O envenenamento escorpiônico é um problema de saúde pública em vários países tropicais e subtropicais. Tityus serrulatus Lutz e Mello, 1922 (escorpião amarelo brasileiro) são responsáveis por aproximadamente 150.000 casos de envenenamento por ano no Brasil, dos quais 10% necessitam de tratamento antiofídico para reverter os efeitos do veneno com risco de vida. Portanto, milhares de indivíduos de T. serrulatus são mantidos em condições controladas de cativeiro para extração do veneno, posteriormente utilizado na produção do suprimento nacional de soro antiofídico. O Instituto Butantan é o principal laboratório de fabricação de soro antiofídico do Brasil, fornecendo cerca de 70 mil frascos de soro escorpiônico para o sistema de saúde brasileiro. Assim, os protocolos de criação e as metodologias de extração de veneno são pontos-chave para o sucesso da produção padronizada de veneno em larga escala. O objetivo deste artigo é descrever os protocolos de cativeiro da criação de T. serrulatus , englobando a rotina de criação e os procedimentos de extração do veneno, seguindo boas práticas de fabricação e garantindo o bem-estar animal. Essas práticas permitem a manutenção de até 20.000 animais em cativeiro, com uma rotina de 3.000 a 5.000 escorpiões ordenhados mensalmente de acordo com a demanda de fabricação de soro antiofídico, alcançando uma média de 90% de extração positiva.