A microdiálise intradérmica é uma técnica minimamente invasiva utilizada para investigar a função microvascular na saúde e na doença. Tanto os protocolos dose-resposta quanto os de aquecimento local podem ser utilizados para explorar mecanismos de vasodilatação e vasoconstrição na circulação cutânea.
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Artigo de método
Microdiálise Intradérmica: Uma Abordagem para Investigação de Novos Mecanismos de Disfunção Microvascular em Humanos
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
A vasculatura cutânea é um tecido acessível que pode ser utilizado para avaliar a função microvascular em humanos. A microdiálise intradérmica é uma técnica minimamente invasiva utilizada para investigar mecanismos da musculatura lisa vascular e função endotelial na circulação cutânea. Essa técnica permite a dissecção farmacológica da fisiopatologia da disfunção endotelial microvascular indexada pela diminuição da vasodilatação mediada pelo óxido nítrico, um indicador de risco para o desenvolvimento de doença cardiovascular. Nessa técnica, uma sonda de microdiálise é colocada na camada dérmica da pele, e uma unidade de aquecimento local com uma sonda de fluxometria Doppler a laser é colocada sobre a sonda para medir o fluxo de hemácias. A temperatura local da pele é pinçada ou estimulada com aplicação direta de calor, e agentes farmacológicos são perfundidos através da sonda para estimular ou inibir vias de sinalização intracelular a fim de induzir vasodilatação ou vasoconstrição ou interrogar mecanismos de interesse (cofatores, antioxidantes, etc.). A condutância vascular cutânea é quantificada, e mecanismos de disfunção endotelial em estados patológicos podem ser delineados.
Introdução
A doença cardiovascular (DCV) é a principal causa de morte nos Estados Unidos1. A hipertensão arterial sistêmica (HA) é um fator de risco independente para acidente vascular cerebral, doença coronariana e insuficiência cardíaca e estima-se que afete mais de ~50% da população dos Estados Unidos2. A HA pode se desenvolver como uma DCV independente (HA primária) ou como resultado de outra condição, como doença renal policística e/ou distúrbios endócrinos (HAS secundárias). A amplitude das etiologias da HA dificulta as investigações sobre os mecanismos subjacentes e danos aos órgãos-alvo observados com a HA. Diversas e novas....
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Protocolo
Todos os procedimentos são aprovados pelo Comitê de Revisão Institucional da Universidade Estadual da Pensilvânia antes do recrutamento dos participantes.
1. Configuração do equipamento
- Ligue a unidade de aquecimento local e o medidor de vazão laser Doppler.
NOTA: Ambos devem ser calibrados antes da coleta de dados de acordo com as instruções do fabricante. O medidor de vazão laser Doppler deve ser conectado ao hardware de aquisição de dados com amostragem em 100 Hz (100 amostras/min) e registro contínuo em um software de aquisição de dados. Enquanto outros hardwares e softwares de aquisição de dados podem ser usados, para simp....
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Resultados
Protocolo dose-resposta à acetilcolina
A Figura 1A mostra um esquema detalhando o protocolo dose-resposta da ACh. A Figura 1B ilustra os traçados representativos dos valores de fluxo de hemácias (unidades de perfusão, UP; médias de 30 s) do protocolo padronizado de dose-resposta de ACh para um indivíduo ao longo do tempo. A Figura 1C ilustra um arquivo de dados brutos de um protocolo de d.......
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Discussão
A técnica de microdiálise intradérmica é uma ferramenta versátil na pesquisa vascular humana. Os pesquisadores podem alterar o protocolo para diversificar ainda mais suas aplicações. Por exemplo, descrevemos um protocolo dose-resposta de ACh, mas outras investigações sobre os mecanismos de vasoconstrição ou tônus vasomotor, em vez de vasodilatação isolada, têm utilizado abordagens dose-resposta de noradrenalina ou nitroprussiato de sódio 26,27,28,29,30,31.
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse e nada a divulgar.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Seringas de 1 mL | Seringas BD | 302100 | |
| Acetilcolina | Estados Unidos Farmacopeia | 1424511 | Dados piloto coletados em nosso laboratório indicam que a secagem da acetilcolina aumenta a variabilidade da resposta CVC; não seque, armazene em dessecador |
| Cotonetes de álcool | Mckesson | 191089 | |
| Baby Bee Syringe Drive | Bioanalytical Systems, Incorporated | MD-1001 | Neste estudo, foi utilizado o suporte opcional de 3 seringas (número catálico MD-1002) |
| Sondas Lineares de Microdiálise CMA 30 | Aparelho Harvard | CMA8010460 | |
| Monitor de Ponto Connex | WelchAllyn | 74CT-B | monitor automatizado de pressão arterial |
| Hive Syringe Pump Controller | Bioanalytical Systems, | Incorporated MD-1020 | Controla até 4 Baby Bee Syringe Drives |
| LabChart 8 | AD Instruments | **O hardware PowerLab e o software LabChart devem ser versões compatíveis | |
| Solução de Lactato de Ringer | Avantor (VWR) | 76313-478 | |
| Medidor de fluxo sanguíneo Doppler a laser | Moor Instruments | MoorVMS-LDF | |
| Kit de calibração da sonda Doppler a laser | Moor Instruments | CAL | |
| Sonda Doppler a | Moor Instruments | Linear VP12 | |
| Bioanalytical Systems, Inc. | MD-2000 | ||
| NG-nitro-l-arginina éster metílico | Sigma Aldrich | 483125-M | L-NAME |
| Iodopovidona / betadine | Dynarex | 1202 | |
| PowerLab C Dispositivo de aquisição de dados | AD Instruments | PLC01 | ** |
| Interface do instrumento PowerLab C | AD Instruments | PLCI1 | ** |
| Discos adesivos de sonda | Moor Instruments | conecta unidade de aquecimento local à pele | |
| Controlador de aquecedor de pele | Moor Instruments | moorVMS-HEAT 1.3 | |
| Sonda de aquecimento pequena | Moor Instruments | VHP2 | |
| Cortinas estéreis | Adriana | 89731 | |
| Gaze estéril | Dukal Corporation | 2085 | |
| Luvas cirúrgicas estéreis | Esteem Número de catálogo Cardinal Health | 8856N | seguido pelas iniciais do tamanho da luva e, em seguida, a letra "B" (por exemplo, 8856NMB para médio) |
| Tesoura cirúrgica | Cole-Parmer | UX-06287-26 |
Referências
- Xu, J. Q., Murphy, S. L., Kochanek, K. D., Arias, E. Mortality in the United States, 2021. NCHS Data Brief. 456, (2022).
- Tsao, C. W., et al. Heart disease and stroke statistics-2023 update: A report from the American heart association. Circulation. 147....
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Reimpressões e permissões
