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Artigo de método

"Avatar", um experimento de loop de trabalho ex vivo modificado usando tensão e ativação in vivo

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DOI:

10.3791/65610

18 de agosto de 2023

Neste artigo

Resumo

Este artigo detalha a metodologia para emular a produção de força muscular in vivo durante experimentos de loop de trabalho ex vivo usando um músculo "avatar" de um roedor de laboratório para avaliar as contribuições dos transientes de tensão e ativação para a resposta da força muscular.

Resumo

Os comportamentos de movimento são características emergentes de sistemas dinâmicos que resultam da produção de força muscular e da produção de trabalho. A interação entre os sistemas neural e mecânico ocorre em todos os níveis de organização biológica simultaneamente, desde o ajuste das propriedades musculares das pernas durante a corrida até a dinâmica dos membros interagindo com o solo. Compreender as condições sob as quais os animais mudam suas estratégias de controle neural para a mecânica muscular intrínseca ('preflexos') na hierarquia de controle permitiria que os modelos musculares predissessem a força muscular in vivo e trabalhassem com mais precisão. Para entender a mecânica muscular in vivo, é necessária a investigação ex vivo da força muscular e do trabalho sob condições de tensão e carga dinamicamente variáveis, semelhantes à locomoção in vivo. As trajetórias de deformação in vivo normalmente exibem mudanças abruptas (ou seja, transientes de deformação e velocidade) que surgem de interações entre ativação neural, cinemática musculoesquelética e cargas aplicadas pelo ambiente. O principal objetivo de nossa técnica de "avatar" é investigar como os músculos funcionam durante mudanças abruptas na taxa de tensão e carga, quando a contribuição das propriedades mecânicas intrínsecas para a produção de força muscular pode ser maior. Na técnica "avatar", a abordagem tradicional de loop de trabalho é modificada usando trajetórias de deformação medidas in vivo e sinais eletromiográficos (EMG) de animais durante movimentos dinâmicos para conduzir os músculos ex vivo através de vários ciclos de alongamento e encurtamento. Essa abordagem é semelhante à técnica de loop de trabalho, exceto que as trajetórias de deformação in vivo são dimensionadas adequadamente e impostas aos músculos de camundongos ex vivo conectados a um servo motor. Esta técnica permite: (1) emular padrões de deformação in vivo, ativação, frequência de passada e loop de trabalho; (2) variar esses padrões para corresponder às respostas de força in vivo com mais precisão; e (3) variar características específicas de tensão e / ou ativação em combinações controladas para testar hipóteses mecanicistas.

Introdução

Animais em movimento alcançam feitos atléticos impressionantes de resistência, velocidade e agilidade em ambientes complexos. A locomoção animal é particularmente impressionante em contraste com as máquinas de engenharia humana - a estabilidade e a agilidade dos robôs, próteses e exoesqueletos com pernas atuais permanecem ruins em comparação com os animais. A locomoção com pernas em terreno natural requer controle preciso e ajustes rápidos para alterar a velocidade e manobrar características ambientais que atuam como perturbações inesperadas1,2,3,....

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Protocolo

Todos os estudos com animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais da Universidade do Norte do Arizona. Músculos extensores digitais longos (EDL) de camundongos selvagens de ambos os sexos (linhagem B6C3Fe a/a-Ttnmdm/J), com idade entre 60 e 280 dias, foram utilizados no presente estudo. Os animais foram obtidos de uma fonte comercial (veja a Tabela de Materiais) e estabelecidos em uma colônia na Universidade do Norte do Arizona.

1. Seleção da trajetória da cepa in vivo e preparação para uso durante experimentos de ciclo de trabalho ex vivo

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Resultados

O objetivo dos experimentos com "avatar" é replicar in vivo produção de força e saída de trabalho tão próximas quanto possível durante ex vivo experimentos de ciclo de trabalho. Este estudo optou por utilizar o EDL de camundongo como um "avatar" para o MG de rato, porque o EDL de camundongo e o MG de rato são ambos compostos principalmente por músculos de contração rápida20,21. Ambos os músculos são movimentadores primários da articulação do tor.......

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Discussão

Enquanto os organismos se movem perfeitamente pelas paisagens, as cargas e tensões subjacentes que os músculos experimentam variam drasticamente 1,6,23. Durante os experimentos de locomoção in vivo 1,24 e "avatar", os músculos são estimulados submaximamente sob condições cíclicas e não estáveis. As relações força-comprimento isométricas e força-velocidade isotôn.......

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Divulgações

Todos os autores reconhecem que não há conflito de interesses.

Agradecimentos

Agradecemos ao Dr. Nicolai Konow por fornecer os dados utilizados neste estudo. Financiado pela NSF IOS-2016049 e NSF DBI-2021832.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Sutura de Seda Trançada Não Absorvível 4-0 Mersilk 734H
Cloreto de Cálcio Dihidratado (CaCl2)Sigma-Aldrich1086436Krebs-Henseleit  solução
Dextrose Sigma-AldrichD9434Krebs-Henseleit  solução
HEPESSigma-AldrichPHR1428Krebs-Henseleit  solução
Ácido Hidlorídrico (HCl) Sigma-Aldrich1.37055Krebs-Henseleit  solução
LabView Data Collection Sulfato de Magnésio Lab-View
(MgSO4)Sigma-AldrichM7506Krebs-Henseleit  solução
Cloreto de potássio (KCl) Sigma-AldrichP3911Krebs-Henseleit  solução
Fosfato de Potássio Monobásico (KH2PO4)Sigma-Aldrich5.43841Krebs-Henseleit  solução
S88 EstimuladorGramaM643H05Disponível para compra no Ebay
Série 300B Sistema de AlavancaAurora1200Ainclui banho de tecido de jaqueta de água
Bicarbonato de Sódio (NaHCO3)Sigma-AldrichS5761Krebs-Henseleit  solução
Cloreto de Sódio (NaCl) Sigma-AldrichS9888Krebs-Henseleit  solução
Hidróxido de Sódio (NaOH)Sigma-AldrichS5881Krebs-Henseleit  solução
Ratos Tipo SelvagemJackson LaboratórioB6C3Fe a/a Ttn mdm/J
de

Referências

  1. Dickinson, M. H. How Animals move: an integrative view. Science. 288 (5463), 100-106 (2000).
  2. Sponberg, S., Abbott, E., Sawicki, G. S. Perturbing the muscle work loop paradigm to unravel the neuromechanics of unsteady locomotion. Journal of Experimental Biology

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Reimpressões e permissões

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