Artigo de método

Melhorando o desenvolvimento e o crescimento de ratos infantis com paralisia cerebral usando manipulações seletivas da coluna vertebral

DOI:

10.3791/65659

⸱

2 de fevereiro de 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Yunnan University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este estudo ilustra o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral, enfatizando o procedimento específico e o protocolo padronizado. Para avaliar o protocolo, foram realizadas medidas de peso corporal, teste Rotarod, escore de falha no pé, outros testes comportamentais e detecção de hormônio do crescimento.

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A paralisia cerebral (PC) é uma doença pediátrica refratária com alta prevalência, alta taxa de incapacidade e tratamento difícil. Atualmente, uma variedade de tratamentos é usada para PC. O tratamento envolve terapia medicamentosa e não medicamentosa. A terapia externa da medicina tradicional chinesa é um método de tratamento muito distinto na terapia não medicamentosa. Como uma das terapias externas da medicina tradicional chinesa, a massagem é usada no tratamento da paralisia cerebral e tem boa eficácia, pequenos efeitos colaterais e forte operabilidade. Como parte da terapia externa da MTC, a manipulação seletiva da coluna vertebral pode efetivamente promover o crescimento e o desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. A operação foi dividida principalmente em quatro etapas: primeiro, o método de fricção foi aplicado na coluna e em ambos os lados da coluna por 1 min. O método de prensagem e amassamento foi aplicado na coluna por 5 min e nos músculos de ambos os lados da coluna por 5 min. Em segundo lugar, foram realizadas prensas e amassos nos pontos de acupuntura locais sensíveis na coluna por 2 minutos. Em terceiro lugar, o membro afetado foi tratado pelo método de torção por 1 min. Quarto, o método de fricção foi aplicado em uma linha média da testa até a parte de trás do cérebro por 1 min. Este estudo teve como objetivo usar a manipulação seletiva da coluna vertebral para tratar ratos infantis com paralisia cerebral. O peso, o teste Rotarod, o escore de falha do pé e o hormônio do crescimento de ratos infantis com paralisia cerebral foram detectados para entender o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. Os resultados mostraram que ele pode promover o ganho de peso, melhorar a capacidade de equilíbrio e a função motora, promover o crescimento e o desenvolvimento de ratos com paralisia cerebral infantil, promover a secreção do hormônio do crescimento e aumentar a temperatura das partes sensíveis das costas.

Introdução

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A Paralisia Cerebral (PC), causada por danos não progressivos ao cérebro no feto ou na infância, é um grupo de distúrbios caracterizados por desenvolvimento motor e postural anormal1, distúrbios do desenvolvimento, incluindo ganho de peso lento 2,3,4 e disfunção motora. A incidência de paralisia cerebral na China é de 2,48% e a prevalência é de 2,46‰ (1-6 anos)5, respectivamente. Estudos estrangeiros relataram uma prevalência de 2,4%-3,6%6. A paralisia cerebral é uma das principais causas de lesões físicas e incapacidade em crianças, entre as quais os distúrbios do equilíbrio e do movimento afetam significativamente as atividades de vida diária1. A paralisia cerebral pode ser causada por parto prematuro, infecção, genética, isquemia e hipóxia neonatal, icterícia neonatal e outros fatores patogênicos complexos e diversos7. O objetivo do tratamento da paralisia cerebral é melhorar a função física e a qualidade de vida 8. Atualmente, os métodos de tratamento para paralisia cerebral incluem estimulação cerebral profunda9, treinamento de marcha assistido por robô10, acupuntura de punho e tornozelo11 e acupuntura meridiana combinada com massagem12.

A medicina tradicional chinesa (MTC) tem sido cada vez mais utilizada como tratamento eficaz para a PC13,14. A massagem, como parte dela, também desempenha um certo papel. Por exemplo, a manipulação seletiva da coluna vertebral pode regular o estado de hidroximetilação do DNA para regular o desenvolvimento neural e melhorar a função de aprendizado e memória15. No tratamento de ratos infantis com paralisia cerebral, a manipulação seletiva da coluna vertebral pode melhorar a homeostase inflamatória do córtex e do hipocampo, regulando o nível de metilação das citocinas inflamatórias TNF-α e da região promotora do gene IL-1016 e desempenhar um papel terapêutico positivo na capacidade de equilíbrio de ratos infantis com paralisia cerebral16. A manipulação seletiva da coluna vertebral pode melhorar a função cognitiva de ratos infantis com paralisia cerebral17. A manipulação seletiva da coluna vertebral foi utilizada no tratamento de ratos infantis com paralisia cerebral, e observou-se que também teve efeitos terapêuticos sobre seu crescimento e desenvolvimento18.

O objetivo deste estudo é ilustrar o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral, medindo o peso corporal, o teste Rotarod19, o escore de falha do pé20,21 e outros testes comportamentais e a detecção do hormônio do crescimento, e fornecer ideias de pesquisa para o pessoal relevante.

Protocolo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Animal Experimental da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan. Todas as operações experimentais em animais seguiram o princípio 3R de redução, otimização e substituição de animais experimentais (nº R-06202018). Ratos Sprague Dawley (SD) saudáveis (14 machos e 7 fêmeas) de grau livre de patógenos específicos (FPS) com peso corporal médio de 250-300 g foram utilizados neste experimento. Os ratos foram criados na sala de animais SPF da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan, número do certificado: SYXK(Yunnan)K2022-0004. Todos os ratos foram alojados em um ciclo claro/escuro de 12 horas com um ambiente controlado por luz natural a uma temperatura ambiente de 22-26 °C e uma umidade relativa de 40%-50%. Após 1 semana de alimentação adaptativa, a relação macho/fêmea foi mantida em 1:2. Após 1 semana, as ratas prenhes foram alojadas em uma única gaiola, alimentadas normalmente, comendo e bebendo livremente. Após o parto natural, foram selecionados os ratos saudáveis nascidos das ratas prenhes. Os ratos infantis foram divididos nos grupos Simulado, Controle e Tratamento para observar o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. De cada grupo, 6 filhotes machos foram selecionados para o experimento. O grupo Tratamento foi tratado com manipulação seletiva da coluna vertebral a partir do5º dia após o nascimento, e o tratamento foi administrado por 6 dias, seguido de repouso por 1 dia.

1. Estabelecendo o modelo de paralisia cerebral

  1. Esterilize o microscópio, tesouras oftálmicas, fórceps, sutura, placa cirúrgica, tesoura, cotonetes e luvas necessárias para a cirurgia e coloque-os na sala de cirurgia.
  2. Separe um filhote temporariamente de sua mãe no terceiro dia de vida, coloque-o em um único quadro e transporte-o para a sala de cirurgia estéril.
  3. Meça o peso corporal. Inclua ratos infantis com peso corporal variando de 7 a 9 g no estudo e exclua aqueles que não se conformaram com o peso corporal. Divida aleatoriamente os ratos infantis em grupos Simulados, Controle e Tratamento.
  4. Induza a anestesia com isoflurano na concentração de 2% e mantenha a anestesia a 1% usando uma máquina de anestesia com gás inalatório de pequenos animais.
    NOTA: Este experimento é principalmente para observar os efeitos da manipulação seletiva da coluna vertebral no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. A anestesia foi realizada de acordo com os requisitos gerais durante o processo de modelagem, e a analgesia adicional afetará os resultados da observação.
    1. Conecte o anestésico de gás de pequeno porte animal à fonte de alimentação e abra a válvula conectada à caixa de indução.
    2. Coloque o rato infantil na caixa de indução, gire o botão de ajuste de concentração e ajuste a concentração de isoflurano para 2% para induzir a anestesia.
    3. Quando o rato bebê estiver inconsciente, remova-o da caixa de indução. Coloque-o na placa de operação e feche o canal 1 da máquina de anestesia.
    4. Coloque o rato infantil em decúbito dorsal. Fixe a máscara de inalação de anestesia para manter a anestesia.
    5. Abra o canal conectado à máscara de inalação de anestesia. Mantenha a anestesia girando o botão de ajuste de concentração e ajustando a concentração de isoflurano para 1%.
      NOTA: Após a anestesia, avalie a profundidade do anestésico levantando e beliscando à força os dedos dos pés e a cauda dos ratos bebês. Uma ausência de resposta quando os dedos dos pés e a cauda foram levantados e comprimidos confirma que a profundidade da anestesia foi atingida.
  5. Desinfete a pele do pescoço do rato bebê três vezes com álcool a 75% e faça uma incisão longitudinal de 1 cm na pele do pescoço para expor o tecido subcutâneo.
    NOTA: A incisão longitudinal da pele do pescoço não causa defeito na pele.
  6. Corte a pele do pescoço esquerdo sob um microscópio de dissecação e use uma pinça oftálmica para separar sem rodeios o músculo esterno-hióideo e o músculo esternomastóideo esquerdo.
    1. Encontre a artéria carótida comum esquerda e o nervo vago e separe a artéria carótida comum esquerda e o nervo vago.
    2. No grupo Modelo, corte a artéria carótida comum esquerda com uma caneta de coagulação elétrica. Limpe e suture a incisão no pescoço.
    3. No grupo Sham, separe a artéria carótida comum esquerda do nervo vago.
  7. Após a operação, coloque o rato em banho-maria termostático em decúbito ventral para ressuscitação por 1 h.
    NOTA: Após a recuperação natural, a cor da pele dos membros e de todo o corpo ficou avermelhada. O rato bebê poderia mover seus membros de forma autônoma e engatinhar de forma independente.
  8. Colocar os ratos ressuscitados dos grupos de controlo e tratamento numa incubadora fechada a 37 °C em decúbito ventral. Introduza uma mistura de 5% de oxigênio e 95% de gás nitrogênio para induzir hipóxia e remova os ratos após 2 h.
  9. Remova o rato bebê que completou o processo de hipóxia da caixa de hipóxia e coloque-o em decúbito ventral em uma caixa com conteúdo normal de oxigênio atmosférico. Colocá-los em banho-maria termostático a 37 °C durante 1 h. Após a recuperação completa, transfira o rato bebê de volta para a gaiola da mãe.
    NOTA: Depois de se recuperar naturalmente, a cor da pele dos membros e de todo o corpo ficou vermelha. O rato bebê podia mover seus membros de forma autônoma e engatinhar de forma independente.
  10. Colocar o rato bebé do grupo Sham numa caixa com teor normal de oxigénio atmosférico e colocar a caixa num banho-maria termostático a 37 °C durante 1 h. Após a recuperação completa, coloque o rato bebê de volta na gaiola da mãe para alimentação.
    NOTA: Depois de se recuperar naturalmente, a cor da pele dos membros e de todo o corpo ficou vermelha. O rato bebê podia mover seus membros de forma autônoma e engatinhar de forma independente. Todo o processo de operação foi concluído na sala de operações especiais da sala de animais SPF da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan. Durante a ressuscitação e hipóxia, o operador observa o rato bebê o tempo todo para evitar a morte causada por postura inadequada. Ratas lactantes foram alimentadas com ração de reprodução livre de patógenos específicos (FPS) e, quando os filhotes foram capazes de se autoalimentar, os filhotes foram desmamados (dia 21 pós-natal) e alimentados com ração de manutenção com FPS.

2. Experimento de reflexo de endireitamento

  1. No4º dia após o nascimento (2º dia após a modelagem), realizar o experimento do reflexo de endireitamento para verificar se o modelo foi bem-sucedido (Figura 1 e Tabela 1).
    1. Levante a cauda do rato bebê, descanse suas costas em uma tábua horizontal e use o polegar e o indicador para prender a barriga e o pescoço. Verifique se o rato pode retornar à sua posição normal. A incapacidade do rato de retornar à posição normal a partir da posição anormal devido à perda do reflexo de endireitamento é registrada como um modelo bem-sucedido16,22.
    2. Registre o tempo que cada grupo de filhotes leva para passar da posição supina para a posição prona. Comece a registrar o momento em que os dedos polegar e indicador são liberados simultaneamente na posição supina, permita que o rato bebê vire para a posição de bruços e pare de gravar quando as patas dianteiras e traseiras forem colocadas no chão. Se o rato bebê não puder retornar à posição normal por mais de 20 s, registre o tempo de endireitamento como 20 s.

3. Preparação antes da operação

  1. Após a modelagem, separe o rato bebê com paralisia cerebral de sua mãe e leve-o para uma sala de cirurgia com temperatura ambiente constante de 22-26 °C por 2 min para se adaptar ao ambiente circundante.
  2. Use luvas descartáveis para manter a palma da mão suave e macia e a temperatura entre 36-37 °C.
  3. Coloque o rato suavemente na palma da mão esquerda. Dobre o polegar esquerdo para cobrir os olhos do rato por 2 min para formar um campo de visão escuro para que o rato possa se adaptar ao ambiente da palma da mão do operador. Use os dedos indicador e médio direitos para manipulação.
    NOTA: Cobrir os olhos do rato bebê pode criar um ambiente escuro. Isso evitará que o rato bebê fique agitado por causa do ambiente inseguro e incerto que afeta os resultados experimentais.

4. Dividindo os ratos nos grupos Controle e Tratamento

  1. No segundo dia após a modelagem (P5), verificar o modelo pelo teste do reflexo de endireitamento e dividir aleatoriamente os ratos infantis nos grupos Controle e Tratamento. Realize manipulação seletiva da coluna vertebral nos ratos infantis do grupo de tratamento.
  2. Coloque o rato bebê na posição de bruços. Certifique-se de que a lombada seja sempre mantida em um nível reto (Figura 2A).
  3. Massageie a coluna e ambos os lados da coluna por 1 min usando o método de fricção e use o método de pressionar e amassar a coluna e os músculos de ambos os lados da coluna por 5 min.
    1. Massageie a coluna e a pele de ambos os lados usando o método de fricção para relaxar o rato bebê e aliviar totalmente sua tensão. Certifique-se de que a frequência de fricção seja de 100 a 120 vezes/min por 1 minuto depois que o rato bebê estiver quieto e sem agitação.
      1. Use o dedo indicador direito, o dedo médio e o dedo anelar como superfície de contato e faça um movimento circular de fricção na superfície da pele da coluna cervical, torácica e lombar da cabeça à cauda sem perturbar o tecido subcutâneo.
      2. Com o dedo indicador direito, o dedo médio e o dedo anelar como superfícies de contato, realizar movimentos circulares na superfície da pele do músculo trapézio, glúteo superficial, músculo romboide cervical, músculo romboide peitoral, músculo grande dorsal e músculo oblíquo externo em ordem da cabeça à cauda de acordo com o padrão anatômico animal23, sem perturbar o tecido subcutâneo.
    2. Trate a coluna vertebral primeiro pressionando e amassando por 5 min, seguido de pressionar e amassar os músculos de ambos os lados da coluna por 5 min.
      1. Aplique o método de amassar na coluna a uma frequência de 120 vezes/min por 5 min. Use o indicador direito ou o dedo médio como superfície de contato. Da cabeça à cauda, faça amassamento circular na pele superficial das vértebras cervicais, torácicas e lombares, combinado com pressão para baixo (1,77 ± 0,54 N). Certifique-se de que a força atinja as vértebras cervicais, vértebras torácicas, vértebras lombares e ligamentos supraespinhosos.
      2. Aplique o método de pressão e amassamento nos músculos de ambos os lados da coluna a uma frequência de 120 vezes/min por 5 min. Use o dedo indicador direito ou o dedo médio como superfície de contato. De acordo com o padrão anatômico animal23, pressione a superfície da pele do trapézio, glúteo superficial, colo romboide, peitoral romboide, grande dorsal e músculos abdominais oblíquos externos em um movimento redondo de amassamento da cabeça à cauda, com uma força de 1,77 ± 0,54 N, de modo que a força atinja o trapézio, glúteo superficial, colo romboide, peitoral romboide, grande dorsal e músculos abdominais oblíquos externos (Figura 2B)23.
  4. Pressione e amasse os pontos de acupuntura espinhais sensíveis (como Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu e Feishu24) a uma frequência de 100-120 vezes/min por 2 min. Usando o dedo indicador ou médio direito como superfície de contato, amasse circular e pressione para baixo (1,77 ± 0,54 N) na superfície da pele dos pontos de acupuntura locais (como Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu e Feishu) em ratos infantis com paralisia cerebral.
    NOTA: Os pontos de acupuntura foram selecionados de acordo com o "Mapa de Pontos de Acupuntura Animal" formulado pelo Ramo de Pesquisa de Acupuntura Experimental da Sociedade Chinesa de Acupuntura (Figura 3)25.
  5. Estimule localmente o membro afetado pelo método de torção a uma frequência de 25 vezes/min por 1 min.
    1. Com o polegar direito e o indicador, belisque o membro afetado do rato infantil com paralisia cerebral, exercendo força simétrica nos dois dedos. Certifique-se de que a força seja suave e a ação seja leve e suave. Esfregue o extensor radial do carpo direito, extensor comum dos dedos, extensor ulnar do carpo, falange, articulação interfalangeana, músculo gastrocnêmio, músculo semitendíneo, osso metatarso e articulação intermetatarsal de rato infantil para frente e para trás.
  6. Aplique o método de fricção na linha média da testa até a parte de trás do cérebro a uma frequência de 100-120 vezes/min por 1 min. Use o dedo indicador direito como superfície de contato e use o método de fricção em uma linha imaginária da testa até o meio do cérebro posterior do rato infantil (ou seja, uma linha de Baihui, Fengfu e Dazhui) (Figura 3).
    NOTA: A massagem é aplicada principalmente na pele. É um movimento circular na superfície da pele da cabeça do rato infantil com paralisia cerebral. Não precisa conduzir o movimento muscular subcutâneo de um rato infantil com paralisia cerebral.
  7. No final do procedimento, deixe o rato bebê sozinho por 30 minutos antes de devolvê-lo à gaiola da mãe rato.
    NOTA: Com a idade, o cabelo dos ratos infantis torna-se espesso, por isso é necessário remover os pelos traseiros de todos os grupos de ratos infantis durante a operação de massagem para evitar afetar o efeito experimental.

5. Detecção da temperatura dos pontos de acupuntura locais

  1. Use um termovisor infravermelho para detectar a temperatura da área do ponto de acupuntura local antes e depois da operação.
    1. Antes da massagem seletiva da coluna, conecte a interface Type-C do telefone celular com a interface USB do dispositivo de imagem infravermelha com um cabo de dados e ligue o botão Liga / Desliga.
    2. Clique em Analisar para entrar no terminal de celular do software, selecione Foto para entrar no modo de foto e clique no modo Picture in Picture no canto inferior direito.
    3. Foque a câmera nas áreas de acupuntura dos pontos de acupuntura Dazhui, Xinshu e Shenshu (Figura 3) nas costas do rato bebê para tirar fotos de temperatura. Clique em Foto para concluir a captura da imagem e salve-a no formato JPG.
    4. Conecte o computador com um cabo de dados e carregue a imagem salva em um computador instalado com o software Fotric para análise.
      1. Abra o software Fotric no PC, abra o arquivo local e encontre o local da imagem.
      2. Selecione a área de trabalho do Thermogram, selecione a imagem a ser analisada e entre na interface de análise.
      3. Na tela Análise , selecione a imagem na caixa Imagem térmica à direita e abra o Bloqueio.
      4. Selecione a função de zoom, ajuste o tamanho da imagem térmica e a caixa esquerda Imagem de fundo para coincidir e desative o bloqueio à direita.
      5. Encontre o retângulo de medição Definir na barra de ferramentas na parte superior e marque o ponto de acupuntura a ser detectado na figura.
      6. Clique em Relatório à direita para registrar o valor da temperatura.

6. Detecção da função do equilíbrio motor de ratos infantis com paralisia cerebral

  1. Use o teste Behavioral Rotarod19 para detectar a função motora de ratos nos grupos Simulado, Controle e Tratamento no61º dia após o nascimento.
    1. Configurações de parâmetros: Inicie o interruptor de alimentação, selecione Fazer experimento para entrar na próxima etapa, selecione Positivo, Ratos, Tempo 5 min para entrar na próxima etapa e selecione Tempo de conta: 10s, Velocidade: 10rpm.
    2. Em seguida, coloque os ratos na pista de corrida e comece o teste clicando em Executar depois que eles ficarem firmes. Ajuste o estado de execução de cada execução para ON. Treine cada rato uma vez por 5 minutos e, em seguida, comece a realizar o teste três vezes.
    3. Após o treinamento, coloque os ratos bebês na pista de corrida com haste rotativa. Depois que estiver estável, clique em Executar e ajuste o estado de execução para ON. Ao final de 5 min, selecione Data para registrar o tempo e a velocidade de cada rato caindo da pista de corrida rotarod pela primeira vez, ou seja, os dados de tempo de execução.
  2. Utilizar o teste de falha do pé20,21 para avaliar a função motora do equilíbrio do membro torácico direito dos grupos Sham, Controle e Tratamento no61º dia após o nascimento.
    1. Coloque os ratos bebês na extremidade inicial da escada horizontal e grave um vídeo deles cruzando-a até a outra extremidade (100 cm de comprimento e a distância entre cada escada é de 2 cm). Após uma sessão de treinamento, execute o teste formal três vezes para cada rato em um intervalo de 5 minutos.
    2. Observe o membro torácico direito quando o animal cruza a escada usando a reprodução em baixa velocidade para fazer uma pontuação, conforme mostrado no padrão de pontuação (Tabela 2).

7. Western blotting

  1. Realize a análise de western blotting das amostras de tecido conforme descrito anteriormente26.
    NOTA: A quantidade de lisado foi determinada de acordo com o tamanho do bloco de tecido. Os anticorpos utilizados foram os seguintes: anticorpo primário anti-hormônio do crescimento (0,5 μg [0,5 ng/pista]); anticorpo anti-receptor do hormônio do crescimento (1/1000); anticorpo anti-beta actina de referência interna (1/2000) para anticorpos primários; Cabra anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) para anticorpo secundário.

8. Detectando a força da mão

  1. Use o dispositivo usado para detectar a força de manipulação na mão usada para massagem. Encaixe o dedo usado para massagear o rato bebê com o chip sensor do dispositivo e ligue o botão Liga / Desliga .
  2. Conecte a interface do disco rígido que armazena o software do testador manual ao computador e digite o endereço IP dedicado do testador manual na caixa de entrada URL .
  3. Instale o cliente SpringVR no computador, clique para entrar na interface de coleta e selecione o Padrão de Dedo no canto inferior direito para testar a força de manipulação.
  4. Selecione a opção Pressão e clique em Iniciar para começar a registrar a força manual do operador durante a operação. O software registrará automaticamente a intensidade da manipulação e gerará uma tabela de dados no disco local onde os dados no nome do arquivo PressureSensor serão encontrados.

9. Estatísticas de dados

NOTA: O software SPSS26.0 foi usado para análise estatística, o Graphpad Prism9.0.0 para a produção do gráfico de barras e o Image J para análise do valor de cinza das bandas de proteínas.

  1. Analisar e apresentar todos os dados como média ± desvio padrão (Média ± DP).
    NOTA: O padrão do teste foi α = 0,05, e P ≤ 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. O teste de Fisher foi utilizado porque os dados foram analisados por análise de variância e normalidade e conformaram-se às características de distribuição normal e homogeneidade de variância.

Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A manipulação seletiva da coluna vertebral pode promover o ganho de peso corporal em ratos infantis com paralisia cerebral.
Durante o tratamento, o peso corporal foi medido nos dias pós-natais 3, 14, 28, 42 e 61 (Figura 4, Tabela 3). No terceiro dia após o nascimento, o peso corporal do grupo Sham foi de 5,53 ± 0,035 g, e o peso corporal do grupo Controle foi de 3,15 ± 0,43 g. O peso corporal do grupo Tratamento foi de 4,42 ± 0,13 g, e não foi significativamente diferente do dos grupos Sham e Controle antes da modelagem.

No dia 14 pós-natal, o peso corporal do grupo Sham foi de 35,97 ± 1,019 g, o peso corporal do grupo Controle foi de 28,00 ± 0,7403 g e o peso corporal do grupo Tratamento foi de 33,78 ± 3,705 g. Não houve diferença significativa no peso corporal entre os grupos Tratamento e Simulação. O peso do grupo Tratamento em comparação com o grupo Controle foi estatisticamente significativo (P < 0,01).

No28º dia após o nascimento, o peso corporal do grupo Sham foi de 104,9 ± 3,534 g, o peso corporal do grupo Controle foi de 80,35 ± 6,767 g e o peso corporal do grupo Tratamento foi de 96,73 ± 7,638 g. O grupo Tratamento foi comparado com o grupo Controle, e foi estatisticamente significativo (P < 0,01).

No dia 42 pós-natal, o peso corporal do grupo Sham foi de 194,1 ± 4,333 g, o peso corporal do grupo controle foi de 138,0 ± 6,029 g e o peso corporal do grupo tratamento foi de 173,9 ± 5,433 g. Houve diferença estatisticamente significativa no peso corporal entre os grupos Tratamento e Controle (P < 0,0001).

No dia 61 pós-natal, o peso corporal do grupo Sham foi de 321,5 ± 5,675 g, o peso corporal do grupo controle foi de 230,3 ± 5,198 g e o peso corporal do grupo tratamento foi de 268,9 ± 15,22 g. P < 0,0001 foi considerado estatisticamente significativo. Houve uma diferença estatisticamente significativa no peso corporal entre os grupos Tratamento e Controle em P < 0,0001.

A manipulação seletiva da coluna vertebral pode melhorar a função efetiva do equilíbrio motor da paralisia cerebral.
No 61ºdia após o nascimento, após o término do tratamento, foi realizado o teste de fadiga rotarod. O primeiro tempo de queda de cada grupo foi de 296,1 ± 1,65 s no grupo Sham, 102,7 ± 7,73 s no grupo Controle e 220,1 ± 8,04 s no grupo Tratamento. Houve diferença significativa entre os grupos Sham e Controle (P < 0,0001). A diferença entre o grupo Tratamento e o grupo Controle foi estatisticamente significativa (P < 0,0001), e a diferença entre o grupo Tratamento e o grupo Sham foi estatisticamente significativa (P < 0,0001) (Figura 5, Tabela 4)

No61º dia após o nascimento, após o término do tratamento, os escores de Falha no Pé dos grupos Sham e Controle foram de 5,53 ± 0,03 e 3,15 ± 0,43, respectivamente. O escore do grupo Tratamento, 4,42 ± 0,13, foi significativamente menor do que o do grupo Sham (P < 0,0001). A pontuação do grupo Tratamento foi significativamente maior do que a do grupo Controle (P < 0,0001). Em comparação com o grupo Tratamento e o grupo Sham, a diferença foi estatisticamente significativa (P < 0,0001) (Figura 6, Tabela 5).

A manipulação seletiva da coluna vertebral pode regular o nível de secreção do hormônio do crescimento na paralisia cerebral.
Amostras de tecido foram coletadas no dia pós-natal 32, e o hipotálamo de ratos com paralisia cerebral foi selecionado para Western blot, e os anticorpos primários e secundários correspondentes foram selecionados: Os anticorpos usados foram anticorpo primário anti-hormônio do crescimento, anticorpo anti-receptor do hormônio do crescimento, anticorpo anti-beta actina de referência interna para anticorpos primários e anti-RabbitIgG H & L (HRP) de cabra (1/10000) para anticorpo secundário. A manipulação seletiva da coluna vertebral pode promover o crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral, regulando a expressão do hormônio do crescimento (GH) e do receptor do hormônio do crescimento (GHR) (Figura 7, Tabela 6)26.

Promover o crescimento e o desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral pode melhorar o conteúdo de serotonina e norepinefrina no hipocampo, melhorando assim a capacidade de aprender e a memória27.

A manipulação seletiva da coluna vertebral pode efetivamente melhorar a temperatura do ponto de acupuntura local (Figura 8, Tabela 7).
Imagens térmicas infravermelhas foram usadas para detectar a temperatura da área de acupuntura local antes e depois do tratamento no grupo de tratamento. Verificou-se que a temperatura foi mantida em 32,92 ± 0,55 °C antes do tratamento, 36,32 ± 0,15 °C imediatamente após o tratamento e 35,32 ± 0,28 °C 2 min após o tratamento. A temperatura foi de 34,61 ± 0,17 °C 5 min após o término do tratamento e 34,28 ± 0,60 °C 10 min após o término do tratamento. As diferenças foram estatisticamente significativas em comparação com a temperatura imediata antes do final do tratamento e a área de acuponto local 2 min, 5 min e 10 min após o tratamento (P < 0,05). Após a manipulação seletiva da coluna vertebral, a temperatura da área do ponto de acupuntura local no grupo de tratamento foi aumentada e mantida até certo ponto.

figure-results-1
Figura 1: Reflexo de endireitamento. (A) Representação esquemática do experimento do reflexo de endireitamento. O teste do reflexo de endireitamento foi realizado no4º dia após o nascimento (segundo dia após a modelagem) para verificar o sucesso da modelagem. (B) Gráfico de barras do teste do reflexo de endireitamento em cada grupo (n = 6, média ± DP). Nota: ns indica P > 0,05 e sem diferença estatística. indica um P < 0,0001, indicando uma diferença altamente significativa. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

figure-results-2
Figura 2: Manipulação seletiva da coluna vertebral. (A) Manuseio de filhotes antes da manipulação. Os ratos bebês foram colocados na palma da mão do operador e mantidos em silêncio, que era o ambiente do acampamento. (B) Representação da manipulação seletiva da coluna vertebral. Pressione e amasse os músculos de ambos os lados da coluna. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

figure-results-3
Figura 3: Mapa de pontos de acupuntura nas costas de rato humano versus SD. (A) Humano e (B) rato SD. C7: sétima vértebra cervical; GV14: Dazhui (GV14), localização: entre a sétima vértebra cervical e a primeira vértebra torácica, linha média dorsal; T3: terceira vértebra torácica; BL13: Feishu (BL13), localização: entre as duas costelas abaixo da terceira vértebra torácica; T5: quinta vértebra torácica; BL15: Ponto Xinshu, localizado entre os dois lados da costela inferior da quinta vértebra torácica; T7: sétima vértebra torácica; BL17: Ponto de Geshu, localização: costelas inferiores e inferiores da sétima vértebra torácica; BL18: Ponto de Ganshu, localização: costelas inferiores e inferiores da sétima vértebra torácica; T11: décima primeira vértebra torácica; GV6: Ponto de Jizhong, localizado entre o décimo primeiro e o décimo segundo processo espinhoso da vértebra torácica; BL20: Ponto de Pishu, localizado entre as duas costelas abaixo da décima segunda vértebra torácica; L2: segunda coluna lombar; GV4: Mingmen (GV4), localização: a linha mediana dorsal, a depressão sob o segundo processo espinhoso lombar; BL23: Ponto Shenshu, localizado em ambos os lados da segunda coluna lombar. GV20: Baihui (GV20), localização: osso parietal mediano; GV16, ponto Fengfu, localização: depressão dorsal da articulação occipito-atlantoaxial atrás da crista occipital. A localização dos pontos de acupuntura no corpo humano é altamente consistente com a localização dos pontos de acupuntura em animais a partir da posição anatômica. O ponto de resposta anormal estava próximo ao ponto de projeção da superfície corporal inervada. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

figure-results-4
Figura 4: Gráfico de barras da medida do peso em cada grupo (n = 6, Média ± DP). Nota: ns P >0,05, sem diferença estatística; **P < 0,01, ***P < 0,001,****P < 0,0001, a diferença foi estatisticamente significativa. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

figure-results-5
Figura 5: Gráfico de barras do tempo da primeira gota do teste Roat-rod em cada grupo (n = 6, média ± DP). Nota: ****P < 0,0001, a diferença foi estatisticamente significativa. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

figure-results-6
Figura 6: Gráfico de barras dos escores de falta do pé em cada grupo (n = 6, média ± DP). Nota: ****P < 0,0001, a diferença foi estatisticamente significativa. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

figure-results-7
Figura 7: Bandas de Western blot do GH e do receptor de GH. O Western blot foi usado para detectar a secreção do hormônio do crescimento no nível biológico molecular em cada grupo, e o efeito da manipulação seletiva da coluna vertebral no hormônio do crescimento foi observado. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

figure-results-8
Figura 8: Monitoramento de temperatura antes e depois do tratamento. (Painel superior) Imagens térmicas tiradas por um termovisor infravermelho. A temperatura (°C) da área de acupuntura local foi registrada por um termovisor infravermelho antes e após o tratamento com tuina. (A) Antes do tratamento com tuina. (B) Temperatura imediatamente no final do tratamento. (C) Temperatura do ponto de acupuntura local 2 min após o tratamento. (D) Temperatura do ponto de acupuntura local 5 min após o término do tratamento. (E) temperatura do ponto de acupuntura local 10 min após o tratamento. (Painel inferior) Gráfico de barras do monitoramento da temperatura antes e após o tratamento (n = 3, Média ± DP). *P < 0,05, P < 0,01, * * * * *P < 0,001, * * * *P < 0,0001, a diferença é estatisticamente significativa. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

GrupoNúmero de casos (n)Reflexo(s) de endireitamento
Farsa60,77 ± 0,10
Controle619,00 ± 2,04*
Tratamento619.77 ± 0.55#

Tabela 1: Estatísticas de tempo do reflexo de endireitamento em ratos infantis com paralisia cerebral (Média ± DP; n = 6). Os filhotes de cada grupo foram submetidos ao teste do reflexo de endireitamento no4º dia após o nascimento (2º dia após a modelagem) para verificar se o modelo foi bem-sucedido. * Comparado com o grupo Sham, P < 0,0001; # em comparação com o grupo Controle, P < 0,0001.

PontuaçãoPadrão para avaliação
1Quando o rato jovem é colocado na escada horizontal, o pé escorrega ao suportar o peso, afetando a caminhada
2Quando o rato jovem é colocado na escada, o pé escorrega ao suportar o peso, mas não afeta a caminhada
3Quando o rato jovem é colocado na escada horizontal, o rato move o pé rapidamente para o próximo degrau da escada com peso
4Quando o rato jovem é colocado na escada horizontal, o rato coloca o pé parcialmente e se move pela escada carregando peso
5Quando o rato jovem é colocado na escada horizontal, o rato coloca o pé em um degrau e rapidamente se move para outro degrau
6Quando o rato jovem é colocado na escada horizontal, o rato coloca as almofadas das patas corretamente e suporta totalmente o peso do corpo

Tabela 2: Tabela padrão de pontuação do teste de falha do pé

Hora (Dia)Número de casos (n)Grupo
FarsaControleTratamento
Pág. 368,52 ± 0,278,60 ± 0,088,45 ± 0,28D
Pág. 14635,97 ± 1,0128,00 ± 0,74*33,78 ± 3,70Ñ
Pág. 286104,9 ± 3,5380,35 ± 6,76*96,73 ± 7,63ñ
Pág. 426194,1 ± 4,33138,0 ± 6,02*173,9 ± 5,43#D
Pág. 616321,5 ± 5,67230,3 ± 5,19*268,9 ± 15,22#D

Tabela 3: Resultados do teste de peso de cada grupo (Média ± DP) (g). Nota: Ñ Comparado com o grupo Controle, P < 0,01; ° Em comparação com o grupo Sham, P < 0,01; à Em comparação com o grupo Controle, P < 0,001; * Em comparação com o grupo Sham, P < 0,0001; # Comparado com o grupo Controle, P < 0,0001; D Em comparação com o grupo Sham, P < 0,0001.

GrupoNúmero de casos (n)Roat-rod/time/s
Farsa6296,1 ± 1,65
Controle6102,7 ± 7,73*
Tratamento6220,1 ± 8,04#D

Tabela 4: Teste Rotarod de ratos infantis em cada grupo (Média ± DP) (s). Nota: * Comparado com o grupo Sham, P < 0,0001; # Comparado com o grupo Controle, P < 0,0001; D Em comparação com o grupo Sham, P < 0,0001.

GrupoNúmero de casos (n)Pontuação de falta de pé
Farsa65,53 ± 0,03
Controle63,15 ± 0,43*
Tratamento64,42 ± 0,13#D

Tabela 5: Os escores de falta do pé de cada grupo (Média ± DP). Nota: * Comparado com o grupo Sham, P < 0,0001; # Comparado com o grupo Controle, P < 0,0001; D Em comparação com o grupo Sham, P < 0,0001.

GrupoGHGHR
Farsa2,325 ± 0,8301,469 ± 0,265
Controle1,563 ± 0,070#1,563 ± 0,070Ñ
Tratamento2,471 ± 0,956*2,471 ± 0,956

Tabela 6: Dados de valor cinza da banda de Western blot do hormônio do crescimento e do receptor do hormônio do crescimento (n = 10). GH:* A comparação pareada entre o grupo Tratamento e o grupo Controle (P = 0,020 < 0,05) mostrou diferença estatisticamente significativa; # A comparação pareada entre o grupo Sham e o grupo Controle (P = 0,022 < 0,05) mostrou diferença significativa; A comparação pareada entre o grupo Tratamento e o grupo Sham não mostrou significância estatística (P = 0,076 > 0,05); GHR: e a comparação em pares entre o grupo Tratamento e o grupo Controle (P = 0,024 < 0,05) mostrou diferença significativa; Ñ A comparação pareada entre o grupo Sham e o grupo Modelo (P = 0,021 < 0,05) mostrou diferença estatisticamente significativa; A comparação pareada entre o grupo Tratamento e o grupo Sham não mostrou significância estatística (P = 0,085 > 0,05).

Tempo de terapiaNúmero de casos (n)Temperatura
Antes do tratamento332,92 ± 0,55
Imediatamente336,32 ± 0,15*
Após 2 minutos335.32 ± 0.28#
Após 5 minutos334,61 ± 0,17Ñ
Após 10 min334.28 ± 0.60Dà

Tabela 7: Resultados do monitoramento de temperatura antes e depois do tratamento (± média) (°C). Nota: * Em comparação com aqueles antes do tratamento, P < 0,0001; # Comparado com o anterior ao tratamento, P < 0,001; D Comparado com 0 min após o tratamento, P <0,001; Ñ Em comparação com antes do tratamento, P < 0,01; à Em comparação com o pré-tratamento, P < 0,05.

Discussão

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Como a isquemia e a hipóxia são importantes fatores patogênicos da paralisia cerebral, o método internacionalmente reconhecido de estabelecer o modelo de paralisia cerebral é combinado com a hipóxia para preparar o modelo de paralisia cerebral 16,28,29,30. Quando a paralisia cerebral se desenvolve, causa atraso global no desenvolvimento, incluindo peso e função motora, que podem estar relacionados ao nível de secreção do hormônio do crescimento31. A manipulação seletiva da coluna vertebral foi usada para tratar ratos infantis com paralisia cerebral. O peso corporal foi monitorado durante o tratamento, e testes comportamentais como o teste Rotarod, escore de falha do pé e hormônio do crescimento foram realizados. A temperatura dos pontos de acupuntura locais foi observada antes e após o tratamento. Após o estabelecimento do modelo de isquemia-hipóxia, o rato infantil com paralisia cerebral perdeu peso. Ainda, com a extensão da massagem, verificou-se que o ganho de peso do grupo Tratamento foi significativamente melhor do que o do grupo Controle. Também tinha vantagens óbvias na regulação da secreção do hormônio do crescimento. Esses resultados indicam que a manipulação seletiva da coluna vertebral pode efetivamente melhorar o crescimento e o desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. Além disso, como a artéria carótida comum esquerda foi usada para estabelecer o modelo de isquemia e coagulação combinada com hipóxia, deve haver danos ao córtex esquerdo, levando ao comprometimento da função motora. Após o tratamento, utilizamos o teste Rotarod e o escore de Foot-fault para detectar a capacidade comportamental de ratos lactentes com paralisia cerebral 32,33,34. Verificou-se que a função motora de ratos com paralisia cerebral melhorou após manipulação seletiva da coluna vertebral35. A manipulação seletiva da coluna vertebral pode efetivamente melhorar o crescimento, o desenvolvimento e a função motora de ratos infantis com paralisia cerebral.

A massagem tradicional chinesa é baseada em pontos de acupuntura e no sistema de meridianos. O projeto deste experimento é principalmente observar a influência da massagem tradicional chinesa no crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral. O tratamento de massagem é realizado principalmente no meridiano da bexiga da primeira e segunda linhas laterais do pé-taiyang e no meridiano Du, mas diferente da acupuntura, há uma localização clara do ponto de estimulação. A massagem é um tipo de estimulação facial em que os dedos do operador são usados para operação abdominal, e a superfície de contato tem uma certa faixa de área, um diâmetro de cerca de 1,0 cm circular. Os meridianos também têm um certo alcance; no entanto, a superfície de contato com o dedo humano é mais larga do que a área de acupuntura do rato SD. Isso significa que há um procedimento operacional inevitável em alguns locais sem pontos de acupuntura. Portanto, não definimos um grupo de massagem não meridiana separadamente como controle ao atribuir os grupos para este estudo.

A massagem seletiva da coluna vertebral seleciona a coluna e os músculos de ambos os lados da coluna para estimulação durante a operação, o que pode aliviar espasmos musculares locais, promover a circulação sanguínea local e melhorar a função da área de inervação correspondente para obter o efeito de alívio do meridiano e colaterais e regulação e tratamento geral. Ele incorpora totalmente a integração do conceito holístico da medicina tradicional chinesa, a teoria dos meridianos da medicina tradicional chinesa e o princípio da inervação do nervo espinhal, e leva em consideração o todo ao realizar o tratamento local da paralisia cerebral8.

No procedimento, o método de massagem na coluna e os músculos e ligamentos em ambos os lados do tratamento, ou seja, o meridiano Du e o meridiano da bexiga das primeiras e segundas linhas laterais de estimulação da massagem do pé-taiyang, podem desempenhar um papel na conexão dos pontos de acupuntura das costas, medula espinhal e cérebro. Portanto, quando realizamos operações manipulativas nos pontos posteriores de um rato bebê, podemos estimular os pontos traseiros e meridianos a correr qi e sangue, regular as funções das vísceras do corpo e, assim, afetar as funções da medula espinhal e do cérebro para promover o crescimento e desenvolvimento do rato infantil. No geral, estimulando o meridiano Du e o meridiano da bexiga da primeira e segunda linhas laterais do pé-taiyang, o Yang de todo o corpo pode ser mobilizado e a resistência geral a doenças do corpo pode ser melhorada, o que reflete o conceito geral da Medicina Tradicional Chinesa 16,26,35,36,37,38. O meridiano Du se origina da parte inferior do abdômen do corpo humano e atinge o topo da cabeça ao longo da coluna, regulando o Yang qi do corpo humano36. O meridiano da bexiga de Foot-Taiyang corre principalmente ao longo de ambos os lados do vaso governador, e os pontos back-shu de cinco órgãos zang estão localizados na primeira linha lateral do meridiano da bexiga Foot-Taiyang, envolvidos no tratamento de doenças dos órgãos zangfu39,40. Os meridianos e colaterais são divididos em colaterais flutuantes, colaterais minúsculos e regiões cutâneas. Portanto, quando realizamos o procedimento na pele posterior de um rato infantil com paralisia cerebral, podemos operar na direção dos meridianos e estimular efetivamente colaterais flutuantes, colaterais minúsculas e regiões cutâneas. Portanto, ao estimular os pontos de acupuntura e meridianos a executar o qi e o sangue, a função das vísceras do corpo é regulada e resulta no ganho de peso dos filhotes8.

Encontramos pontos de reação semelhantes a cordas no meridiano da bexiga urinária do pé-taiyang nas costas de crianças com paralisia cerebral, e a termografia infravermelha foi usada para detectar a temperatura anormal de alguns pontos de acupuntura. Combinado com o princípio da inervação do nervo espinhal, observamos que esses pontos de reação estavam próximos aos pontos de projeção na superfície da inervação do nervo, o que também é consistente com o princípio da ressecção seletiva da raiz nervosa espinhal para o tratamento da paralisia cerebral (Figura 3)41. Os pontos de acupuntura infundem meridianos, qi e sangue e conectam a superfície do corpo e os órgãos zang-fu42,43. Portanto, no tratamento de ratos infantis com paralisia cerebral, a manipulação seletiva da coluna vertebral é usada para operar os pontos de acupuntura nas costas, ativando os pontos de acupuntura locais, desbloqueando os meridianos, qi e sangue, e os pontos de acupuntura estão em um estado sensível ao calor44. Após a operação e tratamento, uma certa temperatura ainda pode ser mantida.

Usar o método de giro no membro direito pode aliviar o espasmo do tecido muscular local, diminuir os meridianos locais e melhorar a disfunção local. Por fim, optamos por realizar massoterapia na cabeça porque a cabeça é a cabeça de todo o Yang, onde convergem o qi da essência e o sangue dos cinco órgãos zang-fu. O tratamento desta parte pode reconciliar Yin e Yang e alcançar o efeito de reabilitação geral16,18. Em conclusão, a manipulação seletiva da coluna vertebral pode efetivamente melhorar o peso corporal, a função motora e o hormônio do crescimento de ratos infantis com paralisia cerebral para promover o crescimento e o desenvolvimento.

Ainda existem alguns pontos importantes a serem observados durante a operação. Em primeiro lugar, deve-se notar que o rato bebê deve se adaptar à temperatura da palma da mão e a condição de agitação é estável antes do tratamento. Os operadores precisam usar luvas descartáveis para evitar o abandono de ratos fêmeas devido a anormalidades após contato direto com a pele dos operadores. Antes da operação, os operadores devem ser treinados uniformemente em suas manipulações e podem operar após passar na avaliação. Aqui, usamos um testador de manipulação específico para testar para garantir a padronização da operação. Como observamos mudanças de peso durante o crescimento em ratos infantis com paralisia cerebral, a manipulação deve ser verificada regularmente. Ao pressionar e amassar, a pressão para baixo deve ser vertical e a força deve ser de leve a pesada, estável e contínua para que a sensação de estimulação possa atingir totalmente o tecido profundo do corpo. Não use de violência rápida. A faixa de amassamento deve ser pequena e grande, e a força deve ser leve e pesada primeiro. A faixa de amassamento deve ser pequena e grande, e a força deve ser leve e pesada primeiro. A operação do método de amassamento precisa atingir a camada muscular e ligamentar. A força manual foi de 1,77 ± 0,54 N quando monitorada pelo testador manual. Em contraste, apenas a superfície da pele é tratada quando a fricção é realizada. Além disso, a pele de ratos infantis com paralisia cerebral é delicada e a operação inadequada pode causar danos à pele.

Como um tratamento externo da medicina tradicional chinesa, a manipulação seletiva da coluna vertebral é um complemento eficaz para os métodos de tratamento existentes da paralisia cerebral e é um método de tratamento diversificado da paralisia cerebral. Considera o tratamento geral e local, que pode proporcionar às crianças com paralisia cerebral uma reabilitação abrangente e pode trazer melhores benefícios econômicos e efeitos sociais para a família e a sociedade das crianças. No entanto, esta técnica também apresenta algumas deficiências porque os operadores têm diferentes entendimentos e domínio da técnica, o grau de unidade da técnica é baixo, o desvio do efeito terapêutico pode ocorrer e o efeito curativo não é exato. O próximo passo é fazer com que a manipulação atinja um padrão uniforme. Embora tenhamos confirmado que a manipulação seletiva da coluna vertebral afeta positivamente o crescimento e desenvolvimento de ratos infantis com paralisia cerebral e pode desempenhar um papel terapêutico regulando a homeostase inflamatória, seu mecanismo de ação sobre a neuroplasticidade e regeneração da substância branca ainda precisa ser estudado.

Devido à certeza do efeito curativo e da teoria científica da manipulação seletiva da coluna vertebral, baseada na teoria da operação da manipulação seletiva da coluna vertebral, esse conjunto de manipulações pode ser estendido para tratar outras doenças pediátricas, como retardo de crescimento infantil, retardo do desenvolvimento da linguagem, etc. Fornecer ideias de pesquisa enriquece o sistema de tratamento para a maioria dos profissionais médicos e pesquisadores. Portanto, este artigo é propício para popularizar e aplicar a técnica.

Divulgações

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores não têm conflitos de interesse financeiros ou outros concorrentes neste trabalho.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabalho foi apoiado pelo Programa Geral da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82374614), o Projeto Biomédico Principal do Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Yunnan (202102AA100016), o Projeto Principal Conjunto de Pesquisa Básica Aplicada do Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Yunnan - Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan (201901AI070004), Apoiado pelo Laboratório Chave de Acupuntura, Moxabustão e Massagem para Prevenção e Tratamento de Encefalopatia em Faculdades e Universidades da Província de Yunnan (2019YGZ04), Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Yunnan - Projeto Juvenil do Programa de Pesquisa Básica da Província de Yunnan (202101AU070002), Programa de Pós-Graduação do Fundo de Pesquisa Científica do Departamento de Educação da Província de Yunnan, (2023Y0433); Fundação de Pesquisa Científica do Departamento de Educação da Província de Yunnan, (2023Y0462).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Placas de 96 poçosBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determinação da concentração de proteína
Anticorpo anti-beta ActinaAbacmAb8227Diluição: 1/2000
Anticorpo anti-hormônio do crescimentoAbacmAb1268820,5 µ g (0,5 ng/lane)
anticorpo anti-receptor do hormônio do crescimentoAbacmAb202964Diluição: 1/1000
Microscópio de operação básicaShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101A artéria carótida comum foi isolada sob microscópio durante
a modelagem Desenvolvedor BCABiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determinação da concentração
de proteínaSistema de imagem de quimioluminescênciaShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Imagem de bandas de proteínas
Marcador de cor de carga direta BeijingKangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Máquina automática de gelo de neveHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023
de substrato luminescente ECL para fabricação de geloBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConverter imagens latentes em filme exposto em imagens visíveis
Banho-maria termostático aquecido eletricamenteTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIOs ratos jovens foram ressuscitados após modelagem Balanças
eletrônicasKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002O peso corporal dos ratos jovens foi medido
Alemão pequeno branco branco coagulação caneta hemostatoHaohangL55× W125× H37Foi usado para coagular a artéria carótida comum esquerda
LuvaJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ / 320684 YZYL001-2017Para operação de massagem
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Solução eletroforética, configurar o fluido de transferência
Goat Anti-RabbitIgG H& L (HRP) AbacmAb6721Diluição: 1/10000
Máquina de água ultra-pura de laboratório inteligenteChongqing huachuag water treatment engineering co., LTDN / AFiltração (15 L)
IsofluranoShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198A anestesia foi mantida por indução em ratos jovens
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Software de análise de imagem infravermelha
Moedor de tecido de alta velocidade de baixa temperaturaWuhan Servicebio technology CO., LTDSKZ3F20200191Moagem de tecido
MetanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configurar o fluido de transferência
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 552BREspectrofotômetro
microplaca de espectro de Multiskan de eletroforese de 233193TECANSparkA absorbância e concentração de proteína tecidual foram detectadas
Luvas inteligentes com sensor de pressãoJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveÉ usado para medir a força manipulativa da
membrana PVDFMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Centrífuga refrigeradaHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrífuga
Pesquisa termovisor três em umFOTIRC226S (384 x 288)Medição de temperatura
RIPA lisadoBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Tecido lítico
SHA-CA display digital oscilador termostático de banho-mariaChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CARatos jovens foram usados em hipóxia
Aparelho rotarod de fadiga de seis ratosShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703A função motora CP foi detectada
Leite em pó desnatadoGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Confinamento líquido
SPF alimentação reprodutoraSPF (Pequim) biotecnologia co., Ltd.A1EC30005A1S4285266Ratos fêmeas lactantes foram alimentados com
ração de manutençãoSPF (Pequim) biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285267Os filhotes foram alimentados após o desmame
Placa cirúrgicaShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002A mesa de operação modelo foi estabelecida em ratos jovens
TS-200 Agitador orbitalHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SFixação em gel
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Configurar TBST 
Máquina de anestesia portátil ZS-MVZHONGSHI SCIENCE & TECNOLOGIAZS-MV-IA anestesia foi induzida e mantida em animais experimentais
Kit de do operador

Referências

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