Artigo de método

O efeito da decocção anti-fadiga sobre os comportamentos e indicadores sorológicos em um modelo de rato de fadiga central

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DOI:

10.3791/66481

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12 de abril de 2024

 ,  ,  ,  , 
1School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar os efeitos da decocção anti-fadiga (AFD) na fadiga central em ratos modelados pelo método de plataforma múltipla modificado (MMPM), monitorando suas respostas comportamentais e marcadores sorológicos.

Resumo

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da Decocção Anti-fadiga (AFD) contra a fadiga central, observando os comportamentos e indicadores sorológicos de ratos modelados pelo método de plataforma múltipla modificado (MMPM) após intervenção medicamentosa. Medidas de força de preensão foram utilizadas para avaliar a força muscular de ratos. O teste de campo aberto foi utilizado para avaliar o comportamento semelhante à ansiedade, enquanto o teste do labirinto aquático de Morris foi realizado para avaliar a função de memória dos ratos. Após as avaliações comportamentais, amostras de soro de ratos foram coletadas para medir as concentrações de corticosterona (CORT) e ácido lático (LAC). A concentração de LAC foi determinada pelo método colorimétrico, enquanto a concentração de CORT foi medida pelo método de ensaio imunoenzimático (ELISA). Em comparação com o grupo de controle em branco, seguindo a modelagem MMPM, os ratos exibiram reduções significativas na força de preensão e capacidade de memória prejudicada. A análise sérica revelou níveis aumentados de LAC e CORT nos ratos do grupo modelo. O AFD pode reverter visivelmente essas mudanças adversas até certo ponto. Esses achados destacam os efeitos positivos da AFD e da coenzima Q10 nas habilidades físicas e cognitivas e alterações nos níveis séricos de biomarcadores de ratos com fadiga central.

Introdução

A fadiga é um fenômeno multifacetado e inespecífico, tipicamente caracterizado por sentimentos de cansaço e redução da capacidade funcional1. Pode ser classificada como fadiga periférica, que ocorre no nível muscular, ou fadiga central, originada no sistema nervoso central 3,4. A fadiga central prolongada pode contribuir significativamente para problemas psicológicos, incluindo ansiedade, depressão, sofrimento psicológico e problemas de memória 5,6. Apesar de causar sofrimento significativo, há escassez de medicamentos específicos direcionados à fadiga central7. Embora o metilfenidato, um estimulante do sistema nervoso central, possa proporcionar alívio temporário, seus efeitos colaterais, como insônia e palpitações, podem piorar o quadro 8,9.

Em aplicações clínicas anteriores, a medicina tradicional chinesa mostrou resultados promissores no tratamento da fadiga central, incorporando abordagens como decocções orais, acupuntura e Tai Chi 10,11,12. A decocção anti-fadiga (AFD) é uma fórmula eficaz desenvolvida pelo Professor Li Feng com base em uma extensa experiência clínica e demonstrou efeitos terapêuticos positivos. É composto por Astragalus membranaceus (Huangqi), Fructus aurantii (Zhiqiao), Fructus crataegi (Shanzha), Schisandra chinensis (Wuweizi), Angelica sinensis (Danggui) e Dendrobium officinale (Shihu), na proporção de 15: 15: 10: 5: 7: 8. A decocção AFD foi concentrada a 110 mL após fervura com dez vezes o volume de água deionizada por 1 h três vezes. Em um estudo anterior, estabelecemos um modelo animal de fadiga central usando o Método de Plataforma Múltipla Modificada (MMPM) e confirmamos a manifestação de fadiga central por meio de avaliações comportamentais e de neurotransmissores do sistema nervoso central13. Neste estudo, utilizamos a intervenção AFD no modelo animal de fadiga central para avaliar seus efeitos farmacológicos por meio de avaliações comportamentais.

Protocolo

Este trabalho de pesquisa segue as diretrizes éticas para o bem-estar animal. As condições adequadas de cuidado e alojamento foram mantidas para garantir a saúde e o bem-estar dos animais, e todos os procedimentos foram aprovados pelo comitê institucional de cuidados e uso de animais da Universidade de Medicina Chinesa de Pequim (BUCM-4-2019041504-2094).

1. Criação e agrupamento de animais

NOTA: Ao longo do estudo, o bem-estar animal foi mantido seguindo os princípios dos 3Rs (Redução, Refinamento e Substituição).

  1. Para este estudo, selecione 54 ratos Wistar livres de patógenos específicos (FPS) de seis semanas de idade com peso corporal de 210 g ± 10 g.
  2. Alojar os ratos no biotério em condições controladas: temperatura de 23 ± 2 °C, humidade relativa de 50% e um ciclo claro/escuro de 12 h/12 h. Deixe os animais se aclimatarem por 3 dias antes do experimento.
  3. Divida aleatoriamente os ratos em um grupo de controle em branco (rotulado como "a" nas figuras), um grupo modelo (rotulado como "b" nas figuras), um grupo de baixa dose de AFD (AFD-L; rotulado como "c" nas figuras), um grupo de dose média de AFD (AFD-M; rotulado como "d" nas figuras), um grupo de alta dose de AFD (AFD-H; rotulado como "e" nas figuras), um grupo de coenzima Q10 (CoQ10; rotulado como "f" nas figuras), com 9 ratos em cada grupo, usando um método de tabela de números aleatórios.

2. Modelação e intervenção

NOTA: O estabelecimento desse modelo foi baseado na literatura anterior13.

  1. Use a caixa de modelagem feita por você mesmo (fornecida pelo Laboratório de Neuroimunologia da Universidade de Medicina Chinesa de Pequim).
    NOTA: A caixa de modelagem tem um comprimento de 110 cm, uma largura de 60 cm e uma altura de 40 cm. O fundo é fixado com 15 plataformas circulares (diâmetro 6,5 cm, altura 8 cm). O espaçamento horizontal entre as duas plataformas é de 13 cm e o espaçamento vertical é de 10 cm. A caixa de campo aberto tem comprimento, largura e altura de 100 cm, 100 cm e 35 cm, respectivamente. O fundo é preto e a parede é azul escura. A parte inferior da caixa de campo aberto é dividida em 25 seções quadradas com dimensões de 25 cm, com os 9 quadrados centrais designados como zona central e os 16 quadrados externos como zona periférica.
  2. Certifique-se de que o nível da água na piscina esteja aproximadamente 1 cm acima da plataforma e que a temperatura da água seja mantida em 23 ± 2 °C.
  3. Após o início do experimento, coloque o rato na caixa coberta com tela de arame na superfície e pressione-o com pesos para evitar que os animais escapem. Suspenda alimentos suficientes sob a tela de arame e forneça água potável.
  4. Coloque o rato no grupo de modelos na caixa às 18:00 todos os dias e retire-o às 8:00 do dia seguinte. Após cada sessão de modelagem, seque o rato e coloque-o de volta em uma gaiola limpa. Execute a modelagem continuamente por 21 dias.
  5. Durante o experimento, limpe a caixa, troque a água diariamente e forneça comida suficiente.
  6. No15º dia de modelagem, administrar os agentes via lavagem gástrica às 10:00 todos os dias por um período contínuo de 7 dias.
    1. Administre o grupo AFD-L na dosagem de 3,24 g / kg / d, o grupo AFD-M a 6,48 g / kg / d e o grupo AFD-H a 12,96 g / kg / d. Administre a coenzima Q10 na dosagem de 10 mg / kg / d.
    2. Ao administrar os agentes através da lavagem gástrica, prepare uma suspensão misturando a dose necessária em água destilada. O volume de administração para cada grupo é de 10 mL/kg. Dê aos grupos de branco e modelo a mesma quantidade de água destilada.
      NOTA: As doses administradas aos ratos foram calculadas pelo método da área de superfície corporal (BSA) e convertidas de acordo com as doses terapêuticas normais para humanos14.

3. Avaliações comportamentais

  1. Força de preensão de ratos
    1. Segure a cauda do rato e coloque-a suavemente no medidor de força de preensão.
    2. Puxe o rato para trás com uma força uniforme, garantindo que o sistema de computador registre corretamente os dados.
      NOTA: Antes dos experimentos, os técnicos foram treinados para lidar com os ratos para aplicar força de forma consistente.
    3. Repita esse processo três vezes e calcule a média das três medições como o valor final da força de preensão.
      NOTA: Para minimizar erros causados por fatores humanos, deixe uma pessoa conduzir todo o experimento.
  2. Teste de campo aberto em ratos
    1. Conduza os experimentos de comportamento em um ambiente mal iluminado e silencioso. Antes do início de cada experimento, coloque os ratos na sala de comportamento por 1 h de adaptação.
    2. Certifique-se de que três experimentadores estejam envolvidos na operação e use roupas pretas ao colocar ou guiar os ratos. Ao longo do experimento, certifique-se de que os experimentadores não cruzem os limites da caixa com seus corpos ou braços.
    3. Abra o software de análise.
      1. Clique em Arquivo no menu superior e selecione Novo experimento para criar um novo projeto. Nas configurações da arena, escolha a forma correspondente à arena para onde o rato se moverá.
      2. Usando o mouse, desenhe a arena na tela. Calibre a câmera e salve as configurações da arena.
    4. Permita que um segundo experimentador, vestido com roupas pretas, segure o rato pelas costas, coloque-o sequencialmente no centro da área designada e retire rapidamente a mão.
    5. Inicie uma nova gravação. Defina a duração da gravação para 5 min.
    6. Após o período de observação de 5 minutos, remova rapidamente o rato da caixa de campo aberto e limpe suas fezes. Use álcool 75% para limpar a caixa de campo aberto.
    7. Repita o processo para todos os ratos.
    8. Observe e registre (1) a distância total percorrida, (2) o número de cruzamentos da zona central: número de vezes que os membros do rato se cruzam nos quadrados da grade central e (3) o tempo gasto na zona central, ou seja, o tempo gasto pelo rato nos 9 quadrados da grade central.
  3. Labirinto aquático de Morris em ratos
    1. Conduza os experimentos de comportamento em um ambiente mal iluminado e silencioso. Antes de iniciar cada experimento, coloque os ratos na sala de comportamento por 1 h de adaptação.
      NOTA: Os ratos foram submetidos a 4 dias de treinamento; No5º dia, o experimento formal começou.
    2. Certifique-se de que o nível da água na piscina esteja aproximadamente 1 cm acima da plataforma e que a temperatura da água seja mantida em 23 ± 2 °C.
    3. Certifique-se de que três experimentadores estejam envolvidos na operação e use roupas pretas ao colocar ou guiar os ratos.
    4. Divida a piscina de água em quatro quadrantes. Fixe uma plataforma no meio do segundo quadrante. Prenda pedaços de papel de cores e formatos diferentes no centro das paredes de cada quadrante.
    5. Abra o software de análise.
      1. Clique em Arquivo no menu superior e selecione Novo experimento para criar um novo projeto. Nas configurações da arena, escolha a forma correspondente à arena para onde o rato se moverá.
      2. Usando o mouse, desenhe a arena na tela. Calibre a câmera e salve as configurações da arena.
    6. Durante o período de aprendizado, deixe outro experimentador colocar sequencialmente o rato de frente para a parede da piscina em cada quadrante. A ordem de colocação é diferente a cada dia da seguinte forma:
      1. No primeiro dia, coloque o rato na seguinte ordem: primeiro quadrante, segundo quadrante, terceiro quadrante, quarto quadrante.
      2. No segundo dia, coloque o rato na seguinte ordem: segundo quadrante, primeiro quadrante, quarto quadrante, terceiro quadrante.
      3. No terceiro dia, coloque o rato na seguinte ordem: quarto quadrante, terceiro quadrante, segundo quadrante, primeiro quadrante;
      4. No quarto dia, coloque o rato na seguinte ordem: terceiro quadrante, primeiro quadrante, quarto quadrante, segundo quadrante.
    7. Se o rato não conseguir encontrar a plataforma dentro de 120 s, guie-o até a plataforma e deixe-o permanecer nela por 10 s.
    8. Depois de completar o experimento diário, deixe o terceiro experimentador limpar a água do corpo do rato usando uma toalha e seque-a com um secador de cabelo. Execute isso em outra sala para evitar interferência de ruído.
    9. No experimento formal, remova a plataforma e coloque o rato no terceiro quadrante. Registre a trajetória de movimento do rato em 120 s.
    10. Observe e registre (1) o tempo gasto no quadrante onde a plataforma estava localizada e (2) a latência de escape, que é o tempo que leva para o rato chegar à plataforma para entrar na piscina de água pela primeira vez.

4. Análise bioquímica sérica

  1. Processamento de amostras
    NOTA: Um jejum de comida, mas não água, foi permitido no dia anterior à amostragem.
    1. Anestesiar os ratos usando uma solução de pentobarbital sódico a 2% (p / v) por injeção intraperitoneal a 0,5 mL / 100 g de peso corporal.
    2. Após a anestesia completa, colete o sangue da aorta abdominal usando um vaso de coleta de sangue.
    3. Colocar todo o sangue à temperatura ambiente (RT) durante 2 h, depois centrifugar a 4 °C, 1522,38 x g durante 20 min para obter o soro. Aliquote e armazenar o soro a -80 °C para utilização posterior.
  2. Ensaio de ácido láctico (LAC)
    NOTA: A concentração de LAC foi determinada pelo método colorimétrico.
    1. Misturar a solução de reserva enzimática e a solução de diluição enzimática numa proporção de 1:100 em volume para preparar uma solução de trabalho enzimática.
    2. Prepare o revelador de cores de acordo com as instruções do kit.
    3. Em um tubo em branco, adicione 20 μL de água destilada.
    4. Em um tubo padrão, adicione 3 mmol / L solução padrão.
    5. Em um tubo de medição, adicione 20 μL da amostra.
    6. Adicione 1 mL de solução de trabalho enzimática e 0,2 mL de revelador de cor a cada tubo. Incubar a 37 °C durante 10 min e, em seguida, adicionar 2 ml da solução de paragem.
    7. Transfira 200 μL da solução de reação para uma placa ELISA de 96 poços. Meça o valor OD a 530 nm. Calcule a concentração de LAC com base nos valores de OD.
      NOTA: Concentração LAC = (valor OD do poço de amostra - valor OD do poço em branco)/(valor OD do poço padrão - valor OD do poço em branco) x concentração da solução padrão x fator de razão de diluição.
  3. Ensaio de corticosterona
    NOTA: Os kits ELISA adquiridos comercialmente são usados para medir a concentração de cortisona no soro de ratos.
    1. Antes do experimento, diluir os anticorpos conjugados com peroxidase de rábano (HRP) e solução de lavagem para criar uma solução de trabalho. Adicione amostras padrão com concentrações de 0 nmol/L, 5 nmol/L, 15 nmol/L, 30 nmol/L, 60 nmol/L, 120 nmol/L e 240 nmol/L à placa revestida em volumes de 20 μL.
    2. Adicionar as amostras de soro (20 μL) aos respectivos poços, seguido da adição de 200 μL de conjugado enzimático. Agite bem o prato e incube-o por 60 min.
    3. Descarte a solução de reação e lave a placa três vezes com a solução de lavagem (400 μL de cada vez). Depois de secar a placa em papel absorvente, adicione 100 μL do reagente de cor do substrato a cada poço.
    4. Incubar a placa em RT durante 15 min e, em seguida, adicionar 50 μL da solução de paragem a cada alvéolo.
    5. Meça os valores de OD de cada poço a 450 nm. Use os valores de OD dos poços padrão para gerar uma curva padrão e, em seguida, use-a para calcular as concentrações dos poços de amostra.

5. Análise estatística

  1. Realize análises estatísticas usando um aplicativo de software apropriado. Represente os dados de medição como média ± desvio padrão.
  2. Se os dados seguiram uma distribuição normal e mostraram homogeneidade de variâncias, realizar um teste t independente.
  3. Se os dados seguiram uma distribuição normal, mas não tiveram igualdade de variâncias, execute um teste t aproximado.
  4. Se os dados não seguirem uma distribuição normal, use testes não paramétricos para comparação.
  5. Use o teste qui-quadrado de Pearson para análise de dados de enumeração/contagem.
    NOTA: Optou-se por um nível de significância de α = 0,05, onde P < 0,05 é referido como estatisticamente significativo.
  6. Gere as figuras usando um aplicativo de software apropriado.

Resultados

Em comparação com o grupo controle, os ratos do grupo modelo exibiram reduções significativas na força de preensão. No entanto, a administração de AFD em doses baixas, médias e altas foi capaz de reverter esse efeito de maneira dose-dependente, conforme mostrado na Figura 1. Da mesma forma, o medicamento controle positivo também demonstrou a capacidade de reverter as alterações da força de preensão (Figura 1).

No teste de campo aberto, os ratos do grupo modelo apresentaram reduções na distância total percorrida, no número de travessias da zona central e na duração do tempo de permanência da zona central. A administração de AFD em doses baixas, médias e altas foi capaz de reverter esses efeitos de maneira dose-dependente, conforme ilustrado na Figura 2. Ao mesmo tempo, o medicamento controle positivo também foi capaz de aliviar os sintomas (Figura 2). Mapas de calor mostrando as frequências de trajetória sobrepostas dos experimentos de campo aberto de cada grupo podem ser observados na Figura 3.

Durante o teste do labirinto aquático de Morris, os ratos do grupo modelo exibiram latência de escape prolongada e tempo de natação reduzido no quadrante alvo, indicando menor capacidade de busca espacial. A droga de controle positivo, a coenzima Q10, foi capaz de reverter as alterações mencionadas. Digno de nota, AFD em doses baixas, médias e altas reverteu a latência de escape prolongada, conforme ilustrado na Figura 4. Mapas de calor representativos das trajetórias dos ratos no experimento do labirinto aquático para cada grupo podem ser observados na Figura 5.

Em termos de níveis séricos, os ratos do grupo modelo apresentaram níveis elevados de LAC e CORT. No entanto, a administração de AFD em doses baixas, médias e altas reverteu essas alterações de maneira dose-dependente semelhante ao medicamento controle positivo, conforme mostrado na Figura 6.

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Figura 1: Resultados da força de preensão de cada grupo. A: O grupo controle; b: o grupo de modelos; c: o grupo AFD-L; d: o grupo AFD-M; e: o grupo AFD-H; f: o grupo CoQ10. *p < 0,05 vs. grupo controle; #p < 0,05 vs. o grupo modelo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 2: Experimento de campo aberto e medição do nível de atividade locomotora. (A) A distância total percorrida. (B) O número de travessias da zona central. (C) A duração da zona central permanece. a: o grupo controle; b: o grupo de modelos; c: o grupo AFD-L; d: o grupo AFD-M; e: o grupo AFD-H; f: o grupo CoQ10. *p < 0,05 vs. grupo controle; #p < 0,05 vs. o grupo modelo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 3: Mapas de calor mostrando as frequências de trajetória sobrepostas dos experimentos de campo aberto de cada grupo. a: o grupo controle; b: o grupo de modelos; c: o grupo AFD-L; d: o grupo AFD-M; e: o grupo AFD-H; f: o grupo CoQ10. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 4: Resultados do experimento do labirinto aquático de Morris em cada grupo. (A) A latência de escape. (B) O tempo de natação no quadrante alvo. a: o grupo controle; b: o grupo de modelos; c: o grupo AFD-L; d: o grupo AFD-M; e: o grupo AFD-H; f: o grupo CoQ10. *p < 0,05 vs. grupo controle; #p < 0,05 vs. o grupo modelo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 5: Mapas de calor representativos das trajetórias de ratos no experimento do labirinto aquático de Morris para cada grupo. a: o grupo de controle; b: o grupo de modelos; c: o grupo AFD-L; d: o grupo AFD-M; e: o grupo AFD-H; f: o grupo CoQ10. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 6: Resultados dos níveis séricos de LAC e CORT em cada grupo. (A) Os níveis séricos de LAC. (B) Os níveis séricos de CORT. a: o grupo controle; b: o grupo de modelos; c: o grupo AFD-L; d: o grupo AFD-M; e: o grupo AFD-H; f: o grupo CoQ10. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Discussão

A AFD é composta por Astragalus membranaceus (Huangqi), Fructus aurantii (Zhiqiao), Fructus crataegi (Shanzha), Schisandra chinensis (Wuweizi), Angelica sinensis (Danggui) e Dendrobium officinale (Shihu), que se acredita ter a função de revigorar o baço e dispersar a energia estagnada do fígado na medicina tradicional chinesa. Além disso, todas essas ervas são consideradas como possuidoras de um perfil de segurança favorável e, portanto, são comumente usadas como alimento na China. Na prática clínica anterior, a DFA mostrou boa eficácia no tratamento de pacientes com fadiga central, mas o mecanismo terapêutico específico ainda precisa de mais investigações. Portanto, pretendemos validar os efeitos do AFD na melhoria da fadiga central por meio de experimentos com animais e elucidar ainda mais os mecanismos subjacentes.

O estabelecimento de modelos animais que representem com precisão a patogênese da doença e as características clínicas é essencial para a realização de pesquisas farmacológicas15. Nossa equipe estabeleceu anteriormente um modelo de rato de fadiga central por privação de sono, o que resulta em redução da força de preensão, ansiedade e memória prejudicada13. No entanto, não detectamos indicadores sorológicos relevantes no estudo anterior. Concomitantemente, a observação de alterações significativas nos biomarcadores séricos associados à fadiga reforça a validade desse modelo animal como uma representação confiável da fadiga central. Neste estudo, diferentes doses de AFD foram usadas para intervir no modelo de fadiga central de ratos, com a coenzima Q10 (uma droga conhecida por melhorar a fadiga através do aumento do metabolismo energético) 16 como controle positivo. A avaliação comportamental é uma etapa fundamental no estudo de experimentos com animais relacionados à fadiga. Assim, é imperativo que os pesquisadores garantam a precisão desse procedimento17. Quando um teste de campo aberto foi realizado, os animais foram colocados em uma plataforma fechada, com o objetivo de avaliar as mudanças em seu humor observando as atividades relevantes18,19. O labirinto aquático de Morris é um tipo de experimento que obriga os animais de laboratório a nadar e aprender a encontrar plataformas escondidas na água, que é usado principalmente para avaliar a capacidade de aprendizado e memória20,21. Os modelos de fadiga central apresentaram mudanças comportamentais acentuadas e, consequentemente, empregamos os dois testes para observar e avaliar as mudanças no comportamento dos ratos. Os resultados demonstram que os ratos modelo MMPM exibem comportamento semelhante à ansiedade conspícua e capacidades prejudicadas de aprender e memorizar, o que se alinha com os resultados de pesquisas anteriores13.

O estresse pode levar à ativação excessiva do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HPA), resultando na superprodução de glicocorticóides22. Elevações de longo prazo no cortisol podem infligir danos irreversíveis aos neurônios, o que é um fator contribuinte significativo para o desenvolvimento de insônia, depressão e ansiedade23,24. Esses processos estão intimamente relacionados à ocorrência e desenvolvimento de fadiga central, por isso acredita-se que o cortisol sérico esteja associado ao grau de fadiga25. Modelos animais de fadiga central demonstraram elevação pronunciada nos níveis de corticosterona, que pode ser efetivamente revertida por meio de intervenção com medicamentos relevantes26. Os resultados deste estudo indicam que a AFD pode efetivamente suprimir o aumento da corticosterona sérica aumentada pela fadiga central induzida pelo estresse, exibindo um efeito dose-dependente. Esse resultado também explica parcialmente por que o AFD pode melhorar o comportamento semelhante à ansiedade em um modelo de fadiga central em ratos.

O lactato já foi considerado um subproduto dos músculos esqueléticos. Quando a intensidade do exercício aumenta, as demandas de energia superam a capacidade aeróbia, levando a uma maior dependência do metabolismo anaeróbio para a produção de ATP27. O acúmulo de ácido lático é responsável por estimular os receptores químicos nos músculos, e essa excitação é transmitida ao cérebro e se torna um sinal de dor e fadiga28. Alguns fatores patológicos também induzem a superprodução de lactato, ativando assim esse arco reflexo. Pesquisas clínicas recentes descreveram a estreita relação entre o nível de ácido lático no soro e o grau de fadiga29. Em nossa observação anterior, os ratos MMPM mostraram uma elevação significativa no soro em comparação com o controle em branco, potencialmente indicando uma forte correlação entre o aumento dos níveis de lactato e a fadiga muscular experimentada em pé em uma pequena plataforma. A aplicação de AFD é capaz de reduzir notavelmente os níveis de ácido lático no soro coletado de ratos WMPV até certo ponto, melhorando sequencialmente o grau de fadiga.

Em conclusão, este estudo demonstrou que o AFD reverteu efetivamente o declínio da força de preensão, aliviou a ansiedade e melhorou a memória, potencialmente por meio de sua capacidade de reduzir os níveis de corticosterona e melhorar o metabolismo do lactato. Espera-se que este artigo ofereça um modelo para o estudo experimental da MTC contra a fadiga central in vivo. A limitação do estudo é que não há uma etapa avançada para explorar a sustentação de mecanismos moleculares relacionados. No futuro, continuaremos a explorar os efeitos da AFD no sistema nervoso central e investigar seus mecanismos relacionados.

Divulgações

Os autores declaram não haver conflitos de interesse em relação à publicação deste artigo. Não temos relações financeiras ou pessoais com organizações ou indivíduos que possam influenciar inadequadamente nossa pesquisa.

Agradecimentos

Todos os autores gostariam de expressar sua gratidão pelo apoio da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (NO. 81874428) e do projeto de pesquisa da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Pequim (NO.2023-JYB-JBZD-001).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Kit de teste de corticosteronaEmpresa alemã DRGEIA4164Etapa 4.3
Software Curve Expert 1.4CurveExpertProfessional Versão 1.4Para cálculo em ensaio de corticosterona
Software Ethovision Noldus Information Technology, HolandaSoftware de análise versão 15e sistema de rastreamento de vídeo
Dispositivo de teste de força de preensãoZS-ZLPequim Zhongshi Di ChuangEtapa 3.1
Kit de teste de ácido lácticoInstituto de Pesquisa de Bioengenharia Nanjing JianchengA019-2-1Etapa 4.2
Métodode plataforma múltipla modificadoLaboratório de Neuroimunologia da Universidade de Medicina Chinesa de PequimNenhumEtapa 2.1
Dispositivo de teste do labirinto aquático MorrisBeijing Zhongshi Di Chuang empresa limitadaZS-MorrisEtapa 3.3
Dispositivo de teste de campo abertoBeijing Zhongshi Di Chuang empresa limitadaZS-KCEtapa 3.2
PrismGraphPad Versão 8Para gerar figuras
SPSS 26.0IBMVerson 26.0Análise estatística 
Ratos Wistar SiPeiFu (Pequim) Biotecnologia Co., Ltdnúmero de licença: SCXK (Jing) 2019-0010
Empresa limitada de

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