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Artigo de método

Perfusão hepática isolada normotérmica suína

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DOI:

10.3791/65336

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9 de junho de 2023

 ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology, Immunology and Transplantation, Laboratory of Abdominal Transplantation, KU Leuven, 2Department of Abdominal Transplant Surgery and Coordination, University Hospitals Leuven

Neste artigo

Resumo

O modelo suíno de perfusão normotérmica hepática (NMP), descrito aqui, pode ser usado com sucesso para estudar NMP como uma estratégia de preservação, uma ferramenta para avaliação de viabilidade e uma plataforma para reparo de órgãos. Possui um alto valor translacional, no entanto, é tecnicamente desafiador e trabalhoso.

Resumo

Modelos suínos de perfusão normotérmica ex situ hepática (NMP) estão sendo cada vez mais usados na pesquisa de transplantes. Ao contrário dos roedores, os fígados suínos são anatômica e fisiologicamente próximos dos humanos, com tamanho de órgão e composição biliar semelhantes. O NMP preserva o enxerto hepático em condições próximas às fisiológicas, recirculando um perfusado baseado em glóbulos vermelhos quente, oxigenado e enriquecido com nutrientes através da vasculatura hepática. O NMP pode ser usado para estudar lesões de isquemia-reperfusão, preservar um fígado ex situ antes do transplante, avaliar a função do fígado antes do implante e fornecer uma plataforma para reparo e regeneração de órgãos. Alternativamente, NMP com um perfusato à base de sangue total pode ser usado para mimetizar o transplante. No entanto, esse modelo é trabalhoso, tecnicamente desafiador e acarreta um alto custo financeiro.

Neste modelo de NMP suíno, usamos fígados danificados isquêmicos quentes (correspondentes à doação após morte circulatória). Primeiramente, inicia-se anestesia geral com ventilação mecânica, seguida da indução de isquemia quente por pinçamento da aorta torácica por 60 min. As cânulas inseridas na aorta abdominal e na veia porta permitem a lavagem do fígado com solução de preservação fria. O sangue lavado é lavado com um protetor de células para obter glóbulos vermelhos concentrados. Após a hepatectomia, as cânulas são inseridas na veia porta, artéria hepática e veia cava infra-hepática e conectadas a um circuito de perfusão fechado preparado com um expansor de plasma e hemácias. Um oxigenador de fibra oca é incluído no circuito e acoplado a um trocador de calor para manter um pO2 de 70-100 mmHg a 38 °C. O NMP é obtido por um fluxo contínuo diretamente através da artéria e através de um reservatório venoso através da veia porta. Fluxos, pressões e valores de gases sanguíneos são monitorados continuamente. Para avaliar a lesão hepática, o perfusato e o tecido são amostrados em pontos de tempo predefinidos; A bile é coletada por meio de uma cânula no ducto biliar comum.

Introdução

O transplante de fígado é o único tratamento definitivo para insuficiência hepática em estágio terminal; no entanto, seu sucesso é limitado por um desequilíbrio persistente entre os pacientes em lista de espera e a disponibilidade de órgãos potenciais doadores1. Para aumentar o pool de doadores, os critérios de doadores foram gradualmente estendidos na última década, incluindo idade avançada do doador, esteatose hepática e doação após morte circulatória (DCD)2,3. Durante um procedimento de DCD, o fígado invariavelmente sofre um período de isquemia quente entre a retirada da terapia de suporte à vida, declaração de óbito e resfriamento e preservação in situ, agravando a lesão de isquemia-reperfusão (IRI)4. Como resultado, os fígados DCD estão associados a um aumento da incidência de disfunção precoce do aloenxerto e complicações biliares 5,6.

Para esses fígados de doadores de alto risco, a preservação convencional com armazenamento refrigerado estático não oferece proteção suficiente contra IRI. Até aqui, estratégias alternativas de preservação, como a perfusão normotérmica por máquina (NMP), ganharam força considerável. Durante a perfusão normotérmica da máquina, o fígado é conectado ex situ a um circuito isolado e perfundido com um perfusato oxigenado e enriquecido com nutrientes à temperatura corporal. Ensaios clínicos sugerem que o NMP reduz a lesão hepatocelular, refletida pela redução do pico de liberação de transaminases e disfunção precoce do enxerto7. No entanto, pouco se sabe sobre a biologia das células hepáticas durante o NMP8.

Os modelos animais têm sido fundamentais na evolução do transplante de fígado. Em contraste com os modelos de roedores, o porco é considerado de maior valor translacional, pois o fígado suíno é anatômica e fisiologicamente próximo aos humanos, com tamanho de órgão e composição biliar semelhantes. No entanto, os modelos de transplante de fígado suíno são trabalhosos, difíceis de padronizar e têm um custo financeiro significativamente maior.

O NMP do fígado suíno pode ser usado para servir a diferentes propósitos. Pode ser aplicado para mimetizar o transplante ex situ ao usar um perfusato baseado em sangue total, para preservar o fígado de um doador em um ambiente protetor com um perfuso baseado em glóbulos vermelhos depletados de leucócitos, para avaliar potenciais biomarcadores que predizem a função hepática ex situ antes do transplante ou como uma plataforma para investigar a terapia regenerativa 9,10,11.

A adoção de modelos de NMP de fígado suíno é desafiadora, enquanto aspectos técnicos cirúrgicos e relacionados à perfusão são pouco descritos. Em nosso laboratório de pesquisa, adotamos a configuração NMP originalmente descrita por Butler et al.12 para desenvolver e validar um modelo de perfusão hepática isolada ex situ suína de 24 horas que poderia ser usado tanto para preservar um enxerto hepático para transplante quanto para mimetizar um transplante. Aqui, descrevemos um protocolo passo a passo; uma estrutura metodológica e possíveis armadilhas são publicadas em outro lugar9.

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Protocolo

Todos os experimentos foram conduzidos após a aprovação do comitê de cuidados com animais da KU Leuven e de acordo com as diretrizes europeias.

1. Informações sobre animais

NOTA: Suínos TOPIGS TN70 machos, com 3 meses de idade, com peso corporal de aproximadamente 30 kg e peso hepático de 600-700 g são usados para este protocolo de estudo.

  1. Manter os animais em ritmo dia/noite de 12 h em baias individuais com livre acesso a alimentos e água da torneira e contato visual, olfativo e auditivo entre eles.
  2. Certifique-se de que os animais cheguem pelo menos 2 dias antes da cirurgia para se acostumar com o ambiente. Jejue os porcos por 12 h antes da cirurgia com livre acesso à água.
    NOTA: A anestesia é mantida com isoflurano e a analgesia com fentanil. Durante a anestesia, o eletrocardiograma, a oximetria de pulso, a capnografia e a pressão arterial são monitorados continuamente. Os experimentos são terminais; Os porcos são sacrificados por exsanguinação enquanto obtêm o fígado sob anestesia geral e analgesia contínuas.

2. Preparação do esquema de perfusão

  1. Instalação do kit de perfusão descartável
    1. Fixar o reservatório a uma altura fixa, cerca de 15 cm mais alta do que o recipiente do fígado.
    2. Conecte o cabeçote da bomba ao slot designado na bomba centrífuga. Conecte o tubo de oxigênio ao oxigenador. Conecte os tubos de entrada e saída do aquecedor/resfriador às ranhuras designadas no oxigenador.
    3. Instale uma válvula de aperto no tubo de saída sob o reservatório. Instale a segunda válvula de aperto no tubo de entrada para o reservatório após a conexão em Y, onde o outro tubo alimentará a artéria hepática.
      NOTA: A primeira válvula de aperto controlará o fluxo de entrada na veia porta. Fechar a segunda válvula de aperto aumentará o fluxo e, portanto, também a pressão na artéria hepática.
    4. Instale o sensor de fluxo distal da primeira válvula de aperto no tubo de saída do reservatório. Instale o segundo sensor de fluxo no tubo de entrada no cabeçote da bomba.
      NOTA: O primeiro sensor de fluxo medirá o fluxo na veia porta. O segundo sensor de fluxo medirá o fluxo de saída da veia cava.
    5. Corte o tubo de saída do oxigenador e insira o filtro arterial na direção correta.
      NOTA: Corte o tubo em no máximo 2 cm após o oxigenador; se for deixado por muito tempo, dobrará quando o tubo ficar mais macio quando for perfundido com um perfusato a 37 °C. Se ainda dobrar, apoie o filtro arterial amarrando-o ao suporte do reservatório.
  2. Instalação do tubo de recirculação de vazamento
    1. O kit de perfusão contém dois tubos com uma extremidade 3/16 e uma extremidade 1/16. Conecte os dois tubos um ao outro inserindo a extremidade 1/16 na extremidade 3/16. Conecte a extremidade 3/16 ao reservatório.
    2. Instale o tubo na bomba de rolos, considerando o sentido de rotação. Configure o diâmetro correto da tubulação e defina a velocidade para 15-18 rotações por minuto (rpm). Coloque a extremidade 1/16 no receptáculo do fígado e fixe se necessário.
  3. Calibração contínua da análise de gases sanguíneos em linha
    1. Ligue o analisador de gás e selecione Calibrar.
    2. Verifique o número de série correto no pacote do sensor e pressione OK.
    3. Retire o suporte do sensor arterial do e conecte o sensor a ele com uma tampa azul na parte superior e um filtro branco na parte inferior.
    4. Desaparafuse e remova a tampa branca sob o filtro; Não desaparafuse o filtro em si. Afrouxe a tampa de ventilação azul na parte superior, não a remova. Insira firmemente o sensor e o suporte do sensor no de calibração.
    5. Inicie a calibração. Quando a calibração estiver concluída, remova o sensor e o suporte do sensor do de calibração. Remova o filtro branco na parte inferior e aperte a tampa de ventilação azul na parte superior.
    6. Insira o sensor na linha de amostragem do kit de perfusão. Não inicie a análise de gás até que o circuito de perfusão esteja preparado.
  4. Preparação do circuito
    1. Insira uma linha de infusão em um saco de 500 mL de expansor de plasma e conecte-o ao reservatório. Coloque uma braçadeira de tubo na linha de saída do reservatório e encha o reservatório com 300 mL de expansor de plasma.
    2. Remova o tubo clamp e deixe o expansor de plasma preencher o circuito
    3. Desar o cabeçote da bomba e o oxigenador. O circuito agora está preparado. Ligue o aquecedor/refrigerador e ajuste-o para 38 °C
  5. Preparação das linhas de infusão
    1. Retire 5 mL (25.000 U) de uma solução de heparina 5 U / mL em uma seringa de 50 mL. Retire mais 25 mL de solução de NaCl a 0,9% para obter um volume total de 30 mL de solução de heparina (taxa de infusão: 1 mL / h).
    2. Dissolva 5 g de taurocolato de sódio em 50 mL de NaCl a 0,9% e transforme-o em 450 mL de NaCl a 0,9% para atingir uma concentração de 1%. É necessário um volume total de 168 mL (taxa de infusão: 7 mL / h).
    3. Retire 2 mL (200 U) de uma solução de insulina a 100 U / mL em uma seringa de 50 mL. Retire mais 28 mL de solução de NaCl a 0,9% para obter um volume total de 30 mL de solução de insulina (taxa de infusão: 1 mL / h).
    4. Retire 10 ml de tampão glicina (diluente) e adicione-o ao frasco para injetáveis de 0,5 mg de epoprostenol. Usando o filtro microbiano fornecido no kit de epoprostenol, retire 5 mL do frasco contendo o epoprostenol reconstituído com tampão glicina em uma seringa de 50 mL. Retire mais 25 mL de solução de NaCl a 0,9% para obter um volume total de 30 mL de solução de epoprostenol (taxa de infusão: 1 mL / h).

3. Indução da anestesia

  1. Sedação
    1. Prepare uma seringa com 2 mg/kg de xilazina e 8 mg/kg de Zoletil (4 mg/kg de tiletamina e 4 mg/kg de zolazepam), uma seringa com 10 mL de NaCl a 0,9%, uma válvula de três vias, uma linha de extensão e uma agulha intramuscular de 21 G.
    2. Coloque a agulha no músculo glúteo, injete a mistura de xilazina e tiletamina e lave a linha de extensão com o NaCl a 0,9%. Após 15 min, o porco é sedado.
    3. Pese o porco e transporte-o para a sala de cirurgia.
  2. Anestesia
    1. Ligue o ventilador
    2. Coloque o porco em decúbito dorsal na mesa de operação e fixe as extremidades.
    3. Pré-oxigenar com máscara de ventilação com 1,5 L de O2, 1,5 L de ar e 1% de isoflurano.
    4. Conecte uma sonda de saturação à cauda ou orelha. Conecte os três eletrocardiogramas para monitoramento contínuo.
    5. Insira um cateter de 22 G em uma veia do ouvido, conecte-o a uma válvula de três vias e inicie um gotejamento de fluidos intravenosos (IV) (Plasmalyte) a uma taxa de 400 mL / h.
    6. Coloque uma seringa de 60 mL com 50 μg/mL de fentanil em um driver de seringa automático. Dê um bolus de 1 mL e inicie uma infusão contínua a uma taxa de 0,16 mL / kg / h.
    7. Retire a máscara de ventilação e insira o laringoscópio, levantando a epiglote. Insira um tubo endotraqueal na traqueia e encha o balão para evitar vazamento de ar. Fixe o tubo com fita adesiva no focinho do porco.
      NOTA: Feche o isoflurano ao remover a máscara de ventilação.
    8. Conecte o tubo endotraqueal ao ventilador.
      NOTA: Configurações do ventilador: 0.4 L de volume corrente; 0,5 kPa de pressão média nas vias aéreas; Pressão das vias aéreas de 2,5 kPa; 0,5 kPa pressão expiratória final positiva; frequência de 15/min; 4,7-5,3 kPa de CO expirado2.
    9. Conecte o capnógrafo ao tubo endotraqueal.

4. Cirurgia

  1. Cateter venoso profundo e linha arterial
    1. Desinfete o campo cirúrgico com betadina e coloque campos cirúrgicos em ambos os lados da linha média.
    2. Faça uma incisão de 7 cm de comprimento do lado esquerdo da parte superior do esterno lateralmente ao músculo esternocleidomastóideo e coloque um afastador ortostático.
    3. Dissecar o tecido subcutâneo do músculo na direção lateral e identificar a veia jugular externa. Disseque a veia livre, ligando os ramos laterais, se presentes.
    4. Coloque duas ligaduras 2/0 ao redor da veia jugular externa e amarre a ligadura craniana.
    5. Corte a veia caudal da ligadura amarrada e insira um cateter venoso 12 French.
      NOTA: Certifique-se de que o cateter venoso esteja lavado com solução salina heparinizada antes da inserção.
    6. Fixe o cateter com a segunda ligadura. Se o cateter venoso na veia da orelha for frágil ou muito pequeno, troque o fluido IV e as linhas de fentanil para o cateter venoso profundo. Caso contrário, não o use até a coleta de sangue para o protetor de células.
    7. Dissecar a borda medial do músculo esternocleidomastóideo e substituir o afastador ortostático, abrindo o plano entre o músculo esternocleidomastóideo na face lateral e a traqueia na face medial.
    8. Remova o timo para expor a artéria carótida. Repita o passo 4.1.4 para a artéria.
    9. Insira a linha arterial na artéria carótida na direção caudal e fixe. Conecte a linha arterial à linha do monitor de pressão.
  2. Dissecção da aorta e veia cava
    1. Realize uma laparotomia na linha média do xifóide ao osso púbico.
      NOTA: Em porcos machos, caudal do pênis, faça uma incisão lateral de 1 cm da linha média para evitar danos à uretra subcutânea.
    2. Transecto do ligamento umbilical. Coloque um afastador abdominal. Puxe os intestinos para a esquerda lateral e cranialmente para visualizar a aorta e a veia cava.
      NOTA: O intestino suíno não é girado; portanto, nenhuma mobilização do cólon é necessária para obter acesso ao retroperitônio.
    3. Dissecar livremente aproximadamente 3 cm da aorta apenas cranial da bifurcação ilíaca e colocar duas ligaduras ao redor da aorta.
      NOTA: Há um grande vaso linfático perto da aorta; Tenha cuidado para não danificá-lo, pois isso desfocará o campo cirúrgico e complicará a dissecção.
    4. Dissecar a veia cava no mesmo nível da aorta e colocar duas ligaduras.
  3. Dissecção do ligamento gastroduodenal
    1. Inicie a dissecção no lado lateral do ligamento gastroduodenal, disseque o ducto colédoco e circunde com uma alça de vaso.
    2. Retraia o ducto biliar para o lado medial, expondo a veia porta. Remova um grande linfonodo no lado lateral da veia porta
    3. Libere a veia porta em direção ao pâncreas; Muitas vezes, há um ramo do estômago e do pâncreas que precisa ser ligado e seccionado. Circunde a veia porta com uma alça de vaso na lateral do fígado e uma ligadura na lateral do pâncreas. Retraia a veia porta lateralmente, certificando-se de não fechá-la.
    4. Identifique a artéria hepática comum e envolva-a com uma alça de vaso.
  4. Dissecção da aorta torácica
    1. Puxe o fígado caudal e abra a parte tendínea central do diafragma ventralmente da veia cava supra-hepática. Retraia o esôfago para o lado direito, expondo a aorta torácica.
    2. Dissecar livre do tecido circundante e tome cuidado para não danificar a veia ázigos.
      NOTA: Não é necessário circundar a aorta torácica; A dissecção deve ser estendida o suficiente para colocar uma pinça vascular.
  5. Preparação do cell saver
    1. Pendure o reservatório no anel preto, remova a tampa da perna única do adaptador e conecte o tubo à porta de saída de 3/8 de polegada na parte inferior do reservatório de coleta de sangue.
    2. Tampe o tubo de sucção/anticoagulante e conecte-o a uma das portas de entrada de sangue de 1/4 de polegada na borda superior do reservatório de coleta de sangue.
    3. Insira a tigela do kit de lavagem girando; Certifique-se de que um clique seja ouvido.
    4. Coloque o tubo na bomba de rolos e no divisor de tubos.
    5. Pendure uma bolsa de coleta de sangue de citrato fosfato dextrose adenina (CPDA)-1 no poste e certifique-se de que a conexão esteja firme.
      NOTA: Composição da bolsa de sangue CPDA-1 (63 mL): 2,99 g/L de ácido cítrico anidro; 26,3 g/L de citrato de sódio diídromo; 2,22 g/L de fosfato de sódio mono-histosado; 31,9 g/L de dextrose monohidratada; 0,275 g/L de adenina.
    6. Pendure o saco de lixo na lateral da máquina (certifique-se de que está bem fechado) e conecte-o ao kit de lavagem (tampa amarela).
    7. Conecte os dois tubos em forma de Y (tampas brancas) a um saco de 3 L de NaCl a 0,9%.
    8. Conecte o tubo com a tampa azul ao tubo adaptador na parte inferior do reservatório de coleta de sangue. Ligue o sistema de autotransfusão.
  6. Canulação da aorta e veia cava
    1. Administrar 500 UI/kg de heparina e deixar circular durante 2 min. Amarre a ligadura caudal ao redor da aorta e insira uma cânula de 20 French na aorta e fixe. O mesmo procedimento é repetido para a veia cava.
  7. Para mimetizar um procedimento de DCD, a isquemia quente é induzida pelo pinçamento da aorta torácica por um período de tempo, neste caso de 60 min.
    NOTA: Durante a isquemia quente, a drenagem cava e jugular é aberta e a coleta de sangue para o protetor de células é iniciada. Isso resulta em exsanguinação do porco.
  8. Lavando o fígado
    1. No final da isquemia quente, inicie um rubor frio com 2 L de solução de preservação gelada (4-6 °C) através da cânula aórtica e resfrie o abdômen com uma aplicação tópica de gelo derretido.
      NOTA: Durante a friação, todo o sangue restante é eliminado e coletado para o protetor de células.
    2. Quando os primeiros 2 L forem lavados, remova a cânula da aorta, amarre a ligadura na veia porta e canule a veia porta. Em seguida, fixe-o com o laço do vaso.
    3. Lave o fígado através da veia porta com mais 2 L de solução de preservação gelada (4-6 ° C).
  9. Hepatectomia
    1. Remova o gelo do abdômen. Tranecção do ducto biliar próximo ao pâncreas.
    2. Remova a cânula porta e divida a veia porta. Retraia os intestinos para a esquerda para expor a veia cava infra-hepática.
    3. Dissecar a veia cava livre do retroperitônio e dividir apenas as veias craniais das renais. Dissecar a artéria hepática comum até a artéria celíaca e a origem da aorta.
      NOTA: Cortar a cruz diafragmática direita pode melhorar a exposição.
    4. Divida a artéria gastroduodenal e corte a artéria celíaca com um remendo da aorta. Transeccione o omento menor próximo ao estômago cranialmente até o esôfago
    5. Mobilize o fígado esquerdo cortando o ligamento triangular esquerdo. Corte o diafragma no lado esquerdo da veia cava.
    6. Mobilize o fígado direito cortando o diafragma direito de ventral para dorsal, terminando caudalmente a partir da transecção da veia cava infra-hepática.
    7. Corte a veia cava supra-hepática e corte quaisquer anexos restantes. O fígado agora está livre; Retire e coloque em uma tigela com água gelada.
  10. Procedimento de mesa traseira
    1. Pese o fígado. Canular a veia porta com uma cânula de 25 French e fixar com ligaduras. Canular a artéria hepática com uma cânula reforçada de 14 French e fixar com ligaduras.
    2. Canule a veia cava infra-hepática e posicione a ponta da cânula no nível onde as veias hepáticas drenam na veia cava. Fixe com ligaduras.
    3. Coloque um cordão de bolsa ao redor da borda do diafragma para evitar sangramento de qualquer veia diafragmática e amarre a veia cava supra-hepática.
    4. Desareje a cânula porta e execute uma descarga da veia porta com 250 mL de expansor de plasma frio. Verifique se há vazamentos.
      NOTA: Verifique se há fluxo de saída adequado através da cânula caval.
    5. Após a descarga do portal, coloque um tubo clamp na cânula portal, garantindo que nenhum ar entre na cânula e na veia porta.
    6. Desar a cânula arterial e liberar 250 mL de expansor de plasma frio através da artéria hepática. Verifique se há vazamentos e corte os galhos laterais. Coloque uma braçadeira de tubo na cânula arterial e caval.

5. Perfusão da máquina normotérmica

  1. Perfusate
    1. Durante a preparação da mesa traseira, adicione os glóbulos vermelhos lavados produzidos pelo protetor de células ao circuito para obter o hematócrito desejado de 30%. Inicie a bomba para misturar os glóbulos vermelhos com o expansor de plasma. Inicie o analisador contínuo de gases.
      NOTA: A fórmula do volume de glóbulos vermelhos para obter o hematócrito desejado: (peso do fígado + volume de priming) x hematócrito / hematócrito desejado após a lavagem. O analisador contínuo de gases também fornece feedback sobre a temperatura de perfusão, que normalmente corresponde à configuração do aquecedor em 38 °C.
    2. Adicione 10 mL de gluconato de cálcio a 10%, 2 mL de heparina (10.000 UI) e 750 mg de cefuroxima em 10 mL de NaCl a 0,9% ao perfusato. Defina o misturador de gás manual para 0.5 L/min FiO2 de 21%.
  2. Início da perfusão
    1. Ligue os sensores de pressão, sensores de fluxo e bomba de rolos para recirculação de vazamentos.
    2. Coloque o fígado no recipiente. Coloque o tubo clamps no tubo de entrada portal e arterial e no tubo de saída caval do circuito e corte o conector em Y.
    3. Conecte as cânulas aos seus respectivos tubos de entrada e saída com uma peça de conexão em T entre eles. Evite que o ar entre no circuito.
    4. Instale torneiras de três vias nas peças de conexão em T e conecte as linhas de pressão a elas. Pressão zero nas linhas e inicie o monitoramento contínuo da pressão.
    5. Ajuste as válvulas de aperto, quase fechando-as completamente, para evitar fluxos suprafisiológicos e estresse endotelial.
    6. Inicie a perfusão removendo as pinças do tubo do fluxo portal. Imediatamente após o início da entrada do portal, remova o clamps da saída caval e ligue a bomba. A velocidade da bomba é controlada por pressão, portanto, procure uma pressão na saída caval entre -5 mmHg e -2 mmHg. Apontar para um fluxo portal de 0,75 mL / min / g de fígado.
    7. Quando a perfusão portal estiver estável e as pressões cavas forem adequadas, remova os grampos do tubo arterial. Apontar para pressões em torno de 55-60 mmHg e fluxos em torno de 0,25 mL / min / g de fígado.
  3. Manter a hemodinâmica de perfusão estável
    1. Cubra o fígado com uma cúpula de vidro ou filme plástico para evitar a perda de calor da superfície.
    2. Se o fluxo do portal for muito alto, feche a válvula de aperto no tubo de entrada do portal.
    3. Se a pressão cava se tornar muito negativa, o risco de criar um vácuo dentro da veia cava aumenta. Pressões negativas excessivas podem ser combatidas diminuindo a velocidade da bomba. Alternativamente, aumentar o fluxo de entrada através da veia porta reduz a pressão negativa do fluxo, fornecendo mais volume à veia cava.
    4. Se a pressão arterial estiver muito baixa, ela pode ser aumentada aumentando a velocidade da bomba ou fechando a válvula de aperto em direção ao reservatório portal para empurrar mais fluxo através do tubo de entrada arterial.
  4. Amostragem
    1. Obtenha as amostras de perfusato da válvula de três vias de saída caval ou de uma linha de amostragem designada entre o oxigenador e o reservatório portal.
    2. Obtenha biópsias por agulha durante a perfusão. Os orifícios das agulhas devem ser suturados, pois não há coagulação devido à heparinização do circuito.
    3. Colete a bile fixando uma cânula de 8 French no ducto biliar. Certifique-se de ligar o ducto cístico.

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Resultados

O protocolo de perfusão apresentado utiliza a autorregulação do fluxo sanguíneo hepático para atingir condições hemodinâmicas estáveis por até 24 h e simular a distribuição fisiológica do fluxo sanguíneo na veia porta e na artéria hepática. A Figura 1 representa uma visão geral esquemática do circuito de perfusão. A Figura 2A mostra uma distribuição consistente do fluxo sanguíneo, com a veia porta e a artéria hepática contribuindo com aproximadamente 75% e 25% d...

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Discussão

Aqui, detalhamos nossa experiência com NMP de fígado suíno. As vantagens desta técnica incluem alto valor translacional e versatilidade. O NMP do fígado suíno pode ser aplicado para investigar e aumentar a compreensão dessa técnica de preservação aprimorada ou, alternativamente, para mimetizar o transplante. Essa configuração permite o controle manual sobre todos os aspectos da perfusão, permitindo ajustar a pressão portal e arterial e o fluxo de várias maneiras.

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Os autores gostariam de agradecer a todos os estudantes de pesquisa da faculdade de medicina da KU Leuven envolvidos nesses experimentos.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Bomba de seringa Alaris GH PlusBD Care Fusion80023 ONU 01-G
Aparelho de anestesiaDrä GerTito
Cateter arterial Cavafix CertoBraun, Melsungen, AlemanhaBRAU4152557
Analisador de gases sanguíneosRadiometerABL815
Gluconato de cálcio 10%Braun, Melsungen, Alemanha570/13596667/1214
CapnógrafoDrä GerScio
Economia de célulasMedtronicAutoLog
Bomba centrífuga BiomedicusMedtronic85315 REV 3.0
Centrífuga Rotina 420R HettichVWR521-1156
Circuito de perfusão feito sob medidaMedtronicM323901C
Protetor de célula de conjunto descartávelMedtronicATLS24
DLP Cânula venosa de estágio único, reta 20FMedtronic66120
EpoprostenolGlaxoSmithKline Bélgica, Wavre, BélgicaFlolan
Fentanil-Janssen 0,05 mg/mLJanssenHK-08700
Sensor de fluxo BioPro TTEm-Tec12271
Formaldeído 4%VWRVWRK4078.9005
Congelador -80 ° CCientífico de New BrunswickU570-86
GeladeiraLiebherrCOPO 3513
GeloplasmaFresenius-Kabi, Bad Homburg, AlemanhaFlex livre
Resfriador de aquecedorStö ckert-Shiley, grupo de Sorin16-02-1950
Heparina 5000 IE/mLLeo Pharma, Ballerup, DinamarcaHeparinLeo
Cânula da artéria hepáticaMedtronicBIO-MEDICUS 12F
Solução de preservação de órgãos IGL-1Instituto Georges LopezIGL-1/1000/D
Analisador de gases sanguíneos em linhaTERUMOCalibrador 3MCDI 540/CDI 500
Insulina 200 UI ActrapidNovo Nordisk, Dagsvaerd, DinamarcaMEDI-00018
Isoflurano 1000 mg/g Vapor por inalaçãoChanelle PharmaIso-Vet
cateter intravenoso BD Insyte-W 20 GBD381334
Tanque de nitrogênio líquidoIsoterma KGWS22
Mersilene 250CM M3 USP2 / 0 ligapak não agulhadoJNJ médicoF4503
Mersilene 250CM M3.5 USP0 ligapak não agulhadoJNJ médicoRolamento F4504
Mersilene 5X70CM M3.5 USP0 não agulhadoJNJ médicoEH6935H
Mersilene 6X45CM M3 USP2/0 não agulhadoJNJ médicoEH6734H
Micro pipetas 1000 µ LSocorex82,51,000
MonitorizaçãoSiemensSC 8000
Plasmalyte ViafloBaxterPlasmalyte Viaflo
Cânula da veia portaLABORATÓRIOS CALMOS18F RV-40018
Sensor de pressãoStö ckert-Shiley, grupo de Sorin22-06-2000
Servorregulador de pressãoMedtronicBM 9505-2
Prolene 4-0JNJ médicoEH7151H
Bomba de rolosCobe Century EUA468048-000 REV C
Bicarbonato de sódio 8,4%Braun, Melsungen, Alemanha362 2339
Taurocolato de sódioSigma Aldrich, Burlington, EUA86339
Bisturi cirúrgico nº 24Swann Morton0211
Cateter venoso, 3 lúmens; 12FRFLECHAAK-12123-F
Vicryl Vio 250CM M2 USP3 / 0 gigapak não agulhadoJNJ médicoV1205G
Xilazina 2%VMD Pecuária farmacêuticaXYL-M 2%
Zinacef Cefuroxima 750 mgGlaxoSmithKline Bélgica, Wavre, BélgicaNDC 0173-0353-32
Zoletil 100VirbacZoletil 100

Referências

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