para avaliar a eficácia de fungos entomopatogênicos (FPE) contra o pulgão mostarda (Lipaphis erysimi (Kalt.)), um inseto partenogenético. O método descreve o processo de coleta de dados durante os experimentos com placas de Petri, permitindo que os pesquisadores meçam consistentemente a virulência do PFE contra pulgões da mostarda e outros insetos partenogenéticos.
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Artigo de método
Avaliação do Efeito Afidicida de Fungos Entomopatogênicos Contra Insetos Partenogenéticos, Pulgão Mostarda, Lipaphis erysimi (Kalt.)
Neste artigo
Resumo
Resumo
O pulgão da mostarda (L. erysimi) é uma praga que infesta várias culturas crucíferas e transmite vírus de plantas. Para alcançar o manejo ecológico de pragas, fungos entomopatogênicos (FPE) são potenciais agentes de controle microbiano para o controle dessa praga. Portanto, a triagem de virulência de isolados de PFE em condições de placa de Petri é necessária antes da aplicação em campo. No entanto, o pulgão da mostarda é um inseto partenogenético, dificultando o registro de dados durante experimentos com placas de Petri. Um sistema modificado para bioensaios de folhas destacadas foi desenvolvido para resolver essa questão, usando um micropulverizador para inocular conídios em pulgões e prevenir o afogamento, facilitando a secagem ao ar após a suspensão dos esporos. O sistema manteve alta umidade relativa durante todo o período de observação, e o disco foliar permaneceu fresco por mais de dez dias, permitindo a reprodução partenogenética dos pulgões. Para evitar o acúmulo de filhotes, foi implementado um processo de remoção diária com pincel de pintura. Este protocolo demonstra um sistema estável para avaliar a virulência de isolados de PFE contra pulgões mostarda ou outros afídeos, possibilitando a seleção de potenciais isolados para o controle de afídeos.
Introdução
O pulgão-mostarda (L. erysimi) é uma notória praga que infesta uma variedade de culturas crucíferas, causando perdas econômicas significativas1. Embora vários inseticidas sistemáticos tenham sido recomendados para combater infestações por afídeos, o uso frequente desses inseticidas levanta preocupações sobre a resistência a pesticidas 2,3. Portanto, em termos de manejo ecológico de pragas, os fungos entomopatogênicos (PFE) podem servir como uma estratégia alternativa de controle adequada. O PFE é um inseto patógeno com capacidade de infectar hospedeiros penetrando em suas cutíc....
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Protocolo
NOTA: O fluxograma completo é mostrado na Figura 1.
1. Coleta e manutenção de pulgões de mostarda
- Coleção de pulgões de mostarda
- Vire as folhas e verifique visualmente se há infestação de pulgões de mostarda em culturas crucíferas no campo.
- Registre as informações do local de amostragem (ou seja, GPS) e a(s) planta(s) hospedeira(s) e confirme o histórico de aplicações de inseticidas com os agricultores.
- Use um aspirador de insetos ou um pincel de pintura fina (ver Tabela de Materiais) para coletar cerca de 50 pulgões de mostarda e....
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Resultados
O fluxograma apresentado ilustra a condição estável dos pulgões da mostarda desde a coleta de campo até a triagem de virulência. A manutenção dos pulgões a partir da coleta no campo garantiu um aumento estável de colônias de afídeos com um suprimento alimentar adequado. Os pulgões coletados em campo foram confirmados como pulgões mostarda através do uso de marcadores moleculares, incluindo tamanho do amplicon por PCR e sequenciamento de LeCO1. A triagem de virulência, realizada pelo método das folhas destacadas, revelou .......
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Discussão
As crucíferas, um grupo de vegetais, são frequentemente infestadas por várias espécies de afídeos, incluindo o pulgão da mostarda (L. erysimi) e o pulgão do repolho (Brevicoryne brassicae)26. Ambas as espécies foram relatadas em Taiwan27, e é possível que coexistam no local de coleta. Para distinguir espécies de afídeos estreitamente relacionadas, este estudo empregou uma técnica de identificação molecular usando um conjunto de primers multiplex
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Divulgações
Os autores declaram não haver conflito de interesses envolvidos neste trabalho.
Agradecimentos
Esta pesquisa foi financiada pelo 109-2313-B-005 -048 -MY3 do Ministério da Ciência e Tecnologia (MOST).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 10 μ L Inoculating Loop | NEST Scientific | 718201 | |
| 100 bp DNA Ladder III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| Tubo de centrífuga de 50 mL | Bioman Scientific | ET5050-12 | |
| Placa de Petri de 6 cm | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| Aspirador de insetos de 6 mm | MegaView Science | BA6001 | |
| 70 milímetros de papel de filtro NO.1 | Toyo Roshi Kaisha | ||
| 70% etanol | |||
| 9 cm placa de Petri | Sinal de Petri do Ágar | de 16001 | |
| Bioman | AGR001.1 | da categoria da microbiologia | |
| Agarose | Bioman Scientific | PB1200 | |
| BioGreen tampão seguro do gel do ADN | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| GenepHlow | Geneaid | DFH300 | https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf |
| Gene-Spin Kit de Isolamento de DNA Genômico | Protech Technology | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Hemocitômetro | Paul Marienfeld | 640030 | |
| Folhas de Komatsuna (Brassica rapa var. perviridis) | Tai Cheng Farm | 1-010-300410 | |
| Micropulverizador | |||
| MiniAmp Termociclador | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| Pulgão mostarda (Lipaphis erysimi) | |||
| Pincel | Tian Cheng pincel empresa | 4716608400352 | |
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| Pellet pilão | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud Dextrose Caldo HiMedia | MH033-500G | ||
| SPSS Estatísticas | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
Referências
- Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
- Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.
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Reimpressões e permissões
