Efeitos de diferentes modos de conexão da eletroacupuntura no eletrocardiograma e na descarga nervosa em ratos

Summary

Até agora, não existe um método uniforme para conexão de eletroacupuntura em pesquisas clínicas e fundamentais. Apresentamos um protocolo que tentou comparar os efeitos de diferentes métodos de conexão no eletrocardiograma (ECG) e na descarga neural em ratos para explorar a maneira mais adequada de conectar o instrumento de eletroacupuntura.

Abstract

A eletroacupuntura (EA) é um dos métodos mais comumente usados na acupuntura e tem um bom efeito na dor, depressão, distúrbios do movimento sensorial e outras doenças. A eficácia do EA é influenciada por muitos fatores, como a precisão da seleção do ponto de acupuntura, a duração e o curso do tratamento com EA e os parâmetros do EA. No entanto, raramente foi discutido se os eletrodos positivos e negativos do instrumento EA com pontos de acupuntura em diferentes locais e distâncias têm efeito sobre o efeito curativo. Neste experimento, observamos os efeitos da conexão do instrumento EA a pontos de acupuntura em diferentes posições e distâncias no ECG e na descarga nervosa vaga em ratos e explicamos preliminarmente se o campo elétrico formado por diferentes modos de conexão EA tem efeito sobre a função do corpo. Os modos de conexão da EA neste experimento incluíram os mesmos pontos de acupuntura em ambos os lados do corpo, o mesmo meridiano ou meridiano diferente Os resultados mostraram que quando os pólos positivo e negativo foram conectados aos pontos de acupuntura em ambos os lados do corpo, o registro do ECG e da atividade do nervo vago foi perturbado (os mesmos membros anteriores e posteriores); quando os pontos de acupuntura foram conectados no mesmo lado do corpo, quanto menor a distância entre as duas agulhas, menor o efeito no ECG e no registro da atividade do nervo vago, e o efeito aumentou com o aumento da corrente; quando os pontos de acupuntura estavam na mesma área de acupuntura, o registro do ECG e da atividade do nervo vago não era perturbado se as duas agulhas não formassem um curto-circuito.

Introduction

A eletroacupuntura (EA) é um tipo de terapia de acupuntura para o tratamento de doenças, aplicando a saída de corrente pulsada de um instrumento em pontos meridianos do corpo humano. A EA tem as vantagens de parâmetros de estimulação estáveis e ajustáveis, que podem ser quantificados, cronometrados e economizam trabalho, e tem vantagens especiais no tratamento e pesquisa científica de certas doenças, como o estudo do mecanismo de tratamento para várias neuralgias e anestesia com acupuntura, analgesia com acupuntura e assim por diante¹.

Alguns fatores influenciam a eficácia do EA, como precisão do ponto de acupuntura, duração do tratamento e parâmetros do EA, como forma de onda, intensidade do pulso e frequência. O EA clínico comumente usado é um EA bidirecional, que causa menos danos aos tecidos e interfere menos nas funções fisiológicas normais do corpo humano. Também pode prevenir e curar doenças. Os tecidos humanos são condutores de eletrólitos complexos compostos de água, sais inorgânicos e coloides carregados². Quando o EA é aplicado ao corpo humano, as partículas carregadas no campo elétrico se movem e causam mudanças na concentração e distribuição que afetam a função do corpo humano. Mudanças no movimento, concentração e distribuição de partículas são a base da terapia com EA¹.

Na última década, o número de estudos de EA aumentou para várias doenças ^1,2,3. Em relação à conexão dos eletrodos positivo e negativo da EA, poucos estudos foram realizados para esclarecer isso em detalhes. Durante a EA, os eletrodos positivo e negativo no instrumento EA devem ser conectados a duas agulhas de acupuntura para atuar como estimulação elétrica. Atualmente, os modos comuns são os seguintes: duas agulhas de cada lado do corpo estão conectadas aos mesmos pontos de acupuntura e diferentes pontos de acupuntura no mesmo lado do corpo estão conectados¹. No entanto, a eficácia desses métodos de conexão ainda não foi comprovada. Alguns cientistas estimaram que as duas agulhas de cada lado do corpo não podem ser conectadas aos pólos positivo e negativo; caso contrário, a corrente afetaria a função cardíaca, mas os dois pontos diferentes do mesmo lado do corpo podem ser conectados aos pólos positivo e negativo³. Alguns pesquisadores acreditam que as agulhas de acupuntura que conectam os eletrodos positivo e negativo devem ser usadas na área de acupuntura única para formar estimulação elétrica no ponto de acupuntura para promover a detecção do meridiano².

A eletroacupuntura em vários pontos de acupuntura pode ativar ou inibir a descarga nervosa ^4,5. Muitos estudos explicam o efeito estimulante da EA em Tsusanli (ST36) no nervo vago ^6,7,8. No entanto, esses estudos não elaboraram a conexão da EA e não explicaram as diferenças nos efeitos dos diferentes modos de conexão da EA. Dada a lacuna nesta pesquisa, este estudo usou técnicas eletrofisiológicas para explicar os efeitos de diferentes conexões de EA no ECG e na atividade nervosa. Os resultados fornecem mais evidências para a conexão correta do EA.

Protocol

Este protocolo experimental foi aprovado pela Revisão Ética Padronizada de Animais de Laboratório da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Pequim e foi conduzido em total conformidade com o protocolo experimental (Código de revisão ética: BUCM-2023110901-4046).

1. Animais e agrupamento

1. Animais
   1. Obtenha 48 ratos SPF machos saudáveis (8 semanas de idade) pesando aproximadamente 200-240 g.
      NOTA: Para este estudo, os animais foram fornecidos pela Vital River Company [Número da licença: SYXK (Beijing) 2020-0033].
   2. Abrigue todos os ratos no Centro Experimental Animal da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Pequim. Durante o experimento, certifique-se de que os ratos tenham livre acesso a comida e água.
   3. Manter o ambiente de alimentação com base numa mudança de ritmo circadiano de 12 h e controlar a temperatura ambiente a 23 ± 2 °C.
   4. Mergulhe todos os instrumentos cirúrgicos em álcool 75% e autoclave. Esterilize as salas de manejo de animais com lâmpadas UV.
   5. Realize todas as cirurgias em animais sob anestesia. Anestesie o rato com injeção intraperitoneal de uretano a 20% (1 g/kg) e certifique-se de que o rato continue respirando espontaneamente.
   6. Manter a temperatura corporal do rato a 37 °C com placas termostáticas durante a cirurgia.
   7. Mantenha os olhos do rato úmidos com pomada de eritromicina durante o experimento.
   8. Decapite e mate os ratos sob anestesia no final do experimento e armazene as amostras / amostras conforme necessário.
2. Grupos
   1. Agrupe os ratos aleatoriamente de acordo com os modos de conexão. Distribua 8 ratos para cada grupo aleatoriamente.
   2. Grupo controle (sem acupuntura): Alimente o rato normalmente sem nenhum tratamento.
   3. Grupo A, ponto de acupuntura único no grupo do membro anterior esquerdo: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo ao ponto Quchi e a 3 mm do ponto Quchi, respectivamente (ver Figura 1A). Localize o ponto de Quchi (LI11) na depressão anterior lateral da articulação do cotovelo e insira a agulha perpendicularmente a uma profundidade de ~5 mm após o posicionamento.
   4. Grupo B, dois pontos de acupuntura no grupo do membro anterior esquerdo: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo aos pontos Quchi (LI11) e Waiguan (TE5), respectivamente (ver Figura 1B). Localize o ponto Waiguan (TE5) fora do ponto inferior de 1/6 de dobra do antebraço nas suturas radial e ulnar. Insira a agulha a uma profundidade de 2 mm.
   5. Grupo C, os dois pontos de acupuntura no grupo dos membros anteriores e posteriores esquerdos: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo a Quchi (LI11) e Tsusanli (ST36) (ver Figura 1C). Localize o ponto de Tsusanli (ST36) 5 mm abaixo da cabeça da fíbula e posterolateral ao joelho e insira a agulha perpendicularmente a uma profundidade de ~ 1 cm.
   6. Grupo D, os mesmos pontos de acupuntura em ambos os membros posteriores: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo com Tsusanli bilateral (ST36) (ver Figura 1D).
   7. Grupo E, os mesmos pontos de acupuntura em ambos os membros anteriores: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo ao Quchi bilateral (ver Figura 1E).

2. Conexão de ECG

1. Contenha os ratos em decúbito dorsal após serem completamente anestesiados.
2. Insira agulhas de acupuntura de 1/2 polegada paralelas à pele do punho do membro anterior direito, membro posterior direito e membro posterior esquerdo dos ratos, evitando o músculo.
3. Conecte as alças da agulha aos eletrodos de registro: o eletrodo positivo (branco) no membro anterior direito, o eletrodo negativo (vermelho) no membro posterior esquerdo e o eletrodo de referência (preto) no membro posterior direito do rato (ver Figura 2).
4. Use um gravador de sinal fisiológico para registrar o ECG de superfície padrão da derivação II do membro de ratos em tempo real (taxa de amostragem: 1 KHz, faixa de filtragem: filtro de corte baixo, 200 Hz; filtro de corte alto, 0,8 Hz).

3. Separação do nervo vago e registro dos sinais de descarga vagal

1. Faça uma incisão de 2-4 cm ao longo da linha média do pescoço entre a laringe e o esterno após a fixação supina dos ratos anestesiados.
2. Corte o tronco do nervo vago direito em aproximadamente 1-2 cm após localizar a bainha carotídea direita (contendo a artéria carótida, o nervo vago e a cadeia simpática) (ver Figura 3A).
   NOTA: O nervo simpático está localizado lateralmente à artéria carótida e acompanha o nervo vago. O nervo simpático cervical é fino em comparação com o nervo vago.
3. Conecte o tronco nervoso com um par de eletrodos de gancho de cobre e prenda o eletrodo de referência à incisão para eliminar a interferência. Use solução salina para manter a atividade do nervo vago durante todo o experimento (ver Figura 3B).
4. Cubra a superfície da ferida com óleo mineral para manter o isolamento entre o eletrodo e o músculo.
5. Use um gravador de sinal fisiológico para registrar a descarga nervosa dos ratos em tempo real (taxa de amostragem: 5 KHz, faixa de filtragem: filtro de corte baixo, 100 Hz; filtro de corte alto, 1000 Hz).

4. Intervenção da EA

NOTA: A acupuntura dos ratos após o ECG e a descarga do nervo vago foram estáveis.

1. Conecte as duas alças da agulha separadamente aos clipes de agulha do instrumento EA.
2. Defina a estimulação EA para uma onda quadrada bidirecional com uma largura de onda de 0.3 ms. Defina a intensidade da estimulação para 0.2 mA, a frequência para 10 Hz e o tempo de estimulação para 20 min.
3. Observe as alterações no ECG e na descarga nervosa de ratos sob diferentes modos de conexão da EA em tempo real. Colete os dados por 30 s sem qualquer estimulação, 30 s antes do EA e 30 s após o EA usando o gravador de sinal fisiológico.
4. Registre as mudanças nas frequências cardíacas, formas de onda de ECG e descargas vagais dos ratos usando um software de gravação.

5. Análise estatística dos dados

1. Compare as alterações no ECG e na descarga nervosa em ratos em diferentes modos de conexão EA (antes e depois da EA).
2. Expresse todos os dados experimentais como a média ± erro padrão.
3. Execute o teste t de Student quando os dados passarem no teste de distribuição normal. Realize um teste t de amostras pareadas para comparar as alterações antes e depois da EA e considere p < 0,05 como estatisticamente significativo.

Results

Efeitos de diferentes modos de conexão de EA no ECG em ratos
No grupo Controle, o ECG de ratos normais foi registrado (ver Figura 4A). Verificou-se que as condições basais dos ratos eram significativamente diferentes. A frequência cardíaca dos ratos variou de 258 a 473 bpm (ver Tabela Suplementar 1).

No Grupo A, os dados de registro foram semelhantes aos do grupo...

Discussion

Neste experimento, observamos os efeitos das diferentes formas de conectar os eletrodos positivo e negativo, incluindo a frequência cardíaca, a frequência da atividade do nervo vago e a amplitude de descarga. Os resultados mostraram que quando os pólos positivo e negativo foram conectados a ambos os membros anteriores do corpo, isso afetou a emissão de bioeletricidade. Quando os pólos positivo e negativo foram conectados ao mesmo lado do corpo, quanto mais próxima a distância entre as du...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agulha de Acupuntura	Hwato	N/A
BL-420N gravador de sinal fisiológico	Techman	LAB-0017-0002-CDTM
Instrumento de eletroacupuctura	HANS	200A
Pomada de eritromicina	Shuangji	N/A
Óleo mineral	Solarbio	8012-95-1
Placa termostática	Techman	JR-30