Este protocolo fornece informações técnicas para a reconstrução de vasos usando a técnica do manguito no transplante hepático ortotópico de camundongos.
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Artigo de método
Reconstrução Vascular com a Técnica do Manguito no Transplante Hepático Ortotópico de Camundongo
Neste artigo
Resumo
Resumo
O transplante hepático ortotópico de camundongos é uma metodologia eficaz para investigar os mecanismos subjacentes da isquemia hepática e lesão de reperfusão. No entanto, os desafios técnicos representam uma barreira para a utilização desse valioso modelo experimental e a transmissão dessas habilidades para a próxima geração. O aspecto mais desafiador desse procedimento é a reconstrução vascular, incluindo a veia porta (VP), a veia cava inferior infra-hepática (IHIVC) e a veia cava inferior supra-hepática. O uso de manguitos de plástico, em vez de suturas, permite uma reconstrução mais suave da VP e da IHIVC. Os vasos são reconstruídos anexando um manguito feito de um cateter intravenoso à ponta do vaso do enxerto e interpondo o manguito no vaso receptor. Os dois aspectos mais cruciais são visualizar adequadamente o lúmen interno do vaso e evitar o uso de força excessiva. Nosso objetivo é fornecer uma visão geral técnica das reconstruções vasculares usando a técnica do manguito na cirurgia do receptor. Espera-se que essas dicas técnicas para a técnica do manguito ajudem os microcirurgiões a facilitar a reconstrução vascular e avançar em suas pesquisas.
Introdução
O transplante hepático ortotópico de camundongo (MOLT) é um método experimental eficaz relatado pela primeira vez em 19911. Este modelo experimental, que utiliza camundongos geneticamente modificados e vários reagentes de pesquisa, desempenhou um papel fundamental na investigação de lesões de isquemia e reperfusão quentes e frias. No entanto, a alta complexidade técnica do modelo tem dificultado o desenvolvimento da medicina básica para transplante hepático2. O MOLT envolve três etapas principais: (1) recuperação do fígado do camundongo doador, (2) cirurgia na mesa dorsal e (3) implantação do fígado no receptor. Dentre e....
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Protocolo
O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Experimentação Animal da Universidade de Kyoto. O estudo utilizou camundongos C57BL/6, com idade superior a 10 semanas e peso entre 25 g e 30 g, obtidos de uma fonte comercial (ver Tabela de Materiais). Todos os animais foram anestesiados com isoflurano a 2,5% (seguindo protocolos aprovados institucionalmente), mantidos em condições específicas livres de patógenos, e todos os procedimentos experimentais foram conduzidos em conformidade com o Regulamento de Experimentação Animal da Universidade de Kyoto. Os instrumentos apropriados utilizados para o estudo estão listados na Tabela de Materiai....
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Resultados
A reconstrução da VP é bem-sucedida quando, ao despinçar a veia porta, não há tortuosidade e o fígado é perfundido uniformemente. O tempo anepático deve ser inferior a 20 min, pois tempos anepáticos superiores a 25 min aumentam o risco de mortalidade em camundongos. A reconstrução da IHIVC é considerada bem-sucedida se não houver regurgitação sanguínea do enxerto.
O armazenamento do enxerto em temperaturas frias por 1 h com solução de preservação de órgãos resulta em um nível sérico de alanina.......
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Discussão
Aprender a reconstrução vascular é o aspecto mais desafiador para alcançar o MOLT bem-sucedido. A qualidade do manguito influencia significativamente na dificuldade de reconstrução, dado o pequeno tamanho dos camundongos5. Este artigo fornece um protocolo detalhado para preparação, fixação e reconstrução do manguito.
Embora não haja grandes diferenças em relação aos relatos anteriores em relação à preparação e conexão do manguito 2,5
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Divulgações
Nenhum autor tem conflitos de interesse a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela pesquisa básica JST 2022 (Sociedade Japonesa de Transplante).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cateter intravenoso de 16 G | TERUMO | SR-FF2032 | IHIVC manguito |
| 20 G cateter intravenoso | TERUMO | SR-FF1651 | PV manguito |
| 8-0 trança de seda | Natsume Seisakusho | CR9-80B2 | 8-0 seda |
| Belzer UW Solução de Armazenamento a Frio | Astellas | Organ preservando fluido | |
| Bulldog clamp | B BRAUN | FB329R | Bulldog clamp |
| C57BL/6 camundongos | Oriental Bio Service | ||
| Viatris | Anesthesic | ||
| Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm | F.S.T | 11253-20 | Micropinças retas |
| Micro Serrefine Aplicador de Grampo com Trava | F.S.T | 18056-14 | Aplicador de clipe de vaso |
| Micro Serrefines | F.S.T | 18055-4 Clipe de | vaso |
| No.11 Lâminas sobressalentes | FEATHER Safety Razor | 11 | Lâminas |
| Tesoura oftálmica, cabo redondo | B BRAUN | FD103R | Microscissor |
| Recipiente de plástico retangular | Daiso | de 10 cm de comprimento, 15 cm de largura e 6 cm de altura | |
| F.S.T | 00649-11 | Micropinças curvas | |
| SZX7 | Olympus | SZX7 | |
| Microscópio Vise | Niigataseiki | 00505351 | Uma ferramenta mecânica para fixar o fórceps Pean na mesa |
Referências
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
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Reimpressões e permissões
