Artigo de método

Estabelecimento e Confirmação de um Modelo de Sobrecarga de Volume do Ventrículo Direito Pós-Natal em Camundongos

DOI:

10.3791/65372

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9 de junho de 2023

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1Department of Pediatric Intensive Care Unit, Shanghai Children’s Medical Center, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University, 2Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Shanghai Children’s Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University, 3Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Shanghai Ninth People’s Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, 4Department of Radiology, Huangpu Branch, Shanghai Ninth People’s Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, 5Institute of Pediatric Translational Medicine, Shanghai Children’s Medical Center, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University, 6Shanghai Institute for Pediatric Congenital Heart Disease, Shanghai Children’s Medical Center, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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Este protocolo apresenta o estabelecimento e a confirmação de um modelo de sobrecarga de volume (VO) do ventrículo direito pós-natal em camundongos com fístula arteriovenosa (FAV) abdominal, que pode ser aplicado para investigar como a VO contribui para o desenvolvimento cardíaco pós-natal.

Resumo

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A sobrecarga de volume (VO) do ventrículo direito (VD) é comum em crianças com cardiopatia congênita. Tendo em vista os distintos estágios de desenvolvimento, o miocárdio do VD pode responder diferentemente à VO em crianças em comparação com adultos. O presente estudo tem como objetivo estabelecer um modelo de VO do VD pós-natal em camundongos utilizando uma fístula arteriovenosa abdominal modificada. Para confirmar a confecção da VO e as seguintes alterações morfológicas e hemodinâmicas do VD, foram realizadas ultrassonografia abdominal, ecocardiograma e coloração histoquímica durante 3 meses. Como resultado, o procedimento em camundongos pós-natais mostrou uma taxa aceitável de sobrevivência e sucesso da fístula. Em camundongos VO, a cavidade do VD foi aumentada com uma parede livre espessada, e o volume sistólico foi aumentado em cerca de 30%-40% dentro de 2 meses após a cirurgia. A partir daí, a pressão sistólica do VD aumentou, observou-se regurgitação valvar pulmonar correspondente e surgiu pequeno remodelamento da artéria pulmonar. Em conclusão, a cirurgia de fístula arteriovenosa (FAV) modificada é viável para estabelecer o modelo de VO do VD em camundongos pós-natais. Considerando a probabilidade de fechamento da fístula e elevação da resistência da artéria pulmonar, a ultrassonografia abdominal e o ecocardiograma devem ser realizados para confirmar o status do modelo antes da aplicação.

Introdução

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A sobrecarga de volume (VO) do ventrículo direito (VD) é comum em crianças com cardiopatia congênita (CC), o que leva a remodelamento miocárdico patológico e mau prognóstico em longo prazo 1,2,3. Uma compreensão profunda do remodelamento do VR e das intervenções direcionadas precoces relacionadas é essencial para um bom desfecho em crianças com CC. Existem várias diferenças nas estruturas moleculares, funções fisiológicas e respostas a estímulos no coração de adultos e crianças 1,4,5,6.

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Protocolo

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Todos os procedimentos aqui apresentados estavam em conformidade com os princípios descritos na Declaração de Helsinque e foram aprovados pelo Comitê de Bem-Estar Animal e Estudos Humanos do Shanghai Children's Medical Center (SCMC-LAWEC-2023-003). Filhotes de camundongos C57BL/6 (P7, machos, 3-4 g) foram utilizados para o presente estudo. Os animais foram obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais). Os filhotes de camundongos e suas nutrizes (filhotes:mães = 6:1 em uma única gaiola) foram mantidos em condições laboratoriais livres de patógenos específicos sob um ciclo claro e escuro de 12 h a 22 ± 2 °C com livre acesso à água e dieta nutrici....

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Resultados

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Taxa de sobrevida e perviedade da FAV em 3 meses
Um total de 30 (75%) camundongos no grupo VO e 19 (95%) no grupo sham sobreviveram à cirurgia de FAV (Figura 4A). No grupo VO, oito camundongos morreram dentro de 1 dia após a cirurgia devido a sangramento excessivo (n = 5) ou canibalização (n = 3), enquanto dois camundongos morreram de causas desconhecidas em 1 mês.

Dos camundongos VO sobreviventes (n = 30), a ultrassonografia confirmou o estabe.......

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Discussão

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Anteriormente, o modelo clássico VO do VD foi criado utilizando regurgitação valvar21; no entanto, em comparação com a FAV, a cirurgia valvar cardíaca aberta pode exigir técnicas mais sofisticadas e pode estar associada a mortalidade significativamente maior, particularmente em camundongos pós-parto. Como estudos em animais demonstraram que o mesmo efeito da VO foi alcançado pela FAV22, a cirurgia de fístula abdominal modificada com menos trauma foi utilizada neste estudo.<.......

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse a declarar.

Agradecimentos

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciência da China (nº 82200309) e pelo Projeto de Inovação da Distinguished Medical Team em Ningbo (nº 2022020405)

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
70% EtanolTiandz, Chia
ACETAMINOPHEN Solução OralVistaPharm, Inc. Largo, FL 33771, EUANDC 66689-054-01
Máquina de anestesiaRWD Life Science, ChinaR550IP
Máscara de anestesiaRWD Life Science, China68680
C57BL / 6 camundongosXipu ' er-bikai Experimental Animal Co., Ltd (Shanghai, China)
Creme de depilaçãoVeet, FrançaVT-200
Kit de hematoxilina e eosina Biotecnologia Beyotime C0105M 
IsofluranoRWD Ciência da Vida, ChinaR510-22-10
Microscópio  Yuyan Instruments, ChinaSM-301
Agulhas de sutura cirúrgicaNINGBO MEDICAL NEEDLE CO., LTD, China
Plataforma de aquecimento termostáticoQingdao Juchuang Environmental Protection Group Co., Ltd, China
Dispositivo de ultrassomFUJIFILM VisualSonics, Inc.Vevo 2100incluem modo B, modo Doppler colorido e modo Doppler de onda pulsada
Gel de ultrassomParker Laboratories, Estados UnidosREF 01-08
Transdutor de ultrassomFUJIFILM VisualSonics, Inc.EM 400
Os modos de imagem

Referências

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  1. Sanz, J., Sanchez-Quintana, D., Bossone, E., Bogaard, H. J., Naeije, R. Anatomy, function, and dysfunction of the right ventricle: JACC state-of-the-art review. Journal of the American College of Cardiology. 73 (12), 1463-1482 (2019).
  2. Alonso-Gonzalez, R., Dimopoulos, K., Ho, S., Oliver, J. M., Gatzoulis, M. A.

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Etiquetas

Right Ventricular OverloadArteriovenous FistulaPostnatal Mouse ModelCongenital Heart DiseaseAbdominal UltrasoundEchocardiographyHemodynamic ChangesPulmonary Artery RemodelingHistochemical StainingStroke Volume

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