Estabelecendo culturas mistas de células neuronais e gliais de cérebros embrionários de camundongos para estudar infecção e imunidade inata

Alistair Gamble; Maria Suessmilch; Anniek Bonestroo; Andres Merits; Gerard J. Graham; Jonathan Cavanagh; Julia M. Edgar; Marieke Pingen

doi:10.3791/65331

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Artigo de método

Estabelecendo culturas mistas de células neuronais e gliais de cérebros embrionários de camundongos para estudar infecção e imunidade inata

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DOI:

10.3791/65331

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30 de junho de 2023

Alistair Gamble¹ , Maria Suessmilch¹ , Anniek Bonestroo¹ , Andres Merits² , Gerard J. Graham¹ , Jonathan Cavanagh¹ , Julia M. Edgar¹ , Marieke Pingen¹

¹School of Infection and Immunity, University of Glasgow, ²Faculty of Science and Technology, Institute of Technology, University of Tartu

Neste artigo

Resumo

Este protocolo apresenta uma maneira única de gerar culturas de células do sistema nervoso central a partir de cérebros embrionários de camundongos do dia 17 para pesquisa em neuro(imuno)logia. Este modelo pode ser analisado usando várias técnicas experimentais, incluindo RT-qPCR, microscopia, ELISA e citometria de fluxo.

Resumo

Modelos do sistema nervoso central (SNC) devem recapitular a complexa rede de células interconectadas encontradas in vivo. O SNC consiste principalmente de neurônios, astrócitos, oligodendrócitos e micróglia. Devido aos crescentes esforços para substituir e reduzir o uso animal, uma variedade de sistemas de cultura de células in vitro tem sido desenvolvida para explorar propriedades celulares inatas, que permitem o desenvolvimento de terapêuticas para infecções e patologias do SNC. Embora certas questões de pesquisa possam ser abordadas por sistemas de cultura de células baseados em humanos, como células-tronco pluripotentes (induzidas), trabalhar com células humanas tem suas próprias limitações em relação à disponibilidade, custos e ética. Aqui, descrevemos um protocolo único para isolar e cultivar células de cérebros embrionários de camundongos. As culturas de células neurais mistas resultantes imitam várias populações de células e interações encontradas no cérebro in vivo. Em comparação com os métodos equivalentes atuais, este protocolo imita mais de perto as características do cérebro e também ganha mais células, permitindo assim que mais condições experimentais sejam investigadas a partir de uma rata grávida. Além disso, o protocolo é relativamente fácil e altamente reprodutível. Essas culturas foram otimizadas para uso em várias escalas, incluindo telas de alto rendimento baseadas em 96 poços, análise de microscopia de 24 poços e culturas de 6 poços para citometria de fluxo e análise de reação em cadeia da polimerase quantitativa com transcrição reversa (RT-qPCR). Este método de cultura é uma ferramenta poderosa para investigar infecção e imunidade dentro do contexto de alguma complexidade do SNC com a conveniência de métodos in vitro .

Introdução

Melhorar nossa compreensão do sistema nervoso central (SNC) é fundamental para melhorar as opções terapêuticas para muitas doenças neuroinflamatórias e neurodegenerativas. O SNC, uma rede complexa de células interconectadas dentro do cérebro, medula espinhal e nervos ópticos, compreende neurônios, oligodendrócitos, astrócitos e suas células imunes inatas, a microglia¹. Uma abordagem in vitro pode muitas vezes reduzir drasticamente o número de camundongos necessários para realizar pesquisas significativas; no entanto, a natureza complexa do SNC torna impossível recapitular a situação in vivo usando linhagens celulares. Culturas....